發(fā)布時間：2017-07-31 00:20

  本文關鍵詞：自噬在白樺酸抗結直腸癌效應中的作用和機制研究

  更多相關文章： 白樺酸 結直腸癌 凋亡 自噬 增殖

【摘要】：結直腸癌是臨床上常見的消化道惡性腫瘤之一,近年來其發(fā)病率有明顯上升的趨勢,并且治愈率低,嚴重威脅人類健康。腫瘤預防與治療的進步離不開新的化學治療藥物的開發(fā),最近發(fā)現(xiàn)最有希望應用于腫瘤治療的的天然化合物是三萜類化合物,其中白樺酸是最典型的代表。已有研究顯示,白樺酸在肺癌、乳腺癌等惡性腫瘤中具有抗腫瘤效應,但其在結直腸癌中的治療作用尚未見報道。此外,細胞自噬屬于II型程序性細胞死亡,其相關機制研究已成為腫瘤治療研究的一個新熱點。本論文對白樺酸抗結直腸癌的效應以及自噬在該效應中的作用及機制進行了初步系統(tǒng)研究。(1)白樺酸通過促調亡作用抑制結直腸癌細胞增殖使用對照和不同濃度的白樺酸,分別處理結直腸癌細胞系HCT116、SW480和HT29 48h。細胞增殖分析顯示,白樺酸顯著抑制上述結直腸癌細胞的增殖,并且抑制程度具有濃度依賴性。進而,采用Annexin-V/PI雙染法流式凋亡檢測、DAPI細胞核染色和Western Blot對細胞凋亡進行分析。流式結果顯示,在以上三種結直腸癌細胞中,與對照組相比,白樺酸處理組細胞凋亡比率顯著增多,并且凋亡率具有濃度依賴性;DAPI染核結果顯示,隨著白樺酸處理濃度的增大,細胞核固縮程度依次遞增,并且出現(xiàn)核固縮的細胞數(shù)量依次遞增;Western blot結果顯示,與對照組相比,白樺酸處理組促凋亡因子caspase3激活和parp蛋白剪切增加。上述結果提示,白樺酸可通過誘導細胞凋亡而抑制結直腸癌細胞增殖。(2)白樺酸促進結直腸癌細胞自噬的發(fā)生和自噬流的形成透射電鏡觀察結果顯示,在hct116細胞中,與對照組相比,白樺酸處理組細胞內自噬泡的數(shù)量和含有5個以上自噬泡的細胞數(shù)量均顯著增多。吖啶橙染色結果顯示,隨著白樺酸處理濃度的增加,三種結直腸癌細胞系中酸性自噬泡的數(shù)量均顯著增加。同時,激光共聚焦或者熒光顯微鏡觀察顯示,隨著白樺酸處理濃度的增加,上述細胞中l(wèi)c3斑點逐漸增多,并且含有l(wèi)c3斑點的細胞數(shù)量也逐漸增多。間接免疫熒光結果顯示,與對照組相比,白樺酸處理組細胞內lc3斑點數(shù)量顯著增多。westernblot結果顯示,lc3-i轉化為lc3-ii。rt-pcr結果顯示,白樺酸顯著誘導了atg5等自噬關鍵基因的表達。上述結果表明,白樺酸能顯著促進結直腸癌細胞自噬發(fā)生。此外,免疫共定位分析顯示,白樺酸可以促進自噬溶酶體的增多。westernblot結果顯示,氯喹或蛋白酶抑制劑處理可進一步促進白樺酸誘發(fā)的lc3-ii積累。這些結果表明,白樺酸可以促進結直腸癌細胞自噬流的形成。(3)白樺酸通過抑制akt-mtor信號通路促進自噬發(fā)生Akt-mtor是調節(jié)自噬的經(jīng)典信號通路,可抑制自噬發(fā)生。westernblot結果顯示,與對照組相比,在結直腸癌細胞中,白樺酸處理組細胞的磷酸化mtor和磷酸化akt蛋白表達均顯著降低,提示白樺酸通過抑制結直腸癌細胞Akt-mTOR信號通路而激活自噬。(4)抑制自噬可增強白樺酸對結直腸癌細胞的增殖抑制效應細胞增殖分析結果顯示,采用自噬抑制劑氯喹處理或者si RNA介導的自噬關鍵基因ATG5基因沉默策略分別抑制自噬,均能顯著增強白樺酸對結直腸癌細胞的增殖抑制率。同時,Annexin-V/PI雙染法流式檢測凋亡結果顯示,抑制自噬也進一步顯著促進了白樺酸誘導的結直腸癌細胞凋亡;Western Blot結果顯示,抑制自噬還顯著促進了促凋亡蛋白PARP的剪切激活以及抗凋亡因子bcl-xl的下調,反向提示自噬可以抑制白樺酸對結直腸癌細胞的促凋亡和增殖抑制效應。綜上,本研究的結果表明,白樺酸可通過誘導細胞凋亡而抑制結直腸癌細胞增殖,白樺酸還可通過抑制Akt-mTOR信號通路而激活結直腸癌細胞自噬,而抑制自噬則可增強白樺酸在結腸癌細胞中的抗腫瘤效應。本研究初步系統(tǒng)闡釋了白樺酸的抗結直腸癌效應與機制,為進一步的機制研究以及未來將白樺酸開發(fā)為新型的抗腫瘤藥物奠定了堅實基礎,具有積極的理論和現(xiàn)實意義。
【關鍵詞】：白樺酸 結直腸癌 凋亡 自噬 增殖
【學位授予單位】：重慶醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R735.34
【目錄】：

• 英漢縮略語名詞對照4-5
• 中文摘要5-8
• 英文摘要8-13
• 前言13-14
• 1 材料與方法14-20
• 2 結果20-37
• 3 討論37-40
• 參考文獻40-44
• 文獻綜述44-59
• 參考文獻55-59
• 致謝59-60
• 攻讀碩士期間發(fā)表的學術論文目錄60

【相似文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 王漢濤 ,Kraemer M.;隨訪危險因素分析:復發(fā)和非復發(fā)結直腸癌的比較[J];中國實用外科雜志;2001年12期

2 蘇森;患結直腸癌婦女后代癌癥的危險性增加[J];中國腫瘤;2001年06期

3 汪一虹;在確定的法國人群中年齡<45歲結直腸癌病人與≥45歲結直腸癌病人的比較[J];國外醫(yī)學(消化系疾病分冊);2002年01期

4 李會晨;結直腸癌解剖位置的連續(xù)性右向遷移[J];國外醫(yī)學.外科學分冊;2003年03期

5 李志霞;結直腸癌復發(fā)及轉移的綜合治療[J];中華胃腸外科雜志;2003年06期

6 何建苗,蒲永東,曹志宇,劉衛(wèi)平;老年人結直腸癌186例的外科治療[J];中華胃腸外科雜志;2003年05期

7 保紅平,方登華,高瑞崗,李奎,張雪松,劉天錫;青年人結直腸癌臨床病理分析[J];中國普外基礎與臨床雜志;2004年01期

8 章江;;監(jiān)測結直腸癌非常必要[J];國外醫(yī)學情報;2004年04期

9 郜文秀,楊艷芳,梁小波,李耀平,李佩珍;細胞粘附分子變異體在結直腸癌中的表達及預后[J];中國公共衛(wèi)生;2005年07期

10 Nozawa T. ,Enomoto T. ,Koshida Y. ,M. Kuranami,王志宇;人結直腸癌黏膜下血小板源性內皮細胞生長因子特異性增強表達[J];世界核心醫(yī)學期刊文摘(胃腸病學分冊);2005年06期

中國重要會議論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 鄭樹;;結直腸癌預后與轉移相關因素分析[A];2005年浙江省腫瘤學術會議全國大腸癌轉移與復發(fā)的診治研討會學術論文集[C];2005年

2 鄒一峰;吳小劍;蘭平;;結直腸癌免疫治療新進展[A];第十一次全國中西醫(yī)結合大腸肛門病學術會議論文匯編[C];2006年

3 郁寶銘;;結直腸癌治療的進展及其新理念[A];2006年浙江省肛腸外科學術年會論文匯編[C];2006年

4 王錫山;;結直腸癌治療的困惑之我見[A];第九屆全國腫瘤轉移學術大會暨2011年黑龍江省醫(yī)學會腫瘤學年會報告集[C];2011年

5 秦建平;;未病思想中的結直腸癌預防[A];貴州省中西醫(yī)結合學會肛腸學會第五屆學術交流會暨新技術新進展學習班論文匯編[C];2012年

6 高文慶;陳會林;童蕾;陸松春;;老年梗阻性結直腸癌診療體會(附42例報告)[A];首屆“之江中醫(yī)藥論壇”暨浙江省中醫(yī)藥學會2011年學術年會論文集[C];2011年

7 王啟遠;周長江;高云飛;徐巖;李坤;;血管內皮生長因子與結直腸癌[A];《中華急診醫(yī)學雜志》第八屆組稿會暨急診醫(yī)學首屆青年論壇論文匯編[C];2009年

8 巴一;;結直腸癌靶向治療進展[A];第三屆中國腫瘤內科大會教育集暨論文集[C];2009年

9 何超;朱洪波;;結直腸癌的生物治療[A];2009年浙江省腫瘤外科學術年會暨腫瘤外科規(guī)范化診治學習班論文匯編[C];2009年

10 萬德森;;進一步提高結直腸癌療效的思考[A];2009年浙江省腫瘤學術年會暨腫瘤診治新進展學習班論文匯編[C];2009年

中國重要報紙全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 中華醫(yī)學會腫瘤學分會主任委員 顧晉;分期不精確 致結直腸癌過度治療[N];健康報;2012年

2 本報記者 賈巖;跨線治療成結直腸癌最后防線[N];醫(yī)藥經(jīng)濟報;2012年

3 本報記者 賈巖;跨線治療構筑結直腸癌最后防線[N];醫(yī)藥經(jīng)濟報;2012年

4 本報記者 林琳;結直腸癌：可以治愈的癌癥[N];醫(yī)藥經(jīng)濟報;2013年

5 記者 張妍　通訊員 熊靜帆 朱品磊;深圳結直腸癌發(fā)病高于全國[N];深圳商報;2013年

6 本報記者 孫剛;預防結直腸癌：請管住嘴[N];解放日報;2013年

7 上海市中醫(yī)醫(yī)院腫瘤科 侯鳳剛 副主任醫(yī)師;中醫(yī)藥在結直腸癌治療中的作用和特色[N];上海中醫(yī)藥報;2014年

8 李華虹 孫瑜淼 記者 李麗云 實習生 陰浩;專家呼吁：結直腸癌應多學科規(guī)范化診療[N];科技日報;2014年

9 ;降低結直腸癌復發(fā)有新療法[N];人民日報;2003年

10 韓自力;新化療方案可高效治療結直腸癌[N];健康報;2007年

中國博士學位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 陳濤;MicroRNA-31/FIH-1調控關系在結直腸癌發(fā)生發(fā)展中的作用及其機制研究[D];復旦大學;2014年

2 任翡;MYBL2基因在結直腸癌的表達及機制的初步探討[D];復旦大學;2014年

3 吳朋;結直腸癌中microRNA-615基因甲基化及其生物學特性探究[D];復旦大學;2014年

4 李澤武;MicroRNA-203靶向ZNF217基因調控結直腸癌生物學行為的研究[D];山東大學;2015年

5 徐興遠;低分子肝素對結直腸癌患者預后的影響及相關機制的研究[D];復旦大學;2014年

6 梁洪亮;miR-454在結直腸癌中的功能及其作用機制[D];山東大學;2015年

7 金鵬;MMR蛋白在雌激素致結腸癌細胞凋亡中的作用及SEPT9檢測結直腸癌的研究[D];第三軍醫(yī)大學;2015年

8 珠珠;云南省Lynch綜合征候選基因標志物研究[D];昆明醫(yī)科大學;2014年

9 周智航;SEMA3F通過下調ASCL2-CXCR4軸而抑制結直腸癌轉移的分子機制[D];第三軍醫(yī)大學;2015年

10 王林;MiRNA-300對結直腸癌腫瘤侵襲和增殖的影響及其調控機制的初步研究[D];第三軍醫(yī)大學;2015年

中國碩士學位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 顏斐斐;術后結直腸癌患者癌因性疲乏與影響因素的研究[D];南方醫(yī)科大學;2009年

2 李斌;結直腸癌患者就診延遲分析[D];中南大學;2009年

3 葉建杰;慈溪市結直腸癌危險因素病例對照研究[D];浙江大學;2008年

4 趙波;結直腸癌危險因素及臨床流行病學特征的調查與分析[D];廣西醫(yī)科大學;2013年

5 崔娟娟;p53和nm23在結直腸癌中的表達及其臨床意義[D];河北聯(lián)合大學;2014年

6 宋青芳;正常腸道、癌前病變、結直腸癌相關微生物組學比較分析[D];昆明理工大學;2015年

7 郭秀燕;結直腸癌術后生存分析[D];泰山醫(yī)學院;2014年

8 王靜;TL1A在結腸炎相關結直腸癌動物模型中作用的初步探討[D];河北醫(yī)科大學;2015年

9 吳哲;Th17細胞在TL1A調控結腸炎相關結直腸癌中作用的初步研究[D];河北醫(yī)科大學;2015年

10 肖華旭;通過microRNA-155下調SOCS-1在結直腸癌的表達促進其轉移和侵襲[D];川北醫(yī)學院;2015年

，

本文編號：596691