本文關(guān)鍵詞：天然冰片通過氯通道介導(dǎo)促進(jìn)鼻咽癌細(xì)胞攝取阿霉素的研究

  更多相關(guān)文章： 冰片 鼻咽腫瘤 膜片鉗技術(shù) 氯通道 氯通道阻斷劑

【摘要】：目的:我國傳統(tǒng)中藥冰片一直被用作輔助用藥,能促進(jìn)機(jī)體對其他有效藥物的攝取,但機(jī)制不明確。我們前期研究發(fā)現(xiàn)氯通道開放可以促進(jìn)細(xì)胞對藥物的攝取,使用氯通道阻斷劑及下調(diào)氯通道蛋白表達(dá)可以抑制該作用,說明氯通道可能參與或調(diào)節(jié)細(xì)胞對藥物的攝取。本課題以低分化鼻咽癌細(xì)胞(CNE-2Z)為研究對象,以氯通道為研究出發(fā)點(diǎn),探討:1)氯通道在冰片促進(jìn)阿霉素跨細(xì)胞膜轉(zhuǎn)運(yùn)中的作用。2)參與冰片促進(jìn)阿霉素跨細(xì)胞膜轉(zhuǎn)運(yùn)的氯通道分子本質(zhì)。方法:本研究中使用的是天然冰片。1)用熒光示蹤法檢測冰片促進(jìn)阿霉素跨細(xì)胞膜轉(zhuǎn)運(yùn)情況;2)采用全細(xì)胞膜片鉗技術(shù)記錄冰片激活的全細(xì)胞氯電流,并分析其電流特性及容積敏感性;3)用倒置熒光顯微鏡拍攝細(xì)胞圖像,使用Q500MC圖像分析軟件計(jì)算并測量細(xì)胞容積變化;4)用酶標(biāo)儀法及流式細(xì)胞術(shù),檢測冰片作用細(xì)胞前后細(xì)胞內(nèi)藥物濃度的變化及與氯通道關(guān)系;5)使用si RNA技術(shù)下調(diào)鼻咽癌細(xì)胞Cl C-3氯通道蛋白的表達(dá),用Western Blot檢測干擾前后細(xì)胞Cl C-3蛋白的表達(dá)水平;用流式細(xì)胞術(shù)及熒光顯微示蹤法檢測si RNA對冰片促進(jìn)阿霉素跨細(xì)胞膜轉(zhuǎn)運(yùn)的影響;6)用MTT法檢測冰片及冰片聯(lián)合阿霉素的細(xì)胞毒作用。結(jié)果:1)冰片明顯促進(jìn)CNE-2Z細(xì)胞對阿霉素的攝取(增加約29%)。2)冰片能快速激活CNE-2Z細(xì)胞氯通道,產(chǎn)生氯電流,該電流能被氯通道阻斷劑DIDS及Tamoxifen抑制。此電流也可以被47%高滲溶液抑制,說明冰片激活的氯電流具有容積敏感性。離子置換實(shí)驗(yàn)的結(jié)果表明,該氯通道的離子選擇性為:I-Br-Cl-Gluconate-。3)細(xì)胞外灌流冰片溶液30分鐘,CNE-2Z細(xì)胞體積明顯縮小(減小約9%)。冰片此作用可被氯通道阻斷劑DIDS阻斷。4)冰片促進(jìn)細(xì)胞對阿霉素?cái)z取的效應(yīng)可被氯通道阻斷劑DIDS明顯抑制。5)Cl C-3si RNA能顯著下調(diào)CNE-2Z細(xì)胞Cl C-3氯通道蛋白表達(dá)(下調(diào)約57%);下調(diào)Cl C-3氯通道蛋白表達(dá)后,冰片促進(jìn)CNE-2Z細(xì)胞對阿霉素?cái)z取的作用減弱。6)冰片無明顯的細(xì)胞毒作用,但可增強(qiáng)阿霉素對CNE-2Z細(xì)胞增殖的抑制作用,使其半抑制濃度(IC50)降低約50%。結(jié)論:1)冰片可以激活低分化鼻咽癌細(xì)胞的氯通道,促進(jìn)細(xì)胞攝取阿霉素。2)氯通道是冰片促進(jìn)阿霉素跨細(xì)胞膜轉(zhuǎn)運(yùn)的作用靶點(diǎn)之一。3)Cl C-3氯通道在冰片促進(jìn)阿霉素跨細(xì)胞膜轉(zhuǎn)運(yùn)中起重要作用。4)冰片能明顯加強(qiáng)阿霉素的抗腫瘤作用。
【關(guān)鍵詞】：冰片 鼻咽腫瘤 膜片鉗技術(shù) 氯通道 氯通道阻斷劑
【學(xué)位授予單位】：暨南大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R73-36
【目錄】：

• 中文摘要3-5
• Abstract5-8
• 1 前言8-14
• 1.1 冰片8-11
• 1.1.1 冰片的分類及作用8-9
• 1.1.2 冰片促進(jìn)藥物跨血腦屏障轉(zhuǎn)運(yùn)的研究9-10
• 1.1.3 冰片促進(jìn)藥物透皮吸收的研究10
• 1.1.4 冰片促進(jìn)胃粘膜細(xì)胞對藥物的攝取10
• 1.1.5 冰片促進(jìn)細(xì)胞對藥物的攝取10-11
• 1.2 氯離子通道11-12
• 1.2.1 氯離子通道的分類11
• 1.2.2 氯通道與物質(zhì)轉(zhuǎn)運(yùn)11-12
• 1.3 本課題研究的目的及意義12-14
• 2 材料及方法14-26
• 2.1 材料14-17
• 2.1.1 主要儀器及設(shè)備14-15
• 2.1.2 細(xì)胞與藥物15
• 2.1.3 主要試劑及藥品15-17
• 2.2 方法17-25
• 2.2.1 細(xì)胞培養(yǎng)17-18
• 2.2.2 全細(xì)胞膜片鉗技術(shù)記錄CNE-2Z氯電流18-20
• 2.2.3 冰片對CNE-2Z細(xì)胞容積影響。20-21
• 2.2.4 熒光顯微示蹤法檢測冰片促進(jìn)細(xì)胞對阿霉素的攝取情況21-22
• 2.2.5 熒光酶標(biāo)儀法檢測冰片促進(jìn)細(xì)胞對阿霉素的攝取情況22-23
• 2.2.6 流式細(xì)胞術(shù)檢測細(xì)胞藥物濃度23
• 2.2.7 Cl C-3 si RNA轉(zhuǎn)染細(xì)胞23-24
• 2.2.8 MTT法檢測冰片、阿霉素、及阿霉素聯(lián)合冰片的細(xì)胞毒作用24-25
• 2.3 統(tǒng)計(jì)方法25-26
• 3.結(jié)果26-44
• 3.1 CNE-2Z 細(xì)胞對不同濃度阿霉素的攝取26-27
• 3.2 不同濃度冰片對 CNE-2Z 細(xì)胞對阿霉素吸收的影響27-28
• 3.3 冰片激活 CNE-2Z 細(xì)胞氯電流28-34
• 3.4 氯通道阻斷劑抑制冰片對 CNE-2Z 細(xì)胞攝取阿霉素的促進(jìn)效應(yīng)34-36
• 3.5 下調(diào) Cl C-3 氯通道表達(dá)可以抑制冰片對 CNE-2Z 細(xì)胞攝取阿霉素的促進(jìn)效應(yīng)36-43
• 3.6 冰片聯(lián)合阿霉素增強(qiáng)阿霉素的細(xì)胞毒作用43-44
• 4.討論44-46
• 4.1 冰片誘發(fā) CNE-2Z 細(xì)胞容積縮小44
• 4.2 冰片可以促進(jìn) CNE-2Z 細(xì)胞對阿霉素的攝取44
• 4.3 冰片促進(jìn) CNE-2Z 細(xì)胞對阿霉素的攝取可能通過氯通道介導(dǎo)44-45
• 4.4 Cl C-3 氯通道在冰片促進(jìn) CNE-2Z 細(xì)胞對阿霉素的攝取中有重要作用45-46
• 4.5 冰片可以加強(qiáng)阿霉素誘導(dǎo) CNE-2Z 細(xì)胞凋亡的作用46
• 5 結(jié)論46-47
• 參考文獻(xiàn)47-51
• 發(fā)表論文51-52
• 主要縮略詞匯表52-53
• 致謝53

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