發(fā)布時間：2020-08-03 06:57

【摘要】：背景:銀屑病是臨床上常見的慢性皮膚病,嚴重影響患者身心健康。中醫(yī)藥對本病的認識有著悠久的歷史,在歷史演進中逐漸形成了從血論治的觀點,并得到越來越多醫(yī)家的認可,血熱證是從血論治中最為常見的證型。地槐消銀方在臨床上應(yīng)用多年,取得了較好的療效,制作成顆粒劑后更加方便。目前關(guān)于中藥治療銀屑病的機制探討較多,磷脂酰肌醇-3-羥激酶/蛋白激酶B(phosphatidylinositol 3-hydroxy kinase/protein kinase B,PI3K/Akt)信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑是當(dāng)前的研究熱點,不但在腫瘤的發(fā)病中有重要作用,在銀屑病發(fā)病中也有重要作用。前期研究顯示地槐消銀顆�？赡芡ㄟ^本通路發(fā)揮作用。本研究主要驗證地槐消銀顆粒治療銀屑病血熱證的臨床療效,并基于PI3K/Akt通路在動物和細胞層面進行機制研究。方法:臨床研究:采用隨機對照的觀察方法,納入符合銀屑病血熱證的患者72例,隨機分為觀察組和對照組。記錄患者的一般資料、皮損PASI評分、中醫(yī)證候評分。觀察組給予地槐消銀顆�？诜�,對照組給予百癬夏塔熱片口服,兩組均外用醫(yī)用凡士林。觀察期為56天,治療前后記錄PASI評分及中醫(yī)證候評分。觀察地槐消銀顆粒和百癬夏塔熱片對于銀屑病血熱證PASI評分、中醫(yī)證候評分、療效等的影響,并計算各自的臨床有效率。動物實驗研究:通過外涂咪喹莫特建立誘導(dǎo)的銀屑病樣BALB/c小鼠模型,以地槐消銀顆粒灌胃(分高、中、低劑量組),酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)檢測小鼠外周血清中細胞因子IL-2、IL-6、IL-8、IFN-γ、TNF-α的含量,Western blotting及RT-PCR檢測皮損組織PI3K、Akt蛋白及mRNA的表達水平,探討地槐消銀顆粒對銀屑病樣小鼠皮損、細胞因子、通路蛋白及基因等的影響。細胞實驗研究:應(yīng)用表皮生長因子(EGF)刺激人角質(zhì)形成細胞(human adult low calcium temperature,HaCaT)24小時,添加PI3K/Akt信號通路的特異性阻滯劑LY294002干預(yù)1小時,制備實驗所需的細胞模型。再以地槐消銀顆粒(分高、中、低劑量組)分別干預(yù)經(jīng)EGF刺激和加入抑制劑的HaCaT細胞模型,觀察地槐消銀顆粒對經(jīng)EGF刺激后的及加入抑制劑的HaCaT細胞增殖、凋亡、細胞周期和IL-2、IL-6、IL-8、IFN-γ、TNF-α含量的影響,Western blotting及RT-PCR檢測細胞PI3K、p-Akt、Akt蛋白及PI3K、Akt mRNA的表達水平。結(jié)果:臨床研究:給予觀察組地槐消銀顆粒治療后,最后完成觀察的共66例患者,各33例。觀察組在治療8周后有效率為87.88%,高于對照組的66.67%;其治療后PASI評分明顯低于對照組,有顯著統(tǒng)計學(xué)差異(P0.01);在治療后其中醫(yī)證候改善優(yōu)于對照組,有顯著統(tǒng)計學(xué)差異(P0.01)。動物實驗研究:1.地槐消銀顆�？梢愿纳仆ㄟ^咪喹莫特造模的銀屑病樣小鼠的皮損狀況,組織病理學(xué)表現(xiàn)主要是改善銀屑病表皮增生及真皮血管增生、減輕炎癥反應(yīng)等;2.地槐消銀顆�？梢砸种菩∈笱逯蠭L-2、IL-6、IL-8、IFN-γ、TNF-α的分泌;3.通過對小鼠組織中PI3K mRNA及蛋白的測定,高劑量組效果最為明顯,可以下調(diào)mRNA基因影響蛋白的生成,其發(fā)揮作用是通過PI3K/Akt途徑實現(xiàn),而對Akt mRNA及Akt蛋白均無影響。細胞實驗研究:1.地槐消銀顆�？梢砸种艸aCaT細胞的增殖,加入通道抑制劑LY294002后其作用減弱,其抑制細胞增殖的作用通過PI3K/Akt通路實現(xiàn);2地槐消銀顆�？梢允辜毎至淹贕0-G1或者S期而使細胞無法增殖,同時可以增加細胞晚期凋亡率,這些影響在加入通道抑制劑LY294002后受到明顯抑制;3.通過Western blotting及RT-PCR檢測細胞PI3K、p-Akt、Akt蛋白及PI3K、Akt mRNA的表達水平,得出地槐消銀顆�？梢酝ㄟ^下調(diào)PI3K mRNA水平進而降低PI3K蛋白的水平,加入通道抑制劑后這些效應(yīng)消失。但對Akt蛋白和Akt mRNA均無影響。說明地槐消銀顆粒通過下調(diào)PI3K mRNA水平進而影響PI3K蛋白的水平而發(fā)揮其作用;4.地槐消銀顆�？梢砸种萍毎蜃覫L-2、IL-6、IL-8、IFN-γ、TNF-α的分泌。PI3K/Akt通路在其中可能發(fā)揮了重要作用,這種效應(yīng)明顯體現(xiàn)在IL-2、IL-8、IFN-γ、TNF-α的分泌上,而在抑制IL-6的分泌上可能通過多種途徑發(fā)揮作用;5.地槐消銀顆粒通過PI3K/Akt通路發(fā)生作用,對PI3K基因及蛋白均有影響,并通過這個通路影響細胞因子IL-2、IL-6、IL-8、IFN-γ、TNF-α的分泌水平而發(fā)揮治療銀屑病的作用。結(jié)論:1.地槐消銀顆粒治療銀屑病血熱證療效肯定,能改善患者的皮損嚴重程度并能降低中醫(yī)證候評分,未出現(xiàn)不良反應(yīng)。2.地槐消銀顆�？梢愿纳仆ㄟ^咪喹莫特造模的銀屑病樣小鼠的皮損狀況,其機制是通過下調(diào)PI3K mRNA合成抑制蛋白生成、抑制細胞因子生成等實現(xiàn)的。3.地槐消銀顆�？梢酝ㄟ^PI3K/Akt通路發(fā)揮抑制HaCaT細胞增殖作用,并可以下調(diào)PI3K mRNA、抑制PI3K及pAkt蛋白合成,同時可以抑制多種細胞因子的分泌。綜上所述,地槐消銀顆粒治療銀屑病血熱證臨床療效確切,其具體作用機制可能是通過下調(diào)PI3KmRNA及蛋白合成,同時抑制多種細胞因子的分泌,從而發(fā)揮促進細胞凋亡、抑制增殖的作用。
【學(xué)位授予單位】：北京中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號】：R275.9
【圖文】：

最大年齡為５９歲，平均年齡４２．９１±１１．４７歲，對照組最小年齡２１歲，最大年齡５９歲，逡逑平均年齡４１．１８±９．２丨歲，兩組年齡相比，差異沒有統(tǒng)計學(xué)差異（Ｐ＞０．０５），提示兩組年逡逑齡構(gòu)成比具有可比性，見表２、圖２。逡逑表１兩組臨床病例性別情況逡逑ｍｉ邐例數(shù)（ｎ）邐￣ｋ邐Ｉ逡逑觀察組邐３３邐１４邐＼９￣逡逑對照組邐３３邐１５邐１８逡逑ｍ川逡逑２０逡逑；Ｉ■■國逡逑ＩＩ邐ＩＩ逡逑男邐女逡逑圖ｉ兩組臨床病例性別對比情況逡逑表２觀兩組臨床病例年齡情況（ｘ士ｓ邋）逡逑ｍ＼邐例數(shù)（ｎ）邐年齡（歲）逡逑觀察組邐３３邐４２．９１±１１．４７逡逑對照組邐３３邐４１．１８±９．２１逡逑４７逡逑

２．１．２患者曾經(jīng)治療情況逡逑將兩組的曾經(jīng)用藥情況各例數(shù)進行卡方檢驗比較，（Ｐ＞0．0５），提示兩組患者曾經(jīng)用逡逑藥情況構(gòu)成比具有可比性，見表３、圖３。逡逑表３兩組臨床病例曾經(jīng)治療情況逡逑Ｈ邐ｉｌｌ邋免疫抑制劑類邋維甲酸類邐中藥類邐光化學(xué)療法逡逑（ｎ）邐（ｎ）邐（ｎ）邐（ｎ）邐（ｎ）逡逑觀察組邐５邐７邐４邐３０邐２１逡逑對照組邐８邐６邐３邐２８邐１９逡逑ｙ２邐０．８６２邐０．０９６邐０．邋１６邐０．邋５６９邐０．２５４逡逑Ｐ邐０．３５３邐０．７５７邐０．６８９邐０．４５１邐０．６１４逡逑０經(jīng)治療怙況比較逡逑｜｜邋Ｉ，逡逑ｌ0邐■■邐■■邐■觀察－組逡逑：ｌｌ邋ＩＩ邋Ｉ．邋Ｉ

觀察組３３例患者中，病程最長者１２０個月，最短者１個月，平均２４．４８±３２．９４月，逡逑對照組３３例患者中，病程最長者１２０個月，最短者１月，平均２５．０３±３０．２９月。兩組逡逑對比，不具有統(tǒng)計學(xué)差異（Ｐ＞0．0５），提示兩組在病程構(gòu)成比具有可比性，見表４、圖４。逡逑表４兩組臨床病例病例病程情況（ｘ土ｓ邋）逡逑ＥＪｌ邐例數(shù)（ｎ）邐病程（月）逡逑￣觀察組邐３３邐２４．４８±３２．９４逡逑對照組邐３３邐２５．０３±３０．２９逡逑岕逡逑７０逡逑６０逡逑５０逡逑４０逡逑＿觀察組逡逑３０邐＿對照組逡逑：■邐■逡逑觀察組邐對照組逡逑圖４兩組臨床病例病程情況逡逑２．１．４患者治療前ＰＡＳＩ積分逡逑觀察組治療前ＰＡＳＩ邋ｆ均積分為１５．８０±丨０．７５，對照組治療前ＰＡＳＩ平均積分為逡逑１４．０７±９．４５，兩組比較，沒有統(tǒng)計學(xué)差異，（Ｐ＞０．０５），提示兩組在冶療前ＰＡＳ丨枳分無逡逑明顯差異，具有可比性，見表５、圖７。逡逑表５兩組臨床病例治療前ＰＡＳ１積分情況（ｉ土ｓ邋）逡逑ｍｉ邐例數(shù)（ｎ）邐ＰＡＳ１積分逡逑治療組邐３３邐１５．８０１１０．７５逡逑對照組邐３３邐１４．０７±９．４５逡逑４９逡逑

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本文編號：2779278