本文關(guān)鍵詞：IL-12活化免疫耐受性DC細(xì)胞促進(jìn)過繼免疫治療機(jī)制的初步探討

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【摘要】：腫瘤尤其惡性腫瘤是威脅人類生命并且極難治愈的一種疾病。腫瘤的防治成為全球亟待解決的問題,也是醫(yī)學(xué)領(lǐng)域研究的重點(diǎn)。鑒于傳統(tǒng)治療方法如手術(shù)、放療、化療等存在的不足,細(xì)胞免疫治療等腫瘤生物治療成為腫瘤治療的研究的熱點(diǎn)。過繼免疫療法作為極具潛力的一種生物治療手段備受關(guān)注,并且已經(jīng)應(yīng)用于臨床。但研究發(fā)現(xiàn)其仍存在問題:療效受限于腫瘤免疫抑制性微環(huán)境。如何打破腫瘤局部的免疫抑制性微環(huán)境已成為腫瘤免疫治療的關(guān)鍵問題。免疫耐受性DC細(xì)胞參與腫瘤免疫耐受,在腫瘤免疫逃逸中發(fā)揮重要作用。我們前期研究發(fā)現(xiàn)IL-12可以使免疫耐受性DC細(xì)胞產(chǎn)生抗腫瘤免疫反應(yīng),但作用機(jī)制尚不清楚。本文利用免疫抑制因子IL-10和TGF-β體外誘導(dǎo)免疫耐受性DC細(xì)胞,建立免疫耐受表型DC細(xì)胞模型,并通過DC細(xì)胞表面分子的流式檢測、qRT-PCR、Western blot、混合淋巴細(xì)胞增殖反應(yīng)實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證該細(xì)胞模型的正確性。此外,我們利用PCR、T4連接、同源重組等分子克隆技術(shù)構(gòu)建表達(dá)IL-12的腺病毒,并且通過流式分析和ELISA檢測腺病毒的有效性。我們也通過流式細(xì)胞檢測、混合淋巴細(xì)胞增殖反應(yīng)實(shí)驗(yàn)、腫瘤細(xì)胞殺傷實(shí)驗(yàn)、qRT-PCR、Western Blot等方法檢測IL-12對(duì)免疫耐受性DC細(xì)胞的作用并明確其部分分子機(jī)制。進(jìn)行上述研究的同時(shí),我們還探討了miR-125b對(duì)肝癌干細(xì)胞的自我更新能力的調(diào)控作用。通過課題組的前期研究基礎(chǔ),我們流式分選得到肝癌干細(xì)胞以及構(gòu)建了表達(dá)mi R-125b的慢病毒感染肝癌干細(xì)胞。通過成球能力、克隆形成能力、增殖能力、凋亡及遷移能力這幾方面的檢測來研究miR-125b對(duì)肝癌干細(xì)胞的作用。綜上所述,本文得出了一些結(jié)論如下:1.證實(shí)了通過IL-10、TGF-β誘導(dǎo)免疫耐受性DC細(xì)胞方法是可行的,而且這種免疫耐受性DC細(xì)胞可用于以后的實(shí)驗(yàn)研究。2.成功構(gòu)建了表達(dá)IL-12的腺病毒,可分泌較高濃度的IL-12。3.證明了IL-12可以改變免疫耐受性DC細(xì)胞的生物學(xué)特性,使其發(fā)揮相應(yīng)的免疫效應(yīng)作用,初步闡釋了其部分作用機(jī)制。4.說明了mi R-125b對(duì)肝癌干細(xì)胞的自我更新能力具有負(fù)向調(diào)控作用。本研究對(duì)局部改善腫瘤微環(huán)境的方法進(jìn)行了初步的探討,構(gòu)建表達(dá)IL-12的腺病毒,為針對(duì)腫瘤微環(huán)境開辟治療新策略提供很好的提示意義,也為腫瘤生物治療的后續(xù)改進(jìn)和臨床應(yīng)用提供實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù),同時(shí)也為miR-125b聯(lián)合免疫細(xì)胞靶向肝癌干細(xì)胞治療提供了實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ),具有一定的理論意義和應(yīng)用價(jià)值。
【關(guān)鍵詞】：IL-12 免疫耐受性DC細(xì)胞 腺病毒 腫瘤 miR-125b
【學(xué)位授予單位】：第三軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R730.51
【目錄】：

• 縮略語表5-7
• 英文摘要7-9
• 中文摘要9-11
• 第一章 前言11-14
• 1.1 選題緣由11
• 1.2 研究背景11-12
• 1.3 研究意義12
• 1.4 研究內(nèi)容12-13
• 1.5 研究方法13-14
• 第二章 免疫耐受表性DC細(xì)胞模型的建立14-31
• 2.1 材料與方法14-27
• 2.2 結(jié)果27-29
• 2.3 討論29-30
• 2.4 結(jié)論30-31
• 第三章 IL-12修飾DC細(xì)胞31-52
• 3.1 材料與方法31-48
• 3.2 結(jié)果48-50
• 3.3 討論50-51
• 3.4 結(jié)論51-52
• 第四章 IL-12通過IL-12Rβ1/NF-κB/STAT4來影響免疫耐受性DC細(xì)胞52-60
• 4.1 材料與方法52-55
• 4.2 結(jié)果55-58
• 4.3 討論58-59
• 4.4 結(jié)論59-60
• 第五章 mi R-125b對(duì)肝癌干細(xì)胞的自我更新能力的調(diào)控作用60-66
• 5.1 材料與方法60-62
• 5.2 結(jié)果62-64
• 5.3 討論64-65
• 5.4 結(jié)論65-66
• 參考文獻(xiàn)66-69
• 文獻(xiàn)綜述 免疫耐受性樹突狀細(xì)胞69-75
• 參考文獻(xiàn)73-75
• 攻讀學(xué)位期間的研究成果75-76
• 致謝76-77

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