本文關(guān)鍵詞：槲皮素對多發(fā)性骨髓瘤的抗腫瘤效應

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【摘要】：槲皮素(quercetin, Que)是廣泛存在于大自然的黃酮類的天然藥物之一。新近研究發(fā)現(xiàn)槲皮素能夠降低乳腺癌、結(jié)腸癌、鼻咽癌、卵巢癌、骨肉瘤等多種腫瘤的發(fā)生。基礎(chǔ)研究也發(fā)現(xiàn),槲皮素對于上述實體腫瘤具有抑制作用。然而,槲皮素在多發(fā)性骨髓瘤(multiple myeloma, MM)中的研究卻較少有報道。研究目的：1、研究槲皮素對MM細胞株NCI-H929增殖、凋亡和周期的影響。2、研究槲皮素對細胞凋亡、周期通路、ERK和AKT信號通路相關(guān)蛋白的影響。研究方法：1、不同濃度(0、50、100、200umol/L)的槲皮素作用于MM細胞株NCI-H9290、24、48、72h后,MTT法分別檢測不同濃度Quercetin對NCI-H929細胞增殖的影響。2、不同濃度的槲皮素處理MM細胞株NCI-H929細胞24h后,經(jīng)AnnexinV-FITC/PI染色,采用流式細胞術(shù)檢測各組細胞凋亡情況。3、不同濃度的槲皮素處理MM細胞株NCI-H929細胞24h后,經(jīng)PI單染,采用流式細胞術(shù)檢測各組細胞周期的變化。4、應用、Western Blot方法檢測不同濃度槲皮素處理MM細胞株24h后細胞增殖、凋亡和細胞周期中具有重要調(diào)節(jié)作用的信號通路相關(guān)蛋白的變化。結(jié)果：1、0、50、 100、200umol/L濃度的槲皮素分別作用于H929細胞24、48和72h后可以抑制H929細胞的增殖,且增殖活性隨藥物劑量的增加及時間的延長而顯著下降(P0.001)。2、不同濃度(0、100、200umol/L)的Que作用于H929細胞24h后可促進細胞凋亡,且各組細胞凋亡率隨濃度的增加而顯著增加,分別為10.77±1.90%、46.23±7.03%和74.96±2.57%(P0.001)。3、0、100、200umol/L的Que處理H929細胞24h后,導致MM細胞周期阻滯于G2/M期。隨著Que濃度的增加,H929細胞的G0/G1期細胞比率逐漸降低,S期比率相對升高,G2/M期細胞比率則隨濃度的增加而升高,分別為9.10士5.21%,20.08+4.91%和31.81±5.25%(P0.05)。4、不同濃度Que處理H929細胞24h后,促進凋亡相關(guān)蛋白Caspase-3、 Caspase-8 和 Caspase-9活性的升高,PARP蛋白的裂解,并下調(diào)Bcl-2蛋白表達水平。5、不同濃度Que處理H929細胞24h后,可促進細胞周期相關(guān)蛋白P53、P21、P27上調(diào)以及CDK4蛋白表達的下調(diào)。6、不同濃度Que處理H929細胞24h后,可抑制p-ERK、p-AKT蛋白表達水平。結(jié)論：1、Que在體外可以抑制MM細胞NCI-H929的細胞增殖和促進細胞凋亡。2、Que通過上調(diào)P53、P2、P27及下調(diào)CDK4蛋白的表達誘導MM細胞周期阻滯于G2/M期,抑制細胞增殖,促進細胞凋亡。3、Que能通過上調(diào)caspase-3、8、9,促進PARP蛋白裂解及下調(diào)Bcl-2蛋白的表達來促進細胞凋亡。4、Que下調(diào)p-ERK、p-AKT蛋白表達抑制細胞生長和增殖。
【關(guān)鍵詞】：槲皮素 多發(fā)性骨髓瘤 細胞凋亡 細胞周期
【學位授予單位】：南昌大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R733.3
【目錄】：

• 摘要3-5
• ABSTRACT5-9
• 中英文縮略詞表9-10
• 第1章 前言10-12
• 第2章 材料與方法12-20
• 2.1 材料12-13
• 2.1.1 細胞系12
• 2.1.2 實驗藥物及配制方法12
• 2.1.3 主要試劑及耗材12-13
• 2.1.4 實驗主要儀器設(shè)備13
• 2.1.5 實驗主要材料13
• 2.2 實驗方法13-16
• 2.2.1 細胞培養(yǎng)13-14
• 2.2.2 MTT法檢測細胞存活率14-15
• 2.2.3 Annexin V/PI雙染試劑盒檢測細胞凋亡15-16
• 2.2.4 碘化丙啶(propidium iodide,PI)單染檢測細胞周期16
• 2.3 Western Blot法檢測目的蛋白表達16-19
• 2.3.1 主要試劑和溶液配置16-17
• 2.3.2 細胞總蛋白提取17
• 2.3.3 蛋白定量及標本配置17-18
• 2.3.4 SDS-PAGE凝膠配置18
• 2.3.5 電泳、轉(zhuǎn)膜18-19
• 2.3.6 抗體標記及檢測19
• 2.4 統(tǒng)計學分析19-20
• 第3章 實驗結(jié)果20-25
• 3.1 骨髓瘤細胞生長增殖抑制實驗20-21
• 3.2 槲皮素誘導骨髓瘤細胞凋亡21
• 3.3 槲皮素誘導MM細胞G2/M期阻滯21-22
• 3.4 槲皮素通過影響凋亡相關(guān)因子誘導MM細胞凋亡22-23
• 3.5 槲皮素對細胞周期相關(guān)分子表達的影響23-24
• 3.6 槲皮素抑制AKT和ERK磷酸化24-25
• 第4章 討論25-29
• 4.1 槲皮素與腫瘤細胞增殖及凋亡25-26
• 4.2 槲皮素與腫瘤細胞周期26-27
• 4.3 槲皮素與MAPK/ERK和PI3K/Akt信號通路27-29
• 第5章 結(jié)論與展望29-30
• 致謝30-31
• 參考文獻31-34
• 攻讀學位期間的研究成果34-35
• 綜述35-41
• 參考文獻40-41

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本文編號：756786