本文關鍵詞：缺氧誘導膠質瘤細胞逆分化的在體研究

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【摘要】：背景及目的在中樞神經系統(tǒng),惡性程度與致死率最高的腫瘤為膠質瘤。雖然已有手術切除、放療和化療的規(guī)范治療,但患者預后欠佳,腫瘤術后極易復發(fā),且復發(fā)腫瘤惡性程度更高,放化療更耐受。因此,亟需發(fā)展新的治療手段來改善膠質瘤患者的預后。缺氧是實體瘤的一個重要特征,腫瘤干細胞的存在也已得到證實,且腫瘤干細胞處于缺氧微環(huán)境中。缺氧可以通過促進膠質瘤干細胞自我更新來加重膠質瘤惡性進展進而促進腫瘤的發(fā)生發(fā)展及放化療耐受。然而,對于分化期膠質瘤細胞是否同樣參與膠質瘤惡性進展并受缺氧微環(huán)境調控目前并未見明顯報道。為此,我們擬通過在體研究,證明缺氧可以誘導分化期膠質瘤細胞逆分化形成膠質瘤干樣細胞進而加重膠質瘤惡性進展。方法培養(yǎng)小鼠GL261膠質瘤細胞,免疫磁珠分選出CD133-GL261細胞,部分細胞缺氧培養(yǎng)21天,另一部分細胞常氧培養(yǎng)21天。luc慢病毒感染上述條件處理后的CD133-GL261細胞,獲得穩(wěn)定轉染的GL261-Luc細胞。將C57小鼠隨機分為4組,組1小鼠用缺氧培養(yǎng)21天后轉染的細胞、組2小鼠用常氧培養(yǎng)21天后轉染的細胞行顱內荷瘤(1×104/只),組1、組2小鼠均行常氧飼養(yǎng)(21%O2,5%CO2,74%N2)。于5d、10d、15d、20d、25d行活體成像,30天內觀察生存率,行腫瘤標本大體觀察及HE染色。組3、組4小鼠均用常氧培養(yǎng)21天后轉染的細胞行顱內荷瘤(5×104/只),組3小鼠行低氧飼養(yǎng)(10%O2,5%CO2,85%N2),組4小鼠行常氧飼養(yǎng)(21%O2,5%CO2,74%N2)。于5d、10d、15d、20d、25d行活體成像,30天內觀察生存率,行腫瘤標本大體觀察、HE染色,并用免疫組化、WB、RT-PCR檢測腫瘤干細胞標志物SOX-2、OCT-4、KLF-4、Nanog、CD133表達情況。結果1、組1與組2活體成像比較:活體成像顯示組1小鼠在第10天開始有明顯腫瘤形成,25d后腫瘤體積進一步增大,而組2小鼠顱內無明顯成瘤,配對樣本T檢驗得P0.001,差異具有統(tǒng)計學意義。2、組3與組4活體成像比較:組3小鼠活體成像顯示隨著低氧飼養(yǎng)時間的延長,小鼠顱內腫瘤體積逐漸增大,而組4顱內成瘤不明顯,使用配對樣本T檢驗得P0.001。3、生存期分析:30天觀察期內組1小鼠生存率低于組2小鼠,組3小鼠生存率低于組4小鼠,P0.0001,結果具有統(tǒng)計學意義。4、大體標本觀察:組1、組3小鼠顱內有明顯腫瘤形成,HE染色證實。而組2、組4顱內無明顯成瘤。5、腫瘤干細胞標志物檢測:(1)免疫組化顯示組3腫瘤內SOX-2、OCT-4、KLF-4、Nanog、CD133高表達;(2)RT-PCR檢測得正常C57小鼠、組3小鼠、組4小鼠的SOX-2、OCT-4、KLF-4、Nanog、CD133的RNA表達量,組3小鼠高于其余兩組小鼠,單因素方差分析得P≤0.001,結果具有統(tǒng)計學意義,而正常C57小鼠、組4小鼠差異P0.05,結果無統(tǒng)計學意義;(3)WB檢測顯示與正常C57小鼠、組4小鼠相比,組3小鼠腫瘤標本SOX-2、OCT-4、KLF-4、Nanog、CD133蛋白表達高,單因素方差分析得P0.05,而正常C57小鼠與組4小鼠相較無明顯差異。結論1、體外缺氧培養(yǎng)細胞小鼠顱內荷瘤后有腫瘤形成且生存率較對照組明顯降低,提示體外缺氧培養(yǎng)可以誘導膠質瘤干樣細胞的形成。2、體外常氧培養(yǎng)細胞顱內荷瘤后小鼠行低氧飼養(yǎng)顱內可以成瘤,腫瘤干細胞標志物SOX-2、OCT-4、KLF-4、Nanog、CD133表達陽性,與對照組相比低氧飼養(yǎng)組小鼠生存率明顯降低,證明體內缺氧環(huán)境可以誘導膠質瘤干樣細胞的形成。3、綜上,膠質瘤缺氧微環(huán)境可以促使膠質瘤細胞逆分化形成膠質瘤干樣細胞,進一步加重膠質瘤惡性進展。
【關鍵詞】：缺氧 膠質瘤細胞 膠質瘤干樣細胞 逆分化
【學位授予單位】：第三軍醫(yī)大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R739.41
【目錄】：

• 英文縮略詞表4-6
• 英文摘要6-9
• 中文摘要9-11
• 1. 前言11-13
• 2. 材料與方法13-26
• 3. 結果26-38
• 4. 討論38-42
• 全文結論42-43
• 參考文獻43-46
• 文獻綜述 膠質瘤治療的未來展望46-52
• 參考文獻50-52
• 攻讀學位期間發(fā)表的文章52-53
• 致謝53

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