【摘要】：目的:利用網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)分析預(yù)測(cè)千金文武湯(QWD)治療糖尿病腎病(DN)的靶點(diǎn)和主要成分,初步揭示QWD干預(yù)DN的作用機(jī)制;建立QWD體內(nèi)外化學(xué)成分的HPLC-ESI/MS方法,對(duì)QWD體外供試品溶液和給藥后大鼠血漿中的化學(xué)成分進(jìn)行鑒定分析。方法:1.通過中藥綜合數(shù)據(jù)庫和文獻(xiàn)獲取QWD的全部化學(xué)成分;使用中藥分子機(jī)制生物信息學(xué)分析工具、STITCH數(shù)據(jù)庫和SwissTargetPrediction網(wǎng)站服務(wù)器根據(jù)三維化學(xué)空間結(jié)構(gòu)相似性預(yù)測(cè)潛在作用靶點(diǎn)。2.通過DrugBank、人類在線孟德爾遺傳數(shù)據(jù)庫、TCMGeneDIT數(shù)據(jù)庫等9個(gè)資源平臺(tái)收集DN相關(guān)靶點(diǎn);將疾病靶點(diǎn)與藥物靶點(diǎn)進(jìn)行映射,得出QWD干預(yù)DN的潛在作用靶點(diǎn)。3.采用Cytoscape軟件回溯靶向藥效靶點(diǎn)的化學(xué)成分和組方藥味。4.利用Cytoscape對(duì)QWD治療DN的全部藥效作用靶蛋白進(jìn)行功能注釋、富集分析,初步揭示QWD干預(yù)DN的作用機(jī)制。5.制備同一制備工藝、統(tǒng)一質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的10批次QWD樣品,作為標(biāo)準(zhǔn)樣品。甲醇超聲萃取標(biāo)準(zhǔn)樣品,得供試品溶液。6.在網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)分析的基礎(chǔ)上,選擇43個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品作為QWD化學(xué)成分定性的比對(duì)化合物。利用LC-MS技術(shù)對(duì)QWD供試品溶液進(jìn)行成分指認(rèn)。選擇C18反相色譜柱,以0.1%甲酸乙腈-0.1%甲酸水溶液作流動(dòng)相,梯度洗脫進(jìn)行組分分離;聯(lián)用電噴霧離子化質(zhì)譜(ESI-MS)在正離子模式下進(jìn)行全掃描。圖譜分析采用提取離子色譜法,首先指認(rèn)混合標(biāo)準(zhǔn)品溶液中的比對(duì)化合物,再以此為參照對(duì)QWD供試品溶液中的部分化合物進(jìn)行初步定性。7.大鼠灌胃QWD標(biāo)準(zhǔn)樣品后取血漿,采用相同的液質(zhì)儀器在相同的分析條件下分別檢測(cè)空白血漿和含藥血漿,并與QWD體外供試品溶液液質(zhì)圖譜比較,初步鑒定QWD在大鼠血漿中移行的原型成分。結(jié)果:1.收集出QWD的化學(xué)成分533個(gè),聚類后歸為5類:黃酮類、苯丙素類、三萜類、甾體及其苷類和有機(jī)酸類;533個(gè)化學(xué)成分靶向2279個(gè)潛在靶點(diǎn)。2.QWD的全部潛在靶點(diǎn)中有64個(gè)靶點(diǎn)參與治療DN。3.組方藥味葛根中的21個(gè)成分為藥效成分,這21個(gè)藥效成分靶向23個(gè)藥效靶點(diǎn),黃芩57個(gè)藥效成分靶向41個(gè)藥效靶點(diǎn),藁本10個(gè)藥效成分靶向11個(gè)治療靶點(diǎn),山藥16個(gè)藥效成分靶向21個(gè)治療靶點(diǎn),五味子82個(gè)藥效成分靶向45個(gè)治療靶點(diǎn),桔梗29個(gè)藥效成分靶向11個(gè)治療靶點(diǎn),升麻12個(gè)藥效成分靶向17個(gè)治療靶點(diǎn),白芷48個(gè)藥效成分靶向42個(gè)治療靶點(diǎn),麥冬28個(gè)藥效成分靶向20個(gè)治療靶點(diǎn)。4.功能分析結(jié)果顯示,分子功能層面顯示QWD可通過轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白、激素、蛋白激酶、蛋白激酶激活劑、磷脂酶C、細(xì)胞因子、銅離子、受體等分子發(fā)揮治療DN作用;細(xì)胞組件層面顯示藥效靶點(diǎn)主要定位于血小板α顆粒和小窩;生物學(xué)過程層面揭示QWD主要通過糾正糖脂代謝紊亂、介導(dǎo)免疫炎癥反應(yīng)、改善血液循環(huán)系統(tǒng)、腎形態(tài)修復(fù)及再發(fā)育、調(diào)節(jié)水鹽、血鈣水平穩(wěn)態(tài)、細(xì)胞凋亡、逆轉(zhuǎn)胰島素抵抗、調(diào)節(jié)活性氧代謝等多個(gè)過程發(fā)揮藥效的;信號(hào)通路層面表明QWD通過復(fù)雜的多條通路,從合成、增殖、分化、轉(zhuǎn)運(yùn)、代謝、應(yīng)答、免疫、分泌、凋亡、活化、遷移等多個(gè)方面對(duì)上皮細(xì)胞、間充質(zhì)細(xì)胞、白細(xì)胞、細(xì)胞因子、胰島細(xì)胞、平滑肌細(xì)胞、成纖維細(xì)胞等產(chǎn)生調(diào)控作用。介導(dǎo)的通路主要包括糖尿病并發(fā)癥AGE-RAGE信號(hào)通路、Ⅱ型糖尿病、HIF-1信號(hào)通路、胰島素抵抗、FoxO信號(hào)通路、流體剪切應(yīng)力和動(dòng)脈粥樣硬化、MAPK信號(hào)通路等。5.制備的10批次QWD標(biāo)準(zhǔn)樣品,在HPLC圖譜中具有相似的特征峰,表明其主要化學(xué)成分穩(wěn)定、一致。6.QWD體外供試品溶液中指認(rèn)出了 13個(gè)化學(xué)成分,分別為葛根素、阿魏酸、異阿魏酸、黃芩苷、桔梗皂苷D、大豆苷元、漢黃芩苷、佛手柑內(nèi)酯、漢黃芩素、五味子醇甲、千層紙素A、歐前胡素和五味子乙素。7.QWD體內(nèi)供試品溶液中指認(rèn)出了 9個(gè)原型成分,包括葛根素、異阿魏酸、黃芩苷、大豆苷元、漢黃芩苷、漢黃芩素、千層紙素A、歐前胡素和五味子乙素。結(jié)論:1.通過網(wǎng)絡(luò)分析發(fā)現(xiàn)白芷、五味子、黃芩在QWD的藥味中治療靶點(diǎn)明確,發(fā)揮抗DN作用途徑廣泛,可以視為方劑的主要藥物;山藥、葛根、麥冬、升麻的藥效作用涵蓋范圍也較廣泛,可以視為復(fù)方中的輔助藥物;桔梗和藁本靶向的靶點(diǎn)和涉及的生物過程最少,主要起協(xié)同促進(jìn)作用,可以視為復(fù)方中的協(xié)同藥物。2.研究表明,運(yùn)用網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)方法能初步闡明QWD治療DN的作用機(jī)制;網(wǎng)絡(luò)分析結(jié)果中的化學(xué)成分、抗DN的藥效成分為QWD物質(zhì)基礎(chǔ)研究提供了一定指導(dǎo);64個(gè)抗DN的潛在藥效靶點(diǎn)為進(jìn)一步開展機(jī)理研究提供了理論和實(shí)驗(yàn)依據(jù)。3.化學(xué)物質(zhì)組研究建立了 QWD體內(nèi)外成分鑒定的HPLC-ESI-MS分析方法。血中移行成分為QWD在體內(nèi)直接發(fā)揮作用的藥效成分,該結(jié)果為QWD的藥效物質(zhì)基礎(chǔ)和作用機(jī)理研究奠定了理論和實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。
【學(xué)位授予單位】：延邊大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號(hào)】：R29
【圖文】：

就目前來說“消渴腎病”是最為合理的糖尿病腎病的中醫(yī)病名，也可逡逑視“消渴腎病”為中醫(yī)、西醫(yī)病名相通過程的產(chǎn)物。逡逑綜上，筆者歸納總結(jié)如下圖１所示。簡(jiǎn)而言之，消渴腎病是消渴逡逑發(fā)展到中后期的并發(fā)癥，糖尿病腎病是糖尿病后期發(fā)展的嚴(yán)重結(jié)果，逡逑消渴腎病等同于糖尿病腎病。逡逑中醫(yī)古籍病名邐現(xiàn)代醫(yī)學(xué)病名逡逑１．邋—ｉ邐—邐＂邋邋邋邋邋——逡逑—邐消渴邐Ｊ４邐糖尿病邐�。义喜∏榘l(fā)展ｊ邐：逡逑■￣一邐腎消邐１，一逡逑ｉ邐１邋ｚＺ逡逑Ｖ－邐內(nèi)消邐＜逡逑；Ｌ：：．．：：：：：：：：：：：．＝＝：：：：：．．．逡逑ｒｐ＝＝＝＝＝＝＝ｎ邐，邐Ｚ逡逑ｍｉ逡逑１邋ｆｉ邐—．邐Ｈ邋，，逡逑ｓ—｜邐下消邐卜逡逑圖１關(guān)系圖逡逑２．研究背景逡逑糖尿病腎�。ǎ模椋幔猓澹簦椋沐澹危澹穑瑁颍铮穑幔簦瑁�，邋ＤＮ）是糖尿病患者中最常見逡逑且嚴(yán)重的遠(yuǎn)期合并癥之一，１型和２型糖尿病均有一定概率并發(fā)ＤＮ，逡逑最終發(fā)展為彌散性或結(jié)節(jié)性腎小球硬化和腎功能衰竭。ＤＮ在我國的發(fā)逡逑病率呈快速增長趨勢(shì)，己成為慢性腎功能衰竭的主要原因之一。由于逡逑２逡逑

含的全部化合物主要分為５類：黃酮類、苯丙素類、三萜類、留體及逡逑其苷類和有機(jī)酸類，盡管復(fù)方中的成分?jǐn)?shù)量龐雜，但大部分具有相似逡逑的化學(xué)母核結(jié)構(gòu)，可歸屬于特定的化合物家族，見圖１．２。逡逑９逡逑

數(shù)據(jù)庫的預(yù)測(cè)靶點(diǎn)信息，共獲得２２７９個(gè)靶點(diǎn)，詳細(xì)信息見附錄Ｂ。利逡逑用Ｃｙｔｏｓｃａｐｅ構(gòu)建藥材－化合物－祀點(diǎn)作用網(wǎng)絡(luò)如附錄Ｃ－Ｅ所示。通過逡逑ＴＢｔｏｏｌｓ構(gòu)建的ＵｐＳｅｔ邋Ｐｌｏｔ結(jié)果顯示（圖１．３）在全部預(yù)測(cè)靶點(diǎn)中，有逡逑４６個(gè)靶點(diǎn)是９味藥材共有的靶點(diǎn)（圖中縱向柱狀圖的綠色柱），值得逡逑注意的是，五味子、白芷兩藥材共同擁有的靶點(diǎn)數(shù)目最多，１７０個(gè)（縱逡逑向柱狀圖第一條黑柱，最高，其下方黃色點(diǎn)－線連接顯示為五味子－白逡逑芷），預(yù)示著兩藥材可能具有某些相同的藥理作用，若兩藥材被應(yīng)用于逡逑同一復(fù)方中，如本研宄中的朝醫(yī)方ＱＷＤ，提示兩藥材在藥理功效上的逡逑協(xié)同促進(jìn)作用之大。根據(jù)圖１．３發(fā)現(xiàn)，每種藥材均與其他藥材共享了逡逑數(shù)目較多的靶點(diǎn)（點(diǎn)線連接部分中的單獨(dú)黑色圓點(diǎn)均出現(xiàn)在較前方），逡逑藁本除外（見圖中紅色圓點(diǎn)

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2756166