本文關鍵詞：低氧環(huán)境下蟾毒靈聯(lián)合順鉑抗人食管癌ECA109細胞研究

  更多相關文章： 低氧 順鉑(DDP、cisplatin) 化療增敏 人食管鱗癌細胞 蟾毒靈(Bufalin)

【摘要】：背景低氧是實體腫瘤中普遍存在的現(xiàn)象,特別是實體腫瘤內(nèi)部血供不良的區(qū)域更為明顯,多種實體腫瘤的研究中發(fā)現(xiàn),低氧微環(huán)境與腫瘤的耐藥密切相關,那么如何逆轉(zhuǎn)腫瘤的耐藥,進一步誘導腫瘤細胞凋亡成為抗腫瘤治療的關鍵環(huán)節(jié)。蟾毒靈(Bufalin)是一種在蟾酥中提取的具有抗腫瘤作用的中藥活性成分,屬于強心甾體類化合物,以往研究表明其抗腫瘤作用涉及促進凋亡、誘導分化、抑制腫瘤血管新生、抑制腫瘤干細胞生長、增強化療藥物療效等多個方面。低氧環(huán)境下,蟾毒靈能否誘導食管癌細胞凋亡,對食管癌化療增感的作用目前尚不明確。目的探討化學物氯化鈷(CoCl_2)模擬的低氧環(huán)境下,蟾毒靈對食管鱗癌ECA109細胞的抑制增殖及對凋亡作用,明確其是否對順鉑(DDP、cisplatin)化療有增敏作用,并探討其可能的作用機制。方法1.食管鱗癌ECA109細胞分為:空白對照組(A)、蟾毒靈單藥組(B)、DDP組(C)、蟾毒靈+DDP組(D),其中B組設有5個濃度組(B-a 10nmol/L、B-b25nmol/L、B-c 50nmol/L、B-d 100nmol/L、B-e 200nmol/L),C組設有5個濃度組(C-a 2.5mg/L、C-b 5.0 mg/L、C-c 7.5mg/L、C-d 10mg/L、C-e 20mg/L),D組蟾毒靈濃度均為10nmol/L與C組5個濃度聯(lián)合(聯(lián)合a組、聯(lián)合b組、聯(lián)合c組、聯(lián)合d組、聯(lián)合e組)。2.CCK-8(Cell Counting Kit-8)檢測細胞增殖:分別測定氯化鈷誘導的低氧環(huán)境下,蟾毒靈單藥組及DDP單藥組不同時間段(24h、48h)的細胞增殖抑制率,選用10nmol/L的蟾毒靈濃度與DDP組聯(lián)合,檢測不同時段(24h、48h)的細胞增殖抑制率。3.流式細胞儀檢測低氧環(huán)境下,各實驗組作用48h后對細胞凋亡的影響。4.Hoechest 33342染色法檢測低氧環(huán)境下,各實驗組作用48h后對細胞凋亡的影響。5.Western Blot法檢測低氧環(huán)境下,各實驗組作用48h后對細胞內(nèi)的HIF-1α、NF-KBp65及凋亡相關蛋白Bcl-2、Bax的表達情況。(其中4、5、6步實驗的分組為:A組、C-b組、C-c組、聯(lián)合b組、聯(lián)合c組,分別另命名為Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ組)結(jié)果1.CCK-8結(jié)果顯示:低氧環(huán)境下,不同濃度的蟾毒靈對ECA109的增殖抑制率均顯著高于空白對照組(P0.05),且呈濃度依賴性(P0.05);在蟾毒靈各濃度組內(nèi),作用48h后的細胞增殖抑制率均高于作用24h后(P0.05)。不同濃度的順鉑對ECAl09的增殖抑制率均高于空白對照組(P0.05),呈濃度依賴性(P0.05),聯(lián)合蟾毒靈10nmol/L組的增殖抑制率均高于同濃度單藥順鉑組,差異均有統(tǒng)計學意義(P0.05),且隨著濃度的增加,其對ECAl09細胞生長抑制作用不斷增強。2.流式細胞儀檢測低氧環(huán)境下,藥物作用細胞48h后的凋亡率,結(jié)果顯示當順鉑藥物濃度為5.0mg/L時細胞凋亡率為(32.84±4.42)%,順鉑藥物濃度7.5mg/L時細胞凋亡率為(43.17±4.03)%,當順鉑5.0mg/L與蟾毒靈10 nmol/L聯(lián)合時細胞凋亡率為(46.72±3.32)%,當順鉑7.5mg/L與蟾毒靈10 nmol/L聯(lián)合時細胞凋亡率為(61.22±2.12)%,不同濃度的順鉑均能引起ECAl09的凋亡,呈濃度依賴性(P0.05),當與蟾毒靈聯(lián)合后,則能明顯提高其凋亡率(P0.05)。3.Hoechest 33342染色熒光顯微鏡下檢測低氧環(huán)境下,藥物作用48h后細胞凋亡形態(tài)顯示:低氧環(huán)境下,對照組細胞形態(tài)大小均勻,DDP干預48h后,細胞核濃縮、凋亡小體出現(xiàn),不同濃度的順鉑對ECAl09的凋亡率均高于空白對照組(P0.05),呈濃度依賴性(P0.05),聯(lián)合蟾毒靈10nmol.L-1組的凋亡率均高于同濃度單用順鉑組(P0.05)。4.Western Blot結(jié)果顯示:低氧環(huán)境下,不同實驗藥物組作用細胞48h后與空白對照組比較,HIF-1α、NF-KBp65及Bcl-2的蛋白表達量均降低(P0.05);與蟾毒靈聯(lián)合后較順鉑單藥組HIF-1α、NF-KBp65及Bcl-2的蛋白表達量均降低(P0.05);不同實驗組作用細胞48h后與空白對照組比較,Bax的蛋白表達量均升高(P0.05);與蟾毒靈聯(lián)合后較順鉑單藥組Bax的蛋白表達量均升高(P0.05)。結(jié)論低氧環(huán)境下,蟾毒靈對食管鱗癌ECA109細胞的增殖具有抑制作用,且呈時間濃度依賴性;蟾毒靈可以增加ECA109細胞對順鉑化療的敏感性。其機制可能是通過抑制NF-KBp65/HIF-1α通路的高表達,進一步導致其下游靶基因Bcl-2的蛋白表達水平降低,Bax蛋白表達水平增高,來增強順鉑的抗腫瘤作用。
【關鍵詞】：低氧 順鉑(DDP、cisplatin) 化療增敏 人食管鱗癌細胞 蟾毒靈(Bufalin)
【學位授予單位】：新鄉(xiāng)醫(yī)學院
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R735.1
【目錄】：

• 摘要5-8
• Abstract8-11
• 前言11-12
• 1 實驗材料12-17
• 2 實驗方法17-23
• 3 統(tǒng)計學分析23
• 4 結(jié)果23-27
• 5 討論27-29
• 6 小結(jié)29-30
• 附圖30-33
• 參考文獻33-37
• 綜述：蟾毒靈抗腫瘤的研究進展37-42
• 參考文獻39-42
• 附錄42-43
• 攻讀學位期間發(fā)表文章情況43-44
• 致謝44-45
• 個人簡歷45

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本文編號：998591