本文關鍵詞：17-AAG對EBV陽性腫瘤細胞LMP1表達及細胞增殖的影響

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【摘要】：熱休克蛋白90(Heat Shock Proein 90,HSP90)是一種非常重要的分子伴侶,其底物蛋白是許多信號通路中的蛋白激酶和轉錄因子。潛伏膜蛋白1(Latent membrane protein 1,LMP1)是EB病毒(Epsein Barr Virus,EBV)潛伏感染期表達的主要癌蛋白,HSP90抑制劑17-AAG已被證實能夠抑制LMP1表達,其對表達LMP1的EBV陽性腫瘤細胞的影響有待深入研究。目的:探討HSP90抑制劑17-AAG對EBV陽性腫瘤細胞LMP1表達的影響以及對細胞增殖的抑制作用,明確17-AAG在STAT3信號通路中可能的作用機制。方法:(1)選取表達LMP1的EBV陽性伯基特淋巴瘤細胞系Raji,EBV陽性鼻咽癌細胞系C666及EBV陽性胃癌上皮細胞系GT38作為研究對象,分別施加不同濃度的17-AAG進行處理,采用Quantitative real-time PCR(q RT-PCR)檢測不同濃度17-AAG處理對LMP1表達的影響。(2)MTT法檢測17-AAG對表達LMP1的EBV陽性胃癌細胞系GT38、不表達LMP1的EBV陽性胃癌細胞系SNU719、EBV陰性胃癌細胞系SGC7901的生長抑制率。(3)Western-blotting檢測17-AAG對GT38細胞系中STAT3及其下游抗凋亡基因survivin表達的影響。結果:(1)q RT-PCR方法結果顯示,三組細胞系DMSO對照組與空白對照組表達無統(tǒng)計學差異;施加3μM、1μM、0.3μM、0.1μM濃度17-AAG的Raji細胞系中LMP1的表達量分別降低為空白對照組的0.38、0.33、0.65、0.77倍,GT38細胞系降低為空白對照組的0.47、0.52、0.96、0.94倍,C666細胞系降低為空白對照組的0.22、0.18、0.34、0.36倍。三組細胞系各濃度組間表達量均有統(tǒng)計學差異,P0.05。(2)MTT檢測結果顯示,不同濃度17-AAG對SNU719、SGC7901均有抑制作用,隨濃度增加及作用時間延長,抑制率逐漸增大,1μM濃度組抑制率在第六天可達到100%;不同濃度17-AAG對GT38細胞系的抑制作用更加明顯,3μM及1μM濃度抑制作用基本相似,在第四天抑制率即可達到100%。(3)Western-blotting結果顯示,17-AAG能夠使GT38細胞系中STAT3及survivin表達降低。結論:17-AAG能夠抑制EBV陽性腫瘤細胞LMP1的表達及腫瘤細胞增殖,其機制可能是通過抑制LMP1參與的STAT3信號轉導通路,從而降低下游抗凋亡基因suivivin的表達。
【關鍵詞】：17-AAG LMP1 EB病毒 腫瘤
【學位授予單位】：青島大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R730.43
【目錄】：

• 摘要2-3
• Abstract3-6
• 引言6-8
• 第1章 材料與方法8-15
• 1.1 儀器、試劑和耗材8-10
• 1.2 EBV陽性細胞系的選擇10
• 1.3 細胞培養(yǎng)及藥物處理10
• 1.4 RNA的提取10-11
• 1.5 Real-time qPCR檢測LMP1基因的轉錄表達11-13
• 1.6 MTT檢測細胞增殖13
• 1.7 Western Blotting檢測基因蛋白的表達13-14
• 1.8 統(tǒng)計方法14-15
• 第2章 結果15-22
• 2.1 q RT-PCR 檢測 EBV 陽性細胞 LMP1 的轉錄表達15-19
• 2.2 MTT比色法檢測細胞增值率19-21
• 2.3 Western-blot檢測STAT3信號通路的表達21-22
• 第3章 討論22-27
• 3.1 HSP90抑制劑 17-AAG對EBV陽性腫瘤LMP1表達的抑制23-24
• 3.2 HSP90抑制劑 17-AAG對EBV陽性腫瘤細胞增殖的抑制24-25
• 3.3 HSP90抑制劑 17-AAG對LMP1所在信號通路的影響25-27
• 結論27-28
• 參考文獻28-32
• 綜述32-60
• 綜述的參考文獻48-60
• 攻讀學位期間的研究成果60-61
• 致謝61-62

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1 姚洪文;胃癌細胞系的建立及研究進展[J];黑龍江醫(yī)學;2001年10期

2 李新華;張桂英;羅非君;徐美華;李乾;;胃癌細胞系幽門螺桿菌感染對金屬蛋白酶表達的影響[J];世界華人消化雜志;2003年05期

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本文編號：970286