本文關(guān)鍵詞：煤煙誘導(dǎo)支氣管上皮細胞生物學(xué)特性改變與基因組甲基化及表達水平研究

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【摘要】：[目的]：建立云南省宣威地區(qū)煙煤燃燒釋放物質(zhì)誘導(dǎo)支氣管上皮細胞惡性轉(zhuǎn)化的細胞模型；通過全基因組甲基化芯片結(jié)合轉(zhuǎn)錄組芯片檢測,分析研究煤煙污染導(dǎo)致表觀遺傳改變與肺癌發(fā)生的相關(guān)性,找到一批煤煙污染相關(guān)的肺癌早期分子標(biāo)志物,為地方性高發(fā)肺癌的早期預(yù)防、早期診斷、早期治療提供有價值的科學(xué)依數(shù)據(jù)。[方法]：1.收集煙煤燃燒釋放物Coal burning emissions(CBE)制成溶液,采用1.0μg/mlCBE對人支氣管上皮細胞Beas-2b(B2b)進行體外誘導(dǎo)培養(yǎng),建立惡性轉(zhuǎn)化細胞Coal-Beas-2b(C-B2b)模型；2.觀察C-B2b細胞的生物學(xué)特性改變。3.全基因組甲基化芯片及表達譜芯片檢測B2b,C-B2b和宣威肺癌細胞XWLC-05的MUC1基因的甲基化及mRNA表達水平的差異；4.差異性表達mRNAs進行GO(gene ontology)分類,探索其生物學(xué)功能；5.KEGG(Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes)信號通路分析與差異性表達基因相關(guān)的信號通路；6.對MUC1基因進行qRT-PCR驗證其mRNA表達水平；7.數(shù)據(jù)統(tǒng)計和分析采用SPSS17.0軟件包進行,數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(x±s)表示,組間資料應(yīng)用單因素方差分析(ONE WAY ANOVA)和t檢驗。[結(jié)果]：1.經(jīng)過體外誘導(dǎo)培養(yǎng),已建立所需惡性轉(zhuǎn)化C-B2b細胞株；2.惡性轉(zhuǎn)化C-B2b細胞相對于B2b細胞有明顯的生物學(xué)特性改變；3.對比B2b細胞,全基因組甲基化芯片中發(fā)現(xiàn),C-B2b中有1872個基因啟動子發(fā)生甲基化改變,3182個基因啟動子發(fā)生去甲基化改變；XWLC-05中有1720個基因啟動子發(fā)生甲基化改變,4037個基因啟動子發(fā)生去甲基化改變。對比C-B2b和XWLC-05,有相同的595個啟動子發(fā)生甲基化改變和2164個啟動子發(fā)生去甲基化改變；4.通過全基因組表達芯片的結(jié)果分析,我們發(fā)現(xiàn)C-B2b細胞中有2465個基因上調(diào),2574個基因下調(diào)；XWLC-05細胞中則有3959個基因上調(diào),3763個基因下調(diào)。對比C-B2b和XWLC-05,有相同的1257個基因上調(diào),1431個基因下調(diào)；5.按GO生物學(xué)過程(Biological process),細胞構(gòu)成(Cellular component),分子功能(Molecular function)對差異性表達基因進行分類,發(fā)現(xiàn)差異性表達基因具有多種生物學(xué)功能；6.KEGG信號通路結(jié)果顯示,C-B2b細胞通路中33條信號通路與上調(diào)基因有關(guān),16條信號通路與下調(diào)基因有關(guān)；XWLC-05細胞有24條信號通路與上調(diào)基因有關(guān),53條信號通路與下調(diào)基因有關(guān)。其中在XWLC-05中明顯上調(diào)的Influenza A, Cytokine-cytokine receptor interaction和NF-kappa B signaling pathways等信號通路在C-B2b細胞中也明顯上調(diào)；7.qRT-PCR驗證甲基化芯片中MUC1的表達。[結(jié)論]：1.本實驗證實CBE會導(dǎo)致B2b細胞惡性轉(zhuǎn)化：2.成功建立惡性轉(zhuǎn)化細胞C-B2b模型,為宣威肺癌的進一步研究奠定了基礎(chǔ)；3.甲基化芯片和表達芯片證實,以B2b為參照細胞,C-B2b細胞和XWLC-05有相似的甲基化譜和基因表達譜。綜合信息學(xué)分析提供了數(shù)個可能的富集生物過程和富集通路,為后續(xù)的研究煤煙污染與肺癌發(fā)生的相關(guān)性提供了研究的方向和依據(jù)；4.MUC1相關(guān)mRNA差異表達譜的建立,綜合信息學(xué)分析提供了數(shù)個可能的富集生物過程和富集通路,為后續(xù)的研究提供了研究的方向和依據(jù)；5.qRT-PCR檢測部分基因表達情況,與基因芯片結(jié)果一致,提示基因芯片結(jié)果準(zhǔn)確可靠。
【關(guān)鍵詞】：宣威肺癌 甲基化芯片 基因芯片 qRT-PCR
【學(xué)位授予單位】：昆明醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R734.2
【目錄】：

• 縮略詞表5-6
• 中文摘要6-9
• 英文摘要9-12
• 前言12-17
• 材料與方法17-42
• 結(jié)果42-61
• 討論61-64
• 結(jié)論64-65
• 參考文獻65-68
• 綜述68-75
• 參考文獻71-75
• 攻讀學(xué)位期間獲得的學(xué)術(shù)成果75-76
• 致謝76

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本文編號：863824