本文關鍵詞：索拉非尼誘導腫瘤相關巨噬細胞促肝癌增殖、轉移的機制研究

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【摘要】：目的索拉非尼(Sorafenib),作為小分子多靶點蛋白激酶抑制劑,是目前唯一被FDA批準用于治療晚期肝癌的靶向藥物,盡管其在SHARP和ORIENTAL兩項三期臨床試驗中已顯示較好的抗癌活性,然而僅延長不足3個月的生存期,且對部分患者有效,提示肝癌患者存在著不同程度對Sorafenib的初級或獲得性抵抗。另一方面,研究發(fā)現(xiàn)治療過程中所導致的機體持續(xù)免疫反應是促進腫瘤發(fā)生發(fā)展的原因之一。近些年的研究逐漸開始關注分子靶向藥物治療腫瘤過程中的負面作用,包括通過影響腫瘤及其免疫微環(huán)境,直接和間接地促腫瘤的侵襲轉移。之前,已有相關研究探索了Sorafenib與免疫微環(huán)境的關系。此外,我們課題組張偉的前期研究發(fā)現(xiàn),Sorafenib治療肝癌的過程中,盡管其抑制了原位腫瘤的增長,但sorafenib動員更多單核-巨噬細胞入血和浸潤腫瘤組織促進肝癌的侵襲轉移,以及通過炎性信號通路STAT3下調(diào)抑癌基因HTATIP2的表達,進一步增加腫瘤生長、腫瘤新生血管及肺轉移灶的數(shù)量。因此,Sorafenib的確可作用于機體免疫功能從而影響其療效,但考慮炎性微環(huán)境的極其復雜,Sorafenib治療過程中是如何改變腫瘤微環(huán)境的機制需要進一步探討。鑒于腫瘤轉移是其本身及其與所處免疫微環(huán)境復雜相互作用的結果,因此,本文通過分析實驗室數(shù)據(jù),從Sorafenib治療過程中腫瘤相關巨噬細胞(Tumor Associated Macrophages,TAMs)所起的作用方面進行研究,并探索進一步提高Sorafenib療效的途徑。方法1.應用不同劑量Sorafenib(1-10μmol/L)作用小鼠巨噬細胞(RAW264.7),采用MTT技術觀察其對RAW264.7細胞增殖的影響。2.誘導RAW264.7分化為經(jīng)典途徑激活型巨噬細胞-M1型及選擇途徑激活型巨噬細胞-M2型,采用RT-PCR技術在轉錄水平檢測兩種巨噬細胞高表達因子的水平。3.Sorafenib作用RAW264.7細胞,應用RT-PCR、Elisa技術檢測巨噬細胞表型及其分泌細胞因子的變化。4.應用MTT、劃痕試驗、Transwell試驗檢測低劑量Sorafenib作用后RAW264.7及其分泌的細胞因?qū)Φ投葠盒匀烁伟㎝HCC-97L細胞系增殖、遷移及侵襲能力的影響。5.應用RT-PCR、Western bloting技術檢測sorafenib對RAW264.7細胞中相關通路的激活情況。采用相關通路抑制劑,檢測巨噬細胞極化狀態(tài)的改變,進一步明確sorafenib調(diào)控RAW264.7細胞分化的分子機制。結果1.采用MTT實驗檢測不同濃度sorafenib對巨噬細胞增殖的影響。結果顯示:與大劑量相比,低劑量sorafenib不抑制巨噬細胞的增殖。2.應用LPS誘導巨噬細胞呈現(xiàn)為M1型極化狀態(tài);IL-4誘導的巨噬細胞呈現(xiàn)為M2型極化狀態(tài),應用RT-PCR技術檢測不同極化狀態(tài)的巨噬細胞相關炎性因子在轉錄水平的表達差異,結果顯示:M1型巨噬細胞高表達炎性因子IL-12、TNF-α,低表達IL-10、Arg1,M2型巨噬細胞高表達IL-10、Arg1,低表達IL-12、TNF-α,而兩種極化狀態(tài)下轉錄水平的IL-6表達量差異較小,提示兩種巨噬細胞的極化狀態(tài)在體內(nèi)免疫微環(huán)境中所起的作用不同。3.分別采用RT-PCR、Elisa技術從m RNA、蛋白水平檢測sorafenib處理后巨噬細胞高表達因子的變化情況從而反應巨噬細胞的極化狀態(tài),結果顯示:sorafenib可以促使巨噬細胞高表達IL-10、IL-6,低表達IL-12并促進其向M2型活化。4.與sorafenib作用后的巨噬細胞共培養(yǎng)或上清夜培養(yǎng),低度惡性肝癌細胞MHCC-97L的增殖、遷移及侵襲能力顯著增強。5.采用RT-PCR、Western Blot技術證實:sorafenib通過激活巨噬細胞內(nèi)NF-k B信號通路誘導其向M2型分化,其中NF-k B亞型P50起重要作用。6.給予NFk B通路特異性抑制劑后再次檢測巨噬細胞極化狀態(tài)發(fā)現(xiàn):巨噬細胞恢復經(jīng)典極化狀態(tài)。提示NFk B通路的特異性抑制劑可以逆轉sorafenib誘導的TAMs,其與sorafenib聯(lián)合使用可能能提高sorafenib治療效果。結論1.低劑量Sorafenib不抑制巨噬細胞增值。2.M1、M2巨噬細胞表達的炎性細胞因子存在差異。3.低劑量Sorafenib誘導巨噬細胞向M2型分化,并促進其分泌促瘤相關炎性因子。4.Sorafenib作用后巨噬細胞增強了人肝癌細胞系MHCC-97L的增值、轉移、侵襲能力。5.Sorafenib通過激活NF-k B通路誘導巨噬細胞向M2型極化;通路的特異性抑制劑可以逆轉sorafenib誘導的TAMs。
【關鍵詞】：索拉非尼 肝細胞肝癌 巨噬細胞 NF-kB
【學位授予單位】：天津醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R735.7
【目錄】：

• 中文摘要4-7
• Abstract7-12
• 縮略語/符號說明12-14
• 前言14-18
• 研究現(xiàn)狀、成果14-17
• 研究目的、方法17-18
• 一、Sorafenib對巨噬細胞極化狀態(tài)的影響18-44
• 1.對象和方法18-38
• 1.1 實驗材料18-21
• 1.2 實驗方法21-36
• 1.3 細胞實驗36-38
• 2.實驗結果38-41
• 2.1 低劑量sorafenib對小鼠巨噬細胞RAW264.7 的增殖影響較小38-39
• 2.2 M1型、M2巨噬細胞炎性相關因子表達水平存在差異39-40
• 2.3 Sorafenib誘導小鼠巨噬細胞RAW264.7 向M2型分化40-41
• 3. 討論41-43
• 4. 小結43-44
• 二、Sorafenib處理后巨噬細胞對肝癌細胞生物學功能的影響44-51
• 1.對象和方法44-46
• 1.1 細胞實驗44-46
• 2.實驗結果46-49
• 2.1 低劑量sorafenib處理后巨噬細胞能夠增強肝癌細胞的遷移能力46-47
• 2.2 低劑量sorafenib處理后巨噬細胞能夠增強肝癌細胞的侵襲能力47-48
• 2.3 低劑量sorafenib處理后巨噬細胞能夠增強肝癌細胞的增殖能力48-49
• 3.討論49-50
• 4.小結50-51
• 三、Sorafenib通過激活NF-kB信號通路誘導M2型巨噬細胞分化51-57
• 1.對象和方法51-52
• 1.1 細胞實驗51-52
• 2.實驗結果52-55
• 2.1 Sorafenib不激活巨噬細胞中STAT3相關通路52-53
• 2.2 Sorafenib激活NF-kB通路促進M2型巨噬細胞活化53
• 2.3 NF-kB通路抑制劑可恢復巨噬細胞M1型活化狀態(tài)53-55
• 3.討論55-56
• 4.小結56-57
• 結論57-58
• 參考文獻58-64
• 發(fā)表論文和參加科研情況說明64-65
• 綜述 抗血管生成劑在肝癌中耐藥的研究進展65-75
• 綜述參考文獻69-75
• 致謝75

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中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 ;豚鼠巨噬細胞經(jīng)P_(204)處理后的抗石英細胞毒作用[J];國外醫(yī)學參考資料(衛(wèi)生學分冊);1976年04期

2 鄧俠進;;巨噬細胞的抗癌作用[J];遵義醫(yī)學院學報;1979年02期

3 陸天才;;疾病對肺巨噬細胞的影響[J];煤礦醫(yī)學;1982年01期

4 郭瑞清;祝彼得;;一種分離巨噬細胞的簡單方法[J];濱州醫(yī)學院學報;1990年02期

5 謝志堅;巨噬細胞異質(zhì)性[J];醫(yī)學綜述;2001年06期

6 饒艷;運動及神經(jīng)內(nèi)分泌對巨噬細胞功能的調(diào)節(jié)[J];體育與科學;2002年05期

7 朱金元;;吸煙對肺巨噬細胞的影響[J];浙江醫(yī)學教育;2003年01期

8 張俊峰;過氧化物酶體增殖物激活受體與單核/巨噬細胞系[J];醫(yī)學綜述;2004年03期

9 韋錦學;顧軍;;巨噬細胞的激活誘導死亡[J];生命科學;2006年02期

10 李曉曦;郭寧;曹雪濤;;腫瘤相關巨噬細胞促進腫瘤生長與轉移的研究現(xiàn)狀[J];中國腫瘤生物治療雜志;2008年01期

中國重要會議論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 史玉玲;王又明;豐美福;;巨噬細胞激活作用的研究[A];中國細胞生物學學會第五次會議論文摘要匯編[C];1992年

2 吳國明;周輝;;巨噬細胞和創(chuàng)傷纖維化[A];2009年浙江省骨科學學術年會論文匯編[C];2009年

3 李奇;王海杰;;透明質(zhì)酸對于淋巴結巨噬細胞運動的影響[A];解剖學雜志——中國解剖學會2002年年會文摘匯編[C];2002年

4 劉革修;歐大明;劉軍花;黃紅林;廖端芳;;丙丁酚在體外能抑制巨噬細胞脂質(zhì)氧化介導的低密度脂蛋白氧化并調(diào)節(jié)氧化巨噬細胞的分泌功能[A];面向21世紀的科技進步與社會經(jīng)濟發(fā)展（下冊）[C];1999年

5 葉金善;楊麗霞;郭瑞威;;環(huán)氧化酶-2/前列腺素E_2在血管緊張素Ⅱ刺激巨噬細胞表達細胞外基質(zhì)金屬蛋白酶誘導因子中的作用[A];第十三次全國心血管病學術會議論文集[C];2011年

6 秦帥;陳希;孔德明;;構建由綠色熒光標記巨噬細胞的轉基因斑馬魚系[A];貴州省中西醫(yī)結合內(nèi)分泌代謝學術會論文匯編[C];2012年

7 武劍華;徐惠綿;;腫瘤相關巨噬細胞在胃癌中的相關研究[A];第9屆全國胃癌學術會議暨第二屆陽光長城腫瘤學術會議論文匯編[C];2014年

8 何軍;;血凝素樣氧化型低密度脂蛋白受體升高巨噬細胞內(nèi)膽固醇水平[A];中華醫(yī)學會第11次心血管病學術會議論文摘要集[C];2009年

9 宋盛;周非凡;邢達;;PDT誘導的凋亡細胞對巨噬細胞NO合成的影響[A];第七屆全國光生物學學術會議論文摘要集[C];2010年

10 張磊;朱建華;黃元偉;姚航平;;血管緊張素Ⅱ?qū)奘杉毎?THP-1重細胞)凝集素樣氧化低密度脂蛋白受體表達的影響[A];浙江省免疫學會第五次學術研討會論文匯編[C];2004年

中國重要報紙全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 通訊員 李靜 記者 胡德榮;惡性腫瘤巨噬細胞未必皆“惡人”[N];健康報;2014年

2 蘭克;以嘗試用巨噬細胞治癱瘓[N];科技日報;2000年

3 薛佳;免疫系統(tǒng)——人體的“衛(wèi)士”[N];保健時報;2009年

4 記者 胡德榮;鐵泵蛋白“維穩(wěn)”鐵代謝作用首次闡明[N];健康報;2011年

5 侯嘉 何新鄉(xiāng);硒的神奇功能[N];中國食品質(zhì)量報;2003年

6 唐穎 倪兵 陳代杰;巨噬細胞泡沫化抑制劑研究快步進行[N];中國醫(yī)藥報;2006年

7 劉元江;新發(fā)現(xiàn)解釋腫瘤為何易成“漏網(wǎng)之魚”[N];醫(yī)藥經(jīng)濟報;2007年

8 本報記者 侯嘉 通訊員 何新鄉(xiāng);今天你補硒了嗎[N];醫(yī)藥經(jīng)濟報;2003年

9 左志剛;升血小板藥使用注意[N];醫(yī)藥養(yǎng)生保健報;2007年

10 記者 許琦敏;“鐵泵”蛋白幫助回收鐵元素[N];文匯報;2011年

中國博士學位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 周赤燕;巨噬細胞MsrA對動脈粥樣硬化的干預研究[D];武漢大學;2013年

2 章桂忠;TIPE2蛋白調(diào)控細胞增殖和炎癥的機制研究[D];山東大學;2015年

3 張瑜;DKK1抑制巨噬細胞內(nèi)脂質(zhì)沉積及其相關分子機制[D];山東大學;2015年

4 孟濤;異丙酚對心臟收縮功能的抑制作用及其對巨噬細胞分泌功能調(diào)節(jié)的機制研究[D];山東大學;2015年

5 周興;基于酵母微囊構建新型口服巨噬細胞靶向遞送系統(tǒng)的研究[D];第三軍醫(yī)大學;2015年

6 蔣興偉;Tim-3對巨噬細胞極化的調(diào)控機制研究[D];中國人民解放軍軍事醫(yī)學科學院;2015年

7 劉伯玉;清道夫受體A介導小鼠巨噬細胞吞噬鉤端螺旋體研究[D];上海交通大學;2013年

8 楊紹俊;miRNA-155介導ESAT-6誘導巨噬細胞凋亡的分子機制及其在結核診斷中的作用[D];第三軍醫(yī)大學;2015年

9 翟光耀;單核/巨噬細胞Ly6C~(low)亞群在心肌梗死后瘢痕形成期的抗炎特性研究[D];北京協(xié)和醫(yī)學院;2014年

10 韓露;TRB3介導的脂肪組織巨噬細胞極化與糖尿病冠狀動脈病變關系的研究[D];山東大學;2015年

中國碩士學位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 馬春梅;AP0E~(-/-)小鼠TLR9介導巨噬細胞極化效應對動脈粥樣硬化作用的研究[D];福建醫(yī)科大學;2015年

2 張譯丹;鹽皮質(zhì)激素受體拮抗劑調(diào)控巨噬細胞表型對實驗性矽肺的作用[D];河北醫(yī)科大學;2015年

3 盧文冉;HCV core蛋白作用的巨噬細胞培養(yǎng)上清對肝細胞生物學性狀的影響[D];河北醫(yī)科大學;2015年

4 李文建;載脂蛋白E影響巨噬細胞因子表達及分型的機制研究[D];河北醫(yī)科大學;2015年

5 曹爽;高糖對巨噬細胞TLR4信號轉導的調(diào)節(jié)作用[D];河北醫(yī)科大學;2015年

6 寧程程;腫瘤相關巨噬細胞在子宮內(nèi)膜癌雌激素敏感性中的作用及機制研究[D];復旦大學;2014年

7 高龍;PLD4在腫瘤相關巨噬細胞抑制結腸癌增殖中的作用研究[D];成都醫(yī)學院;2015年

8 任虹;感染期子宮頸癌U14細胞荷瘤小鼠抑制巨噬細胞CCL5分泌的機制研究[D];河北醫(yī)科大學;2015年

9 李美玲;雙酚A對小鼠腹腔巨噬細胞極化影響的體外研究[D];安徽醫(yī)科大學;2015年

10 劉瓊;黃芪多糖影響巨噬細胞向脂肪細胞趨化的作用及機制研究[D];新鄉(xiāng)醫(yī)學院;2015年

，

本文編號：596654