本文關(guān)鍵詞：載洛鉑MWNTs-PEG的制備及其對肝癌細(xì)胞HepG2作用的初步研究

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【摘要】：目的:構(gòu)建載藥功能化多壁碳納米管的靶向遞藥系統(tǒng),研究其對Hep G2肝癌細(xì)胞的穿透性及細(xì)胞增殖的抑制作用。方法:1.以多壁碳納米管為原料,經(jīng)過表面氧化、�；蛊湫揎�、改性,再通過酯化反應(yīng)接枝聚乙二醇,得到功能化的多壁碳納米管(MWNTs-PEG),并進(jìn)行表征其形貌和測定其粒徑等理化性質(zhì)。2.利用π-π鍵吸附,用綠色熒光物質(zhì)FITC標(biāo)記MWNTs-PEG,通過公式計算載藥量,采用熒光分光光度法檢測其溶液中的熒光強(qiáng)度,根據(jù)熒光強(qiáng)度變化計算復(fù)合物中FITC的泄露程度。3.洛鉑(LBP)是一種常用抗腫瘤藥物,將洛鉑的前體鉑(IV)復(fù)合物通過π-π鍵連接到胺基化的MWNTs-PEG,制備LBP-MWNTs-PEG復(fù)合物,并檢測其在體外釋放情況并繪制體外釋放曲線。4.體外培養(yǎng)Hep G2肝癌細(xì)胞,激光共聚焦顯微鏡檢測Hep G2肝癌細(xì)胞對FITC標(biāo)記的MWNTs-PEG的攝取情況,并檢測FITC在細(xì)胞內(nèi)的平均熒光強(qiáng)度值。5.將LBP-MWNTs-PEG加入細(xì)胞培養(yǎng)基,以LBP為對照,分別對Hep G2肝癌細(xì)胞進(jìn)行干預(yù)24、48、72h后,采用MTT法檢測對Hep G2肝癌細(xì)胞增殖的抑制作用,并比較在不同時間的抑制效果。結(jié)果:1.透射電鏡下觀察,MWNTs在反應(yīng)前后未發(fā)生明顯的改變,且管壁形態(tài)結(jié)構(gòu)清楚,表明反應(yīng)后MWNTs結(jié)構(gòu)本身沒有被破壞。水溶性外觀呈均勻分散狀態(tài),溶液呈淡灰色。水化粒徑約為175nm,在2周內(nèi)未見明顯的粒徑變化。2.通過計算FITC的載藥量為43.2%。FITC-MWNTs-PEG泄露試驗顯示,在PH為7.4的PBS中,36h內(nèi)復(fù)合物的泄露率不超過2.0%。3.通過計算LBP的載藥量為72%。體外釋放試驗顯示,在PH為5.0的PBS中12d內(nèi)釋放可超過90%,在PH9.0的PBS中,釋放量不超過10%。表明LBP-MWNTs-PEG對酸敏感,在酸性環(huán)境中更易釋放,在中性環(huán)境中具有緩釋的效果,在堿性環(huán)境中比較穩(wěn)定且不容易釋放。4.激光共聚焦顯微鏡下可觀察到綠色和藍(lán)色熒光兩種顏色重疊,證實了MWNTs-PEG可以進(jìn)入細(xì)胞。平均熒光強(qiáng)度值為743.41±121.36。5.MTT結(jié)果顯示,在復(fù)合物作用于細(xì)胞24h后,游離LBP對Hep G2肝癌細(xì)胞增殖的抑制作用高于LBP-MWNTs-PEG;隨著時間的增加,LBP-MWNTs-PEG的細(xì)胞增殖的抑制作用逐漸增加,在藥物作用48h,藥物濃度約50ug/ml時,LBP-MWNTs-PEG對細(xì)胞增殖的抑制作用已經(jīng)高于游離LBP;72h時,游離LBP對細(xì)胞增殖的抑制作用較48h變化不明顯,然而LBP-MWNTs-CNT對細(xì)胞增殖的抑制作用進(jìn)一步增加。結(jié)論:1.經(jīng)PEG修飾的多壁碳納米管具有良好的水溶性及穩(wěn)定性,在MWNTs-PEG的基礎(chǔ)上制備了FITC-MWNTs-PEG標(biāo)記探針,并且結(jié)合了抗腫瘤藥物洛鉑,成功構(gòu)建LBP-MWNTs-PEG載藥模型。進(jìn)一步測定證明了用此種方法制備的復(fù)合物具有穩(wěn)定性及PH靶向性。2.細(xì)胞攝取實驗顯示FITC標(biāo)記的MWNTs-PEG可以進(jìn)入細(xì)胞,證明其具有良好的細(xì)胞穿透性。3.LBP-MWNTs-PEG對Hep G2肝癌細(xì)胞增殖的抑制作用,表明其具有緩釋作用,具備一定的靶向性。
【關(guān)鍵詞】：多壁碳納米管 洛鉑 Hep G2細(xì)胞 穿透性 靶向性
【學(xué)位授予單位】：山西醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R735.7
【目錄】：

• 中文摘要6-8
• 英文摘要8-11
• 常用縮寫詞中英文對照表11-12
• 前言12-14
• 第一部分PEG修飾多壁碳納米管靶向遞藥系統(tǒng)模型的構(gòu)建14-25
• 1 PEG修飾多壁碳納米管的制備和表征14-18
• 1.1 實驗?zāi)康?/span>14
• 1.2 實驗材料及儀器14
• 1.3 實驗方法14-15
• 1.4 結(jié)果15-17
• 1.5 小結(jié)17-18
• 2 FITC標(biāo)記MWNTs-PEG的制備18-21
• 2.1 實驗?zāi)康?/span>18
• 2.2 實驗材料及儀器18
• 2.3 實驗方法18-19
• 2.4 結(jié)果19-20
• 2.5 小結(jié)20-21
• 3 載洛鉑MWNTs-PEG的制備和表征21-25
• 3.1 實驗?zāi)康?/span>21
• 3.2 實驗材料及儀器21
• 3.3 實驗方法21-22
• 3.4 結(jié)果22-23
• 3.5 小結(jié)23-25
• 第二部分 制備的復(fù)合物對Hep G2肝癌細(xì)胞的體外研究25-35
• 1 主要實驗材料與試劑25-27
• 1.1 主要儀器25
• 1.2 主要試劑及耗材25-27
• 2 實驗方法27-31
• 2.1 主要工作液配制27
• 2.2 細(xì)胞培養(yǎng)27-28
• 2.3 細(xì)胞對FITC-MWNTs-PEG穿透性實驗28-29
• 2.4 MTT法檢測LBP-MWNTs-PEG對Hep G2細(xì)胞增殖的抑制作用29-30
• 2.5 統(tǒng)計學(xué)處理30-31
• 3 實驗結(jié)果31-35
• 3.1 細(xì)胞的培養(yǎng)31
• 3.2 細(xì)胞對FITC-MWNTs-PEG穿透性實驗31-32
• 3.3 MTT法檢測LBP-MWNTs-PEG對Hep G2細(xì)胞增殖的抑制作用32-35
• 討論35-39
• 結(jié)論39-40
• 參考文獻(xiàn)40-43
• 綜述43-53
• 參考文獻(xiàn)49-53
• 致謝53-54
• 在學(xué)期間承擔(dān)/參與的科研課題與研究成果54-55
• 個人簡歷55

【相似文獻(xiàn)】

中國碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 李強(qiáng);載洛鉑MWNTs-PEG的制備及其對肝癌細(xì)胞HepG2作用的初步研究[D];山西醫(yī)科大學(xué);2015年

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本文編號：614611