本文關鍵詞：E-鈣粘蛋白在內(nèi)皮祖細胞和間充質(zhì)干細胞之間的粘附作用及機制研究

  更多相關文章： E-鈣粘蛋白 血管內(nèi)皮祖細胞 骨髓間充質(zhì)干細胞 細胞粘附 轉(zhuǎn)染

【摘要】：目的:探討E-鈣粘蛋白(E-cadherin,E-cad)在內(nèi)皮祖細胞(Endothelial progenitor cells,EPCs)和間充質(zhì)干細胞(Mesenchymal stem cells,MSCs)之間的粘附作用及機制。方法:1.體外C57BL/6J(WT)小鼠骨髓腔分離培養(yǎng)EPCs和MSCs。2.使用Mito Tracker Red標記EPCs,DAPI標記MSC。3.采用免疫熒光的方法觀察E-cad在細胞內(nèi)的表達情況。4.細胞粘附實驗觀察EPCs與MSCs體外粘附現(xiàn)象。5.使用E-cad Si-RNA干擾EPCs和MSCs中E-cad的表達。6.RT-PCR和Western-blot檢測Si-RNA轉(zhuǎn)染效率。7.轉(zhuǎn)染成功后在成血管的凝膠上進一步檢測二者粘附現(xiàn)象。8.ELISA檢測E-cadherin的表達。9.RT-PCR和Western-blot檢測MSCs和EPCs相互作用后E-cad/β-catenin的m RNA和蛋白表達。10.MSCs和EPCs分別加入β-catenin特異性抑制劑XAV939后,在成血管的凝膠上進一步檢測二者粘附現(xiàn)象。結果:1.體外共培養(yǎng)MSCs和EPCs,E-cad的表達顯著上調(diào)。2.E-cad Si-RNA成功轉(zhuǎn)染MSCs和EPCs,E-cad m RNA和E-cad蛋白的表達顯著下調(diào)。3.Si-RNA成功轉(zhuǎn)染MSCs和EPCs后,二者粘附現(xiàn)象明顯受到抑制。4.沉默EPCs和MSCs的E-cad后,二者在成血管凝膠上的粘附及成管現(xiàn)象均受到顯著抑制。5.MSCs和EPCs均能分泌E-鈣粘蛋白。6.EPCs分泌的E-cad通過上調(diào)MSCs的β-catenin來調(diào)節(jié)二者共粘附。7.β-catenin信號通路調(diào)控MSCs和EPCs的粘附。結論:E-cad通過β-catenin通路介導EPCs和MSCs之間的粘附。
【關鍵詞】：E-鈣粘蛋白 血管內(nèi)皮祖細胞 骨髓間充質(zhì)干細胞 細胞粘附 轉(zhuǎn)染
【學位授予單位】：石河子大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R730.2
【目錄】：

• 中文摘要5-6
• Abstract6-9
• 縮略語表 (Abbreviations)9-12
• 前言12-14
• 第一部分：E-鈣粘蛋白介導血管內(nèi)皮祖細胞和骨髓間充質(zhì)干細胞之間的粘附作用研究14-34
• 1 實驗材料14-16
• 1.1 實驗動物14
• 1.2 實驗主要試劑和儀器14-16
• 2 實驗方法16-26
• 2.1 骨髓間充質(zhì)干細胞(BM-MSCs)的分離、鑒定及標記16-17
• 2.2 骨髓血管內(nèi)皮前體細胞(BM-EPCs)的分離培養(yǎng)、鑒定和標記17-18
• 2.3 共培養(yǎng)實驗18
• 2.4 粘附實驗18-19
• 2.5 免疫熒光實驗檢測E-cad的表達19
• 2.6 轉(zhuǎn)染實驗19-20
• 2.7 實時定量PCR (RT-PCR)檢測20-22
• 2.8 Western-blot22-26
• 2.9 統(tǒng)計學方法26
• 3 結果26-33
• 3.1 DAPI成功標記MSCs26
• 3.2 Mito Tracker Red成功標記EPCs26-27
• 3.3 體外共培養(yǎng)EPCs和MSCs，E-cad的表達顯著上調(diào)27-28
• 3.4 SiRNA干擾EPCs和MSCs，E-cad m RNA和E-cad的表達顯著下調(diào)28-30
• 3.5 SiRNA干擾EPCs和MSCs后，二者粘附現(xiàn)象明顯受到抑制30-32
• 3.6 E-cad介導EPCs和MSCs的粘附32-33
• 4 討論33-34
• 第二部分：β-catenin介導血管內(nèi)皮祖細胞和骨髓間充質(zhì)干細胞之間的粘附機制研究34-46
• 1 實驗材料34-35
• 1.1 實驗動物34
• 1.2 實驗主要試劑和儀器34-35
• 2 實驗方法35-39
• 2.1 間充質(zhì)干細胞(MSCs)的標記35
• 2.2 血管內(nèi)皮祖細胞(EPCs)的標記35-36
• 2.3 共培養(yǎng)實驗36
• 2.4 ELISA檢測E-cad的表達36
• 2.5 實時定量PCR (RT-PCR)檢測36-39
• 2.6 Western-blot39
• 2.7 統(tǒng)計學方法39
• 3 結果39-43
• 3.1 MSCs和EPCs均能分泌E-cad39-40
• 3.2 EPCs分泌的E-cad通過上調(diào)MSCs的 β-catenin來調(diào)節(jié)二者共粘附40-42
• 3.3 β-catenin信號通路調(diào)控MSCs和EPCs的粘附42-43
• 4 討論43-46
• 結論46-47
• 參考文獻 (References)47-52
• 文獻綜述52-66
• 參考文獻(References)61-66
• 致謝66-67
• 作者簡介67-69
• 導師評閱表69

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