發(fā)布時間：2017-10-04 10:32

  本文關(guān)鍵詞：沉默DNMT3B上調(diào)XAF1的表達促進肝癌細胞HepG2的凋亡

  更多相關(guān)文章： XAF1 DNMT3B 肝癌 凋亡

【摘要】：目的探討沉默DNA甲基轉(zhuǎn)移酶3B(DNMT3B)后對XAF1介導的肝癌細胞HepG2凋亡的影響,并探討其可能機制。方法將肝癌細胞HepG2分為實驗組、陰性對照組、空白對照組。實驗組細胞轉(zhuǎn)染DNMT3B干擾質(zhì)粒(DNMT3B-siRNA),陰性對照組細胞轉(zhuǎn)染空質(zhì)粒,空白對照組細胞無處理。通過脂質(zhì)體法介導將DNMT3B-siRNA瞬時轉(zhuǎn)染肝癌細胞HepG2,熒光顯微鏡下觀察轉(zhuǎn)染率。選擇轉(zhuǎn)染效率最高時的細胞用于后續(xù)實驗。甲基化特異性PCR(MSP)分析XAF1基因啟動子甲基化情況。Western blot檢測各組HepG2細胞DNMT3B、XAF1和Caspase3蛋白的表達。MTT法檢測24 h、48 h、72 h、96 h各組HepG2細胞的增殖狀態(tài)。流式細胞術(shù)檢測轉(zhuǎn)染DNMT3B-siRNA后細胞凋亡率。結(jié)果基因測序結(jié)果顯示已成功構(gòu)建DNMT3B干擾質(zhì)粒。熒光顯微鏡觀察HepG2細胞瞬時轉(zhuǎn)染效率,轉(zhuǎn)染率約為70-80%。MSP分析顯示,HepG2細胞中XAF1基因啟動子存在明顯甲基化,與陰性對照組比較,沉默DNMT3B后,HepG2細胞中XAF1基因啟動子甲基化程度明顯減弱,非甲基化表達增強(均P0.05)。Western blot結(jié)果顯示,與陰性對照組比較,沉默DNMT3B后,HepG2細胞中DNMT3B表達顯著下調(diào),而XAF1蛋白表達顯著上調(diào),Caspase3蛋白表達顯著上調(diào)(均P0.05),而陰性對照組與空白對照組相比,以上指標的差異均不具有統(tǒng)計學意義(均P≥0.05)。MTT法檢測結(jié)果顯示,與陰性對照組比較,沉默DNMT3B后24 h(7.82±3.01%)、48 h(16.18±4.22%)、72 h(25.66±3.20%)、96 h(22.8±2.69)HepG2細胞的增殖抑制率明顯提高(均P0.05),而陰性對照組與空白對照組相比較,各時間點HepG2細胞抑制率差別不大(均P≥0.05)。流式細胞術(shù)結(jié)果顯示,與陰性對照組比較(4.00±0.76%),沉默DNMT3B后,HepG2細胞的凋亡率(15.30±0.67%)顯著增加(P0.05)。結(jié)論沉默DNMT3B的表達能抑制人肝癌細胞HepG2的增殖,促進其凋亡,此過程與XAF1的去甲基化后表達上調(diào)密切相關(guān)。
【關(guān)鍵詞】：XAF1 DNMT3B 肝癌 凋亡
【學位授予單位】：南華大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R735.7
【目錄】：

• 摘要4-6
• Abstract6-8
• 主要英文縮略語索引8-10
• 第1章 前言10-12
• 第2章 實驗材料與儀器設(shè)備12-14
• 第3章 實驗方法14-26
• 第4章 實驗結(jié)果26-34
• 第5章 討論34-38
• 第6章 結(jié)論38-40
• 參考文獻40-44
• 綜述: XAF1與腫瘤的研究進展44-52
• 參考文獻48-52
• 攻讀碩士學位期間的科研成果52-54
• 致謝54

【相似文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 王勇姿,俞超芹,凌昌全,衛(wèi)立辛;肝癌細胞系的研究概況[J];上海醫(yī)學;2000年02期

2 王蓬,陳孝平,PBSLai,CK Leow,Joseph W Y Lau;二十碳五烯酸對三種肝癌細胞系作用的實驗研究[J];中華普通外科雜志;2001年01期

3 彭林,王衛(wèi)東,孫建,簡志祥,杜嘉林,區(qū)金銳;穩(wěn)定表達促血管生成素基因肝癌細胞系的建立及產(chǎn)物的檢測[J];廣東醫(yī)學;2003年07期

4 趙蕩;陳宏武;許磊;劉飛勇;;不同時期肝癌免疫殺傷腫瘤細胞效應探討[J];中山大學學報(醫(yī)學科學版);2006年S1期

5 郭曉林;姜雅秋;金清龍;;多藥耐藥相關(guān)蛋白-3表達與肝癌耐藥的相關(guān)性[J];中國老年學雜志;2010年11期

6 ;離體培養(yǎng)的人體肝癌細胞系的建立[J];醫(yī)學研究通訊;1978年10期

7 陸榮華;陳尊器;陳瑞銘;;人體肝癌細胞系體外惡性浸潤行為的研究[J];細胞生物學雜志;1982年02期

8 張志培,施新猷,李六金,劉雪松,江遜,彭磊,趙佐慶;小鼠免疫力對接種人類肝癌細胞系9724生長的影響[J];第四軍醫(yī)大學學報;2001年07期

9 張志仁,徐順清,周宜開,任恕,劉志偉,呂斌,徐永俊;一株受二VA英類化學物質(zhì)誘導表達的螢光素酶肝癌細胞系[J];中國生物化學與分子生物學報;2001年06期

10 董琳,王桂珍;從分子基因水平開展中醫(yī)藥防治肝癌的研究[J];甘肅中醫(yī);2002年04期

中國重要會議論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 符兆英;劉凱歌;徐光華;;肝癌細胞系中乙型肝炎病毒x蛋白與缺氧誘導因子-1α表達的研究[A];中國細胞生物學學會2005年學術(shù)大會、青年學術(shù)研討會論文摘要集[C];2005年

2 張朵;朱海英;謝東莆;胡以平;;肝癌細胞中存在SP細胞[A];中國細胞生物學學會2005年學術(shù)大會、青年學術(shù)研討會論文摘要集[C];2005年

3 汪謙;曹良啟;陳錫林;甄茂川;黃曉卉;傅新暉;;過氧化物酶增殖物激活受體活化抑制肝癌細胞遷移的研究[A];廣東省肝臟病學會2007年年會論文集[C];2007年

4 鄧欣;蔣小玲;李輝;吳其愷;聶廣;劉欽;;表達耐拉米夫定乙型肝炎病毒肝癌細胞系的建立[A];第一次全國中西醫(yī)結(jié)合傳染病學術(shù)會議論文匯編[C];2006年

5 吳塵軒;杜智;朱爭艷;高英堂;王毅軍;只丹琮;孫泉;;肝癌免疫治療微環(huán)境和樹突狀細胞體外誘導的實驗研究[A];天津市生物醫(yī)學工程學會2007年學術(shù)年會論文摘要集[C];2007年

6 趙主江;單云峰;樊紅;程欲超;成建;權(quán)艷梅;張建瓊;謝維;;DNMT3A siRNA穩(wěn)定表達載體的構(gòu)建及其沉默效率的鑒定[A];江蘇省遺傳學會第七屆代表大會暨學術(shù)研討會論文摘要匯編[C];2006年

7 田德安;;RhoA短發(fā)夾狀雙鏈RNA對肝癌細胞生物學行為的調(diào)控研究[A];中華醫(yī)學會第七次全國消化病學術(shù)會議論文匯編（下冊）[C];2007年

8 高倩;;肝癌HepG2細胞系分泌的免疫抑制物質(zhì)的研究[A];第六屆全國免疫學學術(shù)大會論文集[C];2008年

9 代智;劉銀坤;馮巨濤;宋海燕;申華麗;張麗君;崔杰峰;;高低轉(zhuǎn)移潛能肝癌細胞系差異糖蛋白質(zhì)組學研究[A];中國蛋白質(zhì)組學第二屆學術(shù)大會論文摘要論文集[C];2004年

10 張盛周;俞明月;謝晶;戴谷;李朝軍;;Met與Fas基因在肝癌組織和肝癌細胞系中的表達[A];中國細胞生物學學會第八屆會員代表大會暨學術(shù)大會論文摘要集[C];2003年

中國重要報紙全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 記者 胡德榮;肝癌患者自噬性缺陷表型與預后不良緊密相關(guān)[N];健康報;2008年

中國博士學位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 王驥;凝集素富集糖肽聯(lián)合酶促~(18)O_3標記的定量N-糖蛋白組學方法在肝癌術(shù)后轉(zhuǎn)移復發(fā)研究中的應用[D];復旦大學;2012年

2 劉坤;Bcl-2/Twist1蛋白互作在缺氧促進肝癌血管生成擬態(tài)形成中的作用[D];天津醫(yī)科大學;2015年

3 陳勇;蓽茇酰胺抑制肝癌細胞遷移/侵襲的作用及其機制[D];華中科技大學;2015年

4 林鎮(zhèn)海;NR1D1通過DUOX2/MCP-1途徑募集巨噬細胞促進肝癌侵襲轉(zhuǎn)移的機制及臨床研究[D];復旦大學;2014年

5 丁坤;骨橋蛋白促進肝癌細胞順鉑耐藥的實驗研究[D];山東大學;2016年

6 馬春亮;KLF17在肝癌中的作用及對肝癌預后的影響[D];北京協(xié)和醫(yī)學院;2016年

7 幸思忠;URG4/URGCP激活NF-κB通路調(diào)控肝細胞癌血管增生的實驗研究[D];南方醫(yī)科大學;2016年

8 范婭涵;Hedgehog信號通路調(diào)控Twist1表達促進肝癌細胞侵襲轉(zhuǎn)移分子機制研究[D];第三軍醫(yī)大學;2016年

9 張素潔;長非編碼RNA LncTSG1抑制肝癌轉(zhuǎn)移的功能及機制研究[D];中國人民解放軍醫(yī)學院;2016年

10 梁東;Fbxw7促進Slug降解抑制TGF-β誘導的肝癌轉(zhuǎn)移[D];福建醫(yī)科大學;2015年

中國碩士學位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 田蕓蕓;人臍帶MSCs上清對肝癌細胞系HepG2影響的比較轉(zhuǎn)錄組學研究[D];內(nèi)蒙古大學;2015年

2 徐辰;NKCC1促進肝癌細胞轉(zhuǎn)移的分子機制及其抑制劑用于抗腫瘤藥物的探索[D];安徽醫(yī)科大學;2015年

3 楊霞;循環(huán)肝癌細胞CD147表型鑒定在指導利卡汀個體化治療中的應用潛能探索[D];蘇州大學;2015年

4 石志勇;FOXF2在肝癌中的表達及其對預后價值的研究[D];蘇州大學;2015年

5 陳楊;缺氧誘導肝癌細胞EMT及相關(guān)機制研究[D];中國人民解放軍醫(yī)學院;2015年

6 唐俊;miR-612對肝癌細胞干性的調(diào)節(jié)作用及其機制[D];復旦大學;2014年

7 李韻;miR-27b-5p促進肝癌細胞向肝癌干樣細胞轉(zhuǎn)化及其機制研究[D];四川醫(yī)科大學;2015年

8 李霄;BMP4對肝癌VM形成影響的研究[D];天津醫(yī)科大學;2015年

9 曹漪伊;HBV通過上調(diào)miR-331-3p的表達從而促進肝癌細胞的增殖[D];重慶醫(yī)科大學;2015年

10 黃亞運;以熱休克蛋白為靶點的抗HBV藥物研究[D];湖北工業(yè)大學;2016年

，

本文編號：970160