發(fā)布時間：2017-09-02 20:27

  本文關鍵詞：hRad9在乳腺癌化療反應中的作用及其靶點研究

  更多相關文章： hRad9 chk1 新輔助化療 乳腺癌

【摘要】：hRad9/chk1通路在DNA損傷修復和基因組穩(wěn)定維護中具有重要作用。人類多種腫瘤細胞中存在hRad9蛋白的高水平表達,并且與腫瘤發(fā)生、進展密切相關,但在乳腺癌化療反應性中作用的研究未見報道。本研究主要探討hRad9在乳腺癌化療反應中的作用以及以其為靶點提高化療敏感性的可行性。第一部分hRad9在乳腺癌化療反應中的作用研究方法1.挑選山東大學齊魯醫(yī)院術前接受至少4周期新輔助化療乳腺浸潤性導管癌標本50例,收集NAC前活檢和和NAC后腫瘤組織,完善各項臨床病理學資料。2.復習NAC前后腫瘤標本HE切片,根據Miller-Payne病理反應性分級(MP分級)對所有乳腺癌進行化療反應性的病理學評價。根據評價結果,將NAC后標本分為化療敏感組(MP3-5級)和化療耐藥組(MP1-2級)。3.免疫組化檢測NAC前后腫瘤組織hRad9、chk1 及 cyclin D1蛋白表達情況。結果1.乳腺癌NAC前活檢標本中,hRad9、chk1和cyclin D1蛋白陽性表達率分別為70%、42%和50%。2.通過分析NAC術后標本中hRad9表達與乳腺癌化療反應的關系我們發(fā)現hRad9蛋白表達與乳腺癌化療反應性差相關(X2=40.9,P=0.000)。3.通過分析NAC術后標本中chkl蛋白表達與乳腺癌化療反應性的關系我們發(fā)現chkl蛋白表達與乳腺癌化療反應性差相關(X2=5.4,P=0.021)。4.通過雙變量分析,我們發(fā)現hRad9蛋白分別與chk1、cyclin D1蛋白表達正相關(R=0.327, P=0.020; R=0.393, P=0.005)。5.通過比較NAC前后腫瘤組織hRad9和chkl蛋白表達變化,我們發(fā)現化療后chkl蛋白表達較化療前明顯增高(P=0.012),化療前后hRad9蛋白表達無明顯變化(P=0.571)。結論1.乳腺癌中存在hRad9、chk1高表達,兩者的高表達與化療反應性差密切相關。2.hRad9與chkl表達正相關,提示hRad9/chk1通路可能在乳腺癌化療抵抗中發(fā)揮重要的作用。3.chk1蛋白表達在化療前后發(fā)生顯著性變化,提示其可能在獲得性化療耐藥中發(fā)揮作用；而hRad9蛋白表達在化療前后變化不明顯,提示其過表達與內在性性化療耐藥相關。第二部分以hRad9為靶點提高乳腺癌化療敏感性的研究方法1.設計并合成靶向干擾hRad9基因表達的小干擾RNA (hRad9-siRNA),以非靶向性干擾序列作為陰性對照(NC-siRNA)。2.將乳腺癌細胞分成三組：hRad9-siRNA轉染組、NC組和空白對照組,并將上述siRNA轉染乳腺癌細胞系MCF-7 和 MDA-MB-231。3. RT-qPCR檢測各組細胞中hRad9 mRNA的表達情況；細胞免疫化學及Western-blot檢測各組細胞中hRad9蛋白的表達情況。4.RT-qPCR、Western-blot檢測各組細胞中chk1 mRNA及蛋白表達。5.MTS檢測hRad9-siRNA轉染組和各對照組乳腺癌細胞對化療藥物阿霉素的敏感性變化。6.流式細胞術檢測hRad9-siRNA轉染組和各對照組乳腺癌細胞加藥前后凋亡情況變化。結果1. RT-qPCR、細胞爬片免疫組化及Westernblot結果表明：與對照組(NC組及空白對照組)相比hRad9-siRNA轉染組hRad9 mRNA及蛋白的表達均明顯降低。2. RT-qPCR 及 Western blot結果表明：沉默hRad9基因表達后,chk1 mRNA及蛋白表達也隨之明顯降低。3.加藥MTS檢測結果表明：沉默乳腺癌MCF-7、MDA-MB-231細胞中hRad9基因表達后能顯著增強阿霉素的細胞毒性作用。4.細胞凋亡實驗結果表明：無論是否經阿霉素處理hRad9-siRNA轉染組細胞凋亡率比對照組明顯增加。結論1.hRad9基因沉默后,可顯著提高乳腺癌細胞對阿霉素的化療敏感性及細胞凋亡率,提示hRad9可能成為新的提高腫瘤化療反應性的靶點。2.hRad9通過調控下游因子chk1蛋白表達發(fā)揮提高化療反應性的作用,hRad9/chkl通路在化療耐藥中的作用機制需要進一步的深入研究。
【關鍵詞】：hRad9 chk1 新輔助化療 乳腺癌
【學位授予單位】：山東大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R737.9
【目錄】：

• 中文摘要6-9
• 英文摘要9-13
• 符號說明13-15
• 前言15-19
• 第一部分 hRad9在乳腺癌化療反應中的作用研究19-28
• 材料與方法19-23
• 結果23-27
• 小結27-28
• 第二部分 以hRad9為靶點提高乳腺癌化療敏感性的研究28-46
• 材料與方法28-39
• 結果39-44
• 小結44-46
• 討論46-49
• 結論49-50
• 參考文獻50-53
• 致謝53-54
• 攻讀學位期問發(fā)表的學位論文目錄54-55
• 附件55-63
• 學位論文評閱及答辯情況表63

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本文編號：780733