本文關(guān)鍵詞：miRNA對肺癌的調(diào)控和易感性研究

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【摘要】：肺癌是常見的惡性腫瘤之一,在我國其發(fā)病率和死亡率都居于首位,嚴重影響人類健康和社會經(jīng)濟發(fā)展。尋找有效的作用靶點和可靠的生物標志物,為肺癌的預防、早期診斷和針對性治療提供依據(jù),是亟待解決的重大公共衛(wèi)生問題。mircoRNA是一類高度保守的短鏈非編碼RNA,通過堿基互補配對的方式識別靶mRNA,調(diào)控基因表達,參與細胞生長、分化、周期、凋亡等多個生物學過程。既往研究表明miRNA與腫瘤關(guān)系密切,在腫瘤發(fā)生過程中起到類似于癌基因或抑癌基因的作用,但是目前尚有大量的miRNA生物學功能和調(diào)控機制不明確。miRNA SNP與腫瘤易感性的關(guān)系也逐漸引起人們的重視,當SNP發(fā)生在miRNA上時,可能影響miRNA的生物學功能,進而影響腫瘤的發(fā)病風險。本研究在生物信息學分析的基礎(chǔ)上,探討miR-202和miR-1908對肺癌細胞的生物學功能及靶基因調(diào)控作用,分析miR-202和miR-1908在肺癌發(fā)生發(fā)展過程中的作用以及分子機制。另外,我們采用病例-對照研究,探究miR-202rs12355840、miR-1908 rs174561、miR-608 rs4919510、miR-548j rs4822739的基因多態(tài)性與肺癌易感性的關(guān)系,并通過細胞實驗分析miR-202 rs12355840、 miR-1908 rs174561對mir-202和mir-1908表達量的影響。研究結(jié)果為肺癌的預防、早期診斷及治療提供生物標志物和作用靶點。一、miRNA對肺癌的調(diào)控研究目的探討miR-202和miR-1908對肺癌細胞A549的生物學功能和靶基因調(diào)控。方法應用DIANA-TOOLs及KEGG數(shù)據(jù)庫對miR-202和miR-1908進行生物信息學分析,探討其可能參與的信號通路和潛在靶基因。通過慢病毒轉(zhuǎn)染,上調(diào)和下調(diào)A549細胞中miR-202和miR-1908的表達,應用MTT和流式細胞技術(shù)分別檢測miR-202和miR-1908對A549細胞增殖、細胞周期和凋亡的影響。應用RT-qPCR和Western blot技術(shù)分別檢測miR-202和miR-1908對其預測靶基因PIK3CA和PP5的mRNA和蛋白表達水平的調(diào)控。結(jié)果生物信息學分析顯示,miR-202參與的信號通路主要集中在Non-small cell lung cancer等腫瘤相關(guān)通路,并可能通過對PIK3CA的靶向調(diào)控發(fā)揮其作用。miR-1908主要參與MAPK signaling pathway等相關(guān)通路的調(diào)控,PP5為其重要潛在靶基因。生物學功能研究表明,與陰性對照組相比,上調(diào)miR-202的表達能夠抑制A549細胞增殖,引起細胞周期G1/S期阻滯,對細胞凋亡無明顯影響。上調(diào)的miR-1908的表達可引起細胞G2期阻滯,S期減少,對細胞增殖和凋亡無明顯影響。靶基因研究結(jié)果顯示,與陰性對照組相比,PIK3CA蛋白的表達量與miR-202呈負相關(guān),但其mRNA的表達無顯著性改變。與陰性對照組相比,PP5蛋白的表達量與miR-1908呈正相關(guān),其：mRNA的表達也無顯著性改變。結(jié)論miR-202可能通過對PIK3CA的負向調(diào)控影響A549細胞增殖和細胞周期,miR-1908可能通過對PP5的正向調(diào)控影響A549細胞周期。二、miRNA基因多態(tài)性與肺癌易感性研究目的探討miR-202、miR-1908、miR-608、miR-548j基因多態(tài)性對肺癌易感性的影響。方法通過病例-對照研究,收集了223例肺癌病例和224例對照的流行病學資料和血樣,采用LDR法對miR-202 rs12355840、miR-1908 rs174561、miR-608 rs4919510、miR-548j rs4822739的基因型分布進行檢測,進一步按病理類型和吸煙情況進行分層分析,探討miRNA SNP對肺癌易感性的影響。通過質(zhì)粒轉(zhuǎn)染,應用RT-qPCR技術(shù)分析miR-202和-miR-1908基因多態(tài)性對其miRNA表達的影響。結(jié)果人群研究結(jié)果顯示,miR-202 rs12355840、miR-1908 rs174561、miR-608 rs4919510、miR-548j rs4822739的基因型在病例組和對照組的分布無顯著性差異,按病理類型和吸煙分層后,也未發(fā)現(xiàn)四種miRNA SNP對肺癌發(fā)病風險存在影響。RT-qPCR結(jié)果表明,不同等位基因轉(zhuǎn)染組之間miRNA表達無顯著性差異。結(jié)論未發(fā)現(xiàn)miR-202、miR-1908、miR-608、miR-548j基因多態(tài)性與肺癌易感性存在關(guān)聯(lián),miR-202和miR-1908基因突變對miRNA表達無顯著性影響。
【關(guān)鍵詞】：肺癌 miRNA 調(diào)控 易感性
【學位授予單位】：東南大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R734.2
【目錄】：

• 中文摘要5-7
• ABSTRACT7-10
• 縮略詞表10-11
• 前言11-14
• 技術(shù)路線14-15
• 第一章 miRNA對肺癌的調(diào)控研究15-45
• 第一節(jié) miRNA KEGG信號通路分析和靶基因預測16-23
• 1 材料與方法16-17
• 2 結(jié)果17-21
• 3. 討論21-22
• 4. 結(jié)論22-23
• 第二節(jié) miR-202和miR-1908的生物學功能研究23-37
• 1 材料與方法23-31
• 2. 結(jié)果31-35
• 3. 討論35-36
• 4. 結(jié)論36-37
• 第三節(jié) miR-202和miR-1908的靶基因調(diào)控研究37-45
• 1. 材料與方法37-41
• 2. 結(jié)果41-43
• 3. 討論43-44
• 4. 結(jié)論44-45
• 第二章 miRNA基因多態(tài)性與肺癌易感性研究45-66
• 第一節(jié) miRNA基因多態(tài)性與肺癌易感性的病例對照研究46-60
• 1. 材料與方法46-50
• 2. 結(jié)果50-57
• 3. 討論57-59
• 4. 結(jié)論59-60
• 第二節(jié) miRNA等位基因?qū)iRNA表達的影響60-66
• 1. 材料與方法60-62
• 2. 結(jié)果62-64
• 3. 討論64-65
• 4. 結(jié)論65-66
• 總結(jié)66-67
• 參考文獻67-75
• 綜述75-81
• 參考文獻79-81
• 作者簡介81-82
• 攻讀碩士期間發(fā)表文章情況82-83
• 致謝83-84

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本文編號：756604