本文關鍵詞：HoxC6對胃癌細胞生物學行為的影響及機制研究

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【摘要】：胃癌是全球高發(fā)的惡性腫瘤之一。我國胃癌發(fā)病率和死亡率仍高居世界第二位。胃癌的發(fā)生發(fā)展涉及微環(huán)境和基因改變,癌基因的活化是其重要機制。尋找新的癌基因并驗證其對胃癌的作用,對確定生物學靶標、干預癌變具有重要意義。課題組前期通過胃癌組織基因芯片篩選可能與胃癌相關的候選基因,HoxC6是其中的一個候選促癌基因。HoxC6屬同源盒基因家族(簡稱：Hox家族)成員,含有兩個啟動子,轉錄兩條mRNA (HoxC6-1和HoxC6-2),其表達產(chǎn)物是重要的轉錄因子,在胚胎發(fā)育過程中對細胞分化和形態(tài)發(fā)育控制起重要作用,近年來研究發(fā)現(xiàn),Hox家族基因與多種惡性腫瘤的發(fā)生發(fā)展及預后密切相關。HoxC6與胃癌發(fā)生發(fā)展的關系值得深入研究。本研究將通過檢測胃癌組織及胃癌細胞株中HoxC6、HoxC6-1及HoxC6-2的表達水平,分析三者與患者臨床病理資料之間的相關性；通過siRNA干擾技術,特異性降低HoxC6、HoxC6-1及HoxC6-2表達,觀察其對胃癌細胞惡性生物學行為(細胞增殖、遷移、侵襲等)的影響,同時運用生物信息學技術篩選HoxC6潛在調(diào)控的基因、核酸并進行初步驗證。研究內(nèi)容1、HoxC6、HoxC6-1及HoxC6-2在胃癌中的表達,及其與胃癌臨床資料之間的相關性①實時定量PCR(qRT-PCR)檢測比對47對胃癌組織與配對正常胃組織中HoxC6、 HoxC6-1及HoxC6-2 mRNA表達水平；②結合胃癌患者臨床、病理資料,分析HoxC6、HoxC6-1及HoxC6-2 mRNA表達水平與各臨床、病理資料之間的相關性；③ qRT-PCR和Western Blot檢測7株胃癌細胞及1株正常胃粘膜上皮細胞中HoxC6、HoxC6-1及HoxC6-2的表達情況。2、特異性siRNA干擾HoxC6、HoxC6-1及HoxC6-2后胃癌細胞惡性生物學行為的變化①采用細胞活性實驗(MTS)觀察siRNA干擾HoxC6、HoxC6-1及HoxC6-2對SGC-7901和BGC-823細胞增殖的影響；② Transwell遷移和侵襲實驗研究siRNA干擾HoxC6、HoxC6-1及HoxC6-2對SGC-7901和BGC-823細胞遷移、侵襲的影響；③采用流式細胞儀檢測siRNA干擾HoxC6、HoxC6-1及HoxC6-2后SGC-7901和BGC-823細胞的凋亡和細胞周期變化。3. HoxC6潛在調(diào)控基因、核酸的篩選及初步驗證運用生物信息學技術(TFSEARCH、TRANSFEC、MEME等軟件)預測HoxC6可能調(diào)控的基因或核酸,聯(lián)合genecards、pubmed、文獻等綜合得出基因、核酸的功能,結合前期實驗中HoxC6在增殖、遷移、侵襲等方面的作用,篩選出HoxC6可能調(diào)控的有功能的基因、核酸,并分別在轉染HoxC6 siRNA的SGC-7901和BGC-823細胞中進行qRT-PCR驗證。研究結果：1、HoxC6、HoxC6-1及HoxC6-2在胃癌組織中表達量明顯增加,表達水平與胃癌患者腫瘤分期及淋巴結浸潤等呈不同程度相關①胃癌組織中HoxC6、HoxC6-1及HoxC6-2 mRNA水平較正常胃組織顯著上調(diào)(p0.01)；②HoxC6、HoxC6-1及HoxC6-2 mRNA水平與胃癌患者腫瘤分期及淋巴結浸潤等呈不同程度相關；③HoxC6、HoxC6-1及HoxC6-2在SGC-7901、BGC-823胃癌細胞株中表達量均相對較高(用升高倍數(shù)folds±方差SD表示)。HoxC6:2.76±0.02、4.21±0.06; HoxC6-1:2.39±0.35、1.81±0.07; HoxC6-2:2.65±0.29、5.41±0.21。2、siRNA干擾HoxC6、HoxC6-1及HoxC6-2能不同程度抑制胃癌細胞增殖,siRNA干擾HoxC6-2能顯著抑制胃癌細胞的遷移和侵襲。①建立了分別成功干擾HoxC6、HoxC6-1及HoxC6-2的胃癌細胞株系SGC-7901和BGC-823,通過qRT-PCR和Western Blot檢測進行了驗證；② siRNA分別干擾HoxC6、HoxC6-1及HoxC6-2能顯著抑制胃癌細胞的增殖(p0.01)(SGC-7901:抑制率IR依次為12.7%、9.76%、29.54%; BGC-823: IR依次為41.16%、38.08%、44.86%)；③與空載組相比,干擾HoxC6-2能顯著抑制胃癌細胞的遷移(SGC-7901：抑制率IR= 65.62%、p0.01; BGC-823:IR=56.75%、p=0.04)和侵襲(SGC-7901: IR=55.72%、p=0.03; BGC-823:IR=46.07%、p0.01);總凋亡較空載組顯著增加(SGC-7901:5%±0.18%/7.94%±0.52%, p0.01; BGC-823: 5.2%±0.47%/10.25%±0.58%, p0.01)、顯著影響細胞周期(SGC-7901:G2期增加,p=0.02; BGC-823:G1期增加,p0.01)；而干擾HoxC6、HoxC6-1時,胃癌細胞的上述生物學行為受到影響,但沒有統(tǒng)計學差異(p0.05)。3. HoxC6潛在調(diào)控基因、核酸的篩選及初步驗證①運用生物信息學技術預測到HoxC6可能調(diào)控的基因53個、micRNA和lncRNA共22個；②篩選出重要的基因7個(JunD、BMP7、Bcl-2、MKI67、WIF1、CASP1、Spl); qRT-PCR證實siRNA干擾HoxC6后,JunD、BMP7、MKI67、CASP1、Spl mRNA水平顯著升高,而WIF1、Bcl-2mRNA水平明顯下降。③同時篩選到一個重要的長鏈非編碼RNA HOTAIR,發(fā)現(xiàn)HOTAIR在胃癌組織及多種胃癌細胞株中表達升高。siRNA干擾HoxC6后,HOTAIR的表達水平顯著降低。研究結論1. HoxC6、HoxC6-1及HoxC6-2在人胃癌組織中表達量增加；2、HoxC6、HoxC6-1及HoxC6-2的表達與胃癌患者腫瘤分期及淋巴結浸潤等呈不同程度相關；3、干擾HoxC6、HoxC6-1及HoxC6-2可明顯抑制胃癌細胞的增殖,尤以干擾HoxC6-2時抑制作用最明顯,且對胃癌細胞遷移和侵襲有明顯抑制作用。研究結果提示HoxC6在胃癌的發(fā)生中可能扮演促癌基因的角色；4、HoxC6可能通過與長鏈非編碼RNA HOTAIR互作,從而促進胃癌細胞的增殖、遷移和侵襲。
【關鍵詞】：HoxC6 胃癌 RNA干擾 HOTAIR
【學位授予單位】：浙江大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R735.2
【目錄】：

• 致謝4-6
• 中文摘要6-10
• 英文摘要10-14
• 英文縮寫一覽表14-18
• 引言18-20
• 第一部分 HoxC6、HoxC6-1及HoxC6-2在胃癌中的表達、與胃癌臨床資料之間的相關性20-42
• 1.1 材料和方法20-33
• 1.2 結果33-39
• 1.3 討論39-41
• 1.4 結論41-42
• 第二部分 特異性siRNA干擾HoxC6、HoxC6-1及HoxC6-2后胃癌細胞惡性生物學行為的變化42-71
• 2.1 材料與方法42-51
• 2.2 結果51-67
• 2.3 討論67-70
• 2.4 結論70-71
• 第三部分 HoxC6潛在調(diào)控基因或核酸的初步篩選及驗證71-82
• 3.1 材料和方法72-75
• 3.2 結果75-79
• 3.3 討論79-81
• 3.4 結論81-82
• 全文總結82-83
• 參考文獻83-90
• 綜述90-100
• 參考文獻97-100
• 個人簡歷100

【共引文獻】

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本文編號：593984