【摘要】：的改善作用,并能一定程度增加肌力及肌肉含量。綜上,本課題希望從核受體及其輔助因子SRC-3及PGC-1 α為切入點(diǎn)研究其可能在肌肉代謝中發(fā)揮的作用及其在骨與肌肉代謝相互影響的過(guò)程中發(fā)揮的作用,嘗試為闡明絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松的發(fā)病機(jī)制及骨質(zhì)疏松患者骨與肌肉代謝交互調(diào)節(jié)的詳細(xì)機(jī)理提供理論基礎(chǔ)。并進(jìn)一步研究補(bǔ)腎健脾化瘀方對(duì)骨質(zhì)疏松中骨骼與肌肉代謝異常的協(xié)同干預(yù)效果和作用機(jī)理,證實(shí)中藥防治骨質(zhì)疏松的療效,為臨床采用中醫(yī)藥療法治療骨質(zhì)疏松提供新的理論依據(jù)。下面將對(duì)本課題的研究目的、方法、結(jié)果和結(jié)論進(jìn)行分別闡述:目的探討SRC-3、PGC-1 α在PMOP患者骨與肌肉代謝中的作用及可能聯(lián)系;觀(guān)察補(bǔ)腎健脾化瘀中藥復(fù)方對(duì)去勢(shì)骨質(zhì)疏松大鼠骨與肌肉代謝異常的協(xié)同干預(yù)作用及可能機(jī)制。方法1臨床研究:本研究屬橫斷面研究,以PMOP患者為研究對(duì)象,采集受試者外周血并測(cè)定骨密度、肌力、肌肉含量,通過(guò)酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)等方法,檢測(cè)血清SRC-3和PGC-1 α水平,研究SRC-3和PGC-1 α與患者骨與肌肉代謝水平的相關(guān)性,并探討肌肉功能改變?cè)诮^經(jīng)后骨質(zhì)疏松患者病理過(guò)程中的作用。2動(dòng)物研究:以去卵巢骨質(zhì)疏松大鼠為模型,以中藥補(bǔ)腎健脾化瘀方為工具藥,通過(guò)DXA測(cè)量骨密度、網(wǎng)格實(shí)驗(yàn)測(cè)定肌力、骨與肌肉組織切片檢測(cè)形態(tài)學(xué)、ELISA檢測(cè)外周血、肌肉、骨骼組織中SRC-3、PGC-1 α等蛋白含量,實(shí)時(shí)熒光定量核酸擴(kuò)增檢測(cè)(QPCR)檢測(cè)肌肉中Wnt/β-catnin信號(hào)通路相關(guān)mRNA的表達(dá),蛋白免疫印跡法(Western-blotting)檢測(cè)MAPK通路相關(guān)蛋白表達(dá),探討核受體輔助因子SRC-3、PGC-1 α在去卵巢大鼠骨與肌肉代謝異常中的可能作用及補(bǔ)腎健脾化瘀方對(duì)去卵巢大鼠骨丟失與肌肉代謝異常的干預(yù)作用及可能機(jī)制。結(jié)果1 SRC-3和PGC-1 α在PMOP患者骨組織和血清中的表達(dá)水平及意義1.1 PMOP患者血清SRC-3和PGC-1 α表達(dá)水平與各部位骨密度相關(guān)性53例受試對(duì)象血清SRC-3水平與肌力、腰椎BMD、左股骨頸BMD、左股骨上端BMD正相關(guān),相關(guān)性具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P值均0.01)。血清PGC-1 α水平與肌力、腰椎BMD、左股骨頸BMD、左股骨上端BMD正相關(guān),相關(guān)性具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(血清PGC-1 α水平腰椎BMD相關(guān)性p值均0.05,其余各項(xiàng)p值均0.01)。1.2 PMOP患者肌力、骨密度及體內(nèi)SRC-3和PGC-1 α水平相關(guān)性根據(jù)受試者肌力水平,將之分為肌力正常組(4-5級(jí))與肌力減弱(0-3級(jí))組。肌力正常組共36例,肌力減弱組共17例。兩組之間年齡的差異不具統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。肌力減弱組的血清SRC-3、PGC-1 α水平較肌力正常組為低,差異具有顯著性(p0.01)。肌力減弱組的腰椎BMD較肌力正常組為低,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。(p值分別為0.032,0.018均0.05)肌力減弱組的左股骨頸BMD、左股骨上端BMD均較肌力正常組為低,差異具有顯著性(p0.01)。2核受體輔助因子SRC-3、PGC-1α與去卵巢SD大鼠骨質(zhì)疏松骨與肌肉代謝關(guān)聯(lián)性及補(bǔ)腎健脾化瘀中藥復(fù)方對(duì)其的聯(lián)合干預(yù)作用2.1各組動(dòng)物體質(zhì)量、肌力及肌肉含量變化情況給藥前各組大鼠間體質(zhì)量比較,差異不具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05)。給藥全程每30天為節(jié)點(diǎn)對(duì)各組大鼠間進(jìn)行體質(zhì)量比較,差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05)。給藥90天后各組大鼠間體肌肉含量組間橫向比較,BSZY、EV及RLX組給藥90天肌肉含量均高于OVX組,但低于Sham組,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p均0.05)。給藥180天各組大鼠間體肌肉含量組間橫向比較,差異不具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05)。給藥90、180天節(jié)點(diǎn)各組動(dòng)物肌肉含量組內(nèi)縱向比較,差異均不具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05)。2.2骨組織形態(tài)學(xué)給藥90天后OVX、BSZY、EV、RLX組大鼠骨小梁均出現(xiàn)不同程度的病理變化,與骨密度檢測(cè)結(jié)果一致。0VX組骨小粱大面積減少,部分區(qū)域稀疏變細(xì)且分布不均,骨小梁間隙增大。Sham組可見(jiàn)骨小粱密集、排列較整齊、仍能連接成網(wǎng),骨小梁間隙較小,骨小梁形態(tài)結(jié)構(gòu)尚完整,骨細(xì)胞細(xì)胞核清晰可見(jiàn)。與OVX組比較,BSZY、EV、RLX組可見(jiàn)骨小梁數(shù)量較OVX組為多,部分區(qū)域骨小梁連接性尚可.2.3各組動(dòng)物血清、骨骼與肌肉組織中SRC-3與PGC-1α比較給藥90天及180天時(shí),OVX、BSZY、EV及RLX組血清SRC-3與PGC-1 α水平均高于OVX組,差異具有顯著性(p均0.001)。BSZY、EV、RLX組血清SRC-3與PGC-1α水平均低于Sham組,差異具有顯著性(p均0.001)。而B(niǎo)SZY、EV、RLX三組間血清SRC-3與PGC-1 α水平的差別沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p=0.412)。給藥90天及180天時(shí),OVX、BSZY、EV及RLX組骨組織SRC-3與PGC-1α水平均低于Sham組,差異具有顯著性(p均0.001)。BSZY、EV、RLX組骨組織SRC-3與PGC-1α水平均高于OVX組,差異具有顯著性(分別為p=0.013,p=0.004,p0.001)。而B(niǎo)SZY、EV、RLX三組間骨組織SRC-3與PGC-1 α水平的差別沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p=0.061)。給藥90天及180天時(shí),OVX、BSZY、EV及RLX組肌肉組織SRC-3與PGC-1 α水平均低于 Sham 組,差異具有顯著性(p0.001,p=0.006,p=0.028)。BSZY、EV、RLX組肌肉組織SRC-3與PGC-1 α水平均高于OVX組,差異具有顯著性(p均0.001)。而B(niǎo)SZY、EV、RLX三組間肌肉組織SRC-3與PGC-1 α水平的差別沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p=0.182)。2.4血清與肌肉、骨骼組織中SRC-3、PGC-1 α水平相關(guān)性血清SRC-3水平與肌肉、骨骼組織中SRC-3水平正相關(guān),相關(guān)性具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.001)。肌肉組織中SRC-3水平與骨骼組織中SRC-3水平正相關(guān),相關(guān)性具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.001)。血清PGC-1 α水平與肌肉、骨骼組織中PGC-1 α水平正相關(guān),相關(guān)性具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.001)。肌肉組織中PGC-1 α水平與骨骼組織PGC-1 α水平正相關(guān),相關(guān)性具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.001)。2.5各組大鼠肌肉組織中Wnt通路相關(guān)mRNA情況①PGC-1 a:與Sham組相比,OVX組PGC-1 α mRNA表達(dá)水平下降(p0.001),BSZY組相對(duì)于OVX組而言,PGC-1 α mRNA表達(dá)水平上升(p=0.001),EV、RLX組PGC-1 αmRNA 表達(dá)水平與 OVX 組無(wú)差異(p=0.259,p=0.314),且低于 BSZY 組(p0.05),BSZY組和 EV、RLX 組 PGC-1 α mRNA 表達(dá)水平均低于 Sham 組(p=0.006 和 p0.001);②ERR α:與Sham組相比,OVX組ERRα mRNA表達(dá)水平上升(p0.001),BSZY、EV、RLX 組均低于 OVX 組(p0.01),EV、RLX 組低于 BSZY 組(p0.001),EV、RLX組間比較沒(méi)有差異(p0.05),BSZY、EV和RLX組均高于Sham組(p0.001);③SRC-3:與 Sham 組相比,OVX 組 SRC-3 mRNA 表達(dá)水平下降(p0.001),BSZY、EV 和 RLX 組均高于 0VX 組(p0.05),EV 和 RLX 組低于 BSZY 組(p0.05),BSZY、EV和RLX組均低于Sham組(均為p0.001);④OPN:Sham組、BSZY、EV和RLX組相對(duì)于OVX組而言,OPN mRNA表達(dá)水平下降(均為 P0.001),BSZY 組高于 Sham、EV 和 RLX 組(p0.05)),EV 和 RLX 組與Sham 組無(wú)差異(p=0.138,p=0.657);⑤OPG:Sham、BSZY、EV和RLX組相對(duì)于OVX組而言,OPG mRNA表達(dá)水平升高(均為p0.001),Sham 組高于 BSZY、EV 和 RLX 組(均為 p0.001),BSZY、EV 和RLX 組無(wú)差異(p0.05);⑥Runx2:與Sham組相比,OVX、BSZY、EV和RLX組Runx2 mRNA表達(dá)水平下降(p0.001),BSZY 組高于 OVX、EV 和 RLX 組(均為 p0.001),0VX 組與 EV 和 RLX組無(wú)差異(p0.05);⑦LRP5:與Sham組相比,OVX組、BSZY、EV和RLX組LRP5 mRNA表達(dá)水平下降(均為p0.001),BSZY 組高于 OVX、EV 和 RLX 組(p0.05),0VX 組與 EV、RLX 組無(wú)差異(p=0.145,p=0.257);⑧β-catenin:與 Sham 組相比,OVX、BSZY、EV 和 RLX 組 β-catenin mRNA 表達(dá)水平下降(均為p0.001),BSZY、EV和RLX組高于OVX組(p0.001),BSZY組高于 EV 和 RLX 組(p0.05)。2.6各組MAPK通路相關(guān)蛋白表達(dá)情況給藥90天及180天后與Sham組相比,0VX組JNK、ERK1/2蛋白相對(duì)表達(dá)量均低,差異具有顯著性(p0.001),各給藥組與OVX組相比蛋白相對(duì)表達(dá)量均高,差異具有顯著性(p0.001)。給藥90天后,EV組、RLX組各蛋白水平與BSZY組比較,差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p=0.068)。給藥180天后,EV組JNK蛋白表達(dá)水平高于BSZY組,差異具有顯著性(p0.001),RLX組JNK、ERK1/2蛋白相對(duì)表達(dá)量均低于BSZY組,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p=0.037)。兩階段EV與RLX組兩種蛋白水平差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p==0.505)。結(jié)論1.本研究的臨床部分證實(shí)了核受體輔助激活因子SRC-3和PGC-1 α可能參與絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松中骨與肌肉代謝異常的病理過(guò)程。2.本研究的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)部分發(fā)現(xiàn),在去卵巢骨質(zhì)疏松大鼠模型中,血清SRC-3水平與肌肉、骨骼組織中SRC-3、PGC-1 α水平正相關(guān),肌肉與骨骼組織中SRC-3、PGC-1α水平正相關(guān)。且根據(jù)藥物干預(yù),各部位兩指標(biāo)變化趨勢(shì)相同,提示SRC-3、PGC-1α可能在骨與肌肉代謝水平調(diào)控中發(fā)揮一定作用且可能參與骨與肌肉之間的相互影響。且通過(guò)測(cè)定血清中的SRC-3、PGC-1 α水平即可一定程度上體現(xiàn)骨與肌肉組織中的SRC-3、PGC-1 α 水平。3.補(bǔ)腎健脾化瘀中藥復(fù)方可能是通過(guò)提高骨與肌肉組織中SRC-3和PGC-1 α mRNA表達(dá)水平,降低ERR α及其下游基因OPN mRNA表達(dá)水平,促進(jìn)成骨特異基因OPG、Runx2等表達(dá),從而提高去勢(shì)大鼠骨密度、骨強(qiáng)度、肌肉含量與肌力,MAPK通路可能亦參與該過(guò)程。
【圖文】：

－ｓＳＲＣ－３系ＥＲ與ＡＲ的共調(diào)節(jié)因子，屬于ＳＲＣ家族，該家族系主要激素受體活性的核受體輔助因子。作為一類(lèi)在結(jié)構(gòu)和功能上都有白，該類(lèi)因子通過(guò)直接或間接的方式與其它協(xié)同激活因子相互作核受體介導(dǎo)的轉(zhuǎn)錄激活。除ＡＣＴＲ外，ＳＲＣ家族還包括：①ＳＲＣ＿ｌ－ｉｎｔｅｒａｃｔｉｎｇ邋ｐｒｏｔｅｉｎ邋１），邋ＳＲＣ－１在人體骨骼和肌肉形成中均物實(shí)驗(yàn)［１＇：顯示，ＳＲＣ－１基因敲除小鼠的股骨近端松質(zhì)骨（ｔｒａｂｅｃｕｌ照組相比受到嚴(yán)重影響，并伴隨出現(xiàn)該部位的骨密度顯著降低。于定向基因敲除動(dòng)物模型的研宄發(fā)現(xiàn)，ＳＲＣ－１基因選擇性敲除的促骨形成的作用產(chǎn)生了一定拮抗性。該研宄結(jié)果說(shuō)明，在雌激素ＳＲＣ－１可能起著重要的作用。同－？研宄中ＳＲＣ－１基因選擇性敲除形成異常等性狀，推測(cè)可能與雄激素在雄性個(gè)體中對(duì)骨形成發(fā)揮。研究顯示ＳＲＣ－１與骨骼肌細(xì)胞內(nèi)ＵＣＰ３ｍＲＮＡ的表達(dá)有關(guān)，從而影化，并可促進(jìn)脂肪代謝＂ｎ。②ＳＲＣ－２邋（ｓｔｅｒｏｉｄ邋ｒｅｃｅｐｔｏｒ－ｉｎｔｅｒａｃｔｉｎ片分析數(shù)據(jù)顯示ＳＲＣ－２同樣涉及到雌激素受體對(duì)下游骨與肌肉的影響［１５］。逡逑

ＡＣＴＲ／ＳＲＣ－３系ＥＲ與ＡＲ的共調(diào)節(jié)因子，屬于ＳＲＣ家族，該家族系主要調(diào)控雌激素逡逑受體和雄激素受體活性的核受體輔助因子。作為一類(lèi)在結(jié)構(gòu)和功能上都有許多相似性逡逑的功能蛋白，該類(lèi)因子通過(guò)直接或間接的方式與其它協(xié)同激活因子相互作用（圖２），，逡逑從而增強(qiáng)核受體介導(dǎo)的轉(zhuǎn)錄激活。除ＡＣＴＲ外，ＳＲＣ家族還包括：①ＳＲＣ＿ｌ（ｓｔｅｒｏｉｄ逡逑ｒｅｃｅｐｔｏｒ－ｉｎｔｅｒａｃｔｉｎｇ邋ｐｒｏｔｅｉｎ邋１），邋ＳＲＣ－１在人體骨骼和肌肉形成中均起到重要的逡逑作用。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)［１＇：顯示，ＳＲＣ－１基因敲除小鼠的股骨近端松質(zhì)骨（ｔｒａｂｅｃｕｌａｒ邋ｂｏｎｅ）逡逑發(fā)育與對(duì)照組相比受到嚴(yán)重影響，并伴隨出現(xiàn)該部位的骨密度顯著降低。進(jìn)一步深入逡逑進(jìn)行的基于定向基因敲除動(dòng)物模型的研宄發(fā)現(xiàn)，ＳＲＣ－１基因選擇性敲除的雌性小鼠對(duì)逡逑雌激素的促骨形成的作用產(chǎn)生了一定拮抗性。該研宄結(jié)果說(shuō)明，在雌激素對(duì)骨形成的逡逑調(diào)節(jié)中，ＳＲＣ－１可能起著重要的作用。同－？研宄中ＳＲＣ－１基因選擇性敲除的雄性小鼠逡逑未發(fā)現(xiàn)骨形成異常等性狀
【學(xué)位授予單位】：廣州中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類(lèi)號(hào)】：R259

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1 趙紅斌,梁濤;核受體輔助因子及其信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)[J];國(guó)外醫(yī)學(xué)(分子生物學(xué)分冊(cè));2001年01期

2 薛君力;曾姣娥;代U

本文編號(hào)：2703878