本文關鍵詞：人類肝細胞性肝癌細胞系Hep G2和Li-7在裸鼠體內(nèi)成瘤研究及其血清蛋白譜分析，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的:將人類肝細胞性肝癌(Hepatocellular Carcinoma,HCC)細胞系Hep G2和Li-7的細胞懸液,分別接種在BALB/c A-nu裸鼠(雌性,4周齡)的左上肢背側皮下,以研究其在裸鼠體內(nèi)的致瘤作用。采用表面增強激光解吸電離飛行時間質(zhì)譜儀(Surface Enhanced Laser Desorption/Ionization Time of Flight Mass Spectrometry,SELDI-TOF-MS),在不同的時間點分析裸鼠體內(nèi)微量蛋白質(zhì)的變化,以篩選與肝癌相關的微量蛋白標志物。方法:購買商品化的Hep G2和Li-7細胞系,在大量傳代培養(yǎng)之后,選擇處于對數(shù)生長期的細胞,采用RPMI-1640細胞培養(yǎng)基將其配制成一定濃度的細胞懸液,并以一定的劑量接種在裸鼠的左上肢背側皮下。對照組在相同的部位接種同等劑量的RPMI-1640細胞培養(yǎng)基。觀察裸鼠的生長情況,每周定時稱量裸鼠體重。裸鼠取血采用摘眼球取血法。對于注射Hep G2細胞的裸鼠,分別在注射后的第20天,第40天和第60天的三個時間點取血,每個時間點均包括一組對照組和一組實驗組裸鼠。對于注射Li-7細胞的裸鼠,在注射后的第40天取血。待所取得的血液凝固后,在常溫下離心6分鐘,轉(zhuǎn)速為6000 rpm(Revolutions Per Minute,轉(zhuǎn)/分鐘)。將獲得的血清分裝在新的ep管中,并立即凍存在超低溫(-80℃)冰箱。待裸鼠死亡之后,取出重要臟器肝,肺,腎,胃做病理檢查。采用SELDI-TOF-MS分析血清中的蛋白譜變化,利用質(zhì)譜儀系統(tǒng)自帶分析軟件(Ciphergen Protein Chip 3.0和Ciphergen Biomaker Wizard 3.1)和統(tǒng)計學分析軟件SPSS 16.0對所取得的數(shù)據(jù)進行分析,從而篩選出具有差異性的蛋白。結果:(1)兩種人類HCC細胞系在裸鼠體內(nèi)均未形成瘤塊。注射Hep G2細胞的裸鼠解剖未發(fā)現(xiàn)臟器異常,注射Li-7細胞的裸鼠,其肝臟出現(xiàn)水腫,胃出現(xiàn)灶性粘膜腸化的現(xiàn)象;(2)注射Hep G2細胞的裸鼠,對照組裸鼠在生長過程中的不同時間點間出現(xiàn)了9個差異微量蛋白,其中上調(diào)的有3個,質(zhì)荷比(Mass-to-Charge Ratio,M/Z)分別為4014.16、4122.70和8373.05,下調(diào)的有3個,M/Z分別為1264.62、1491.80和22582.5。實驗組裸鼠在生長過程中的不同時間點間出現(xiàn)了29個差異蛋白,其中上調(diào)的有5個,M/Z分別為3701.15、4560.87、8169.14、8258.08和12047.4,下調(diào)的有3個,M/Z分別為1025.35、1045.15和4319.54,這些具有規(guī)律性變化的微量蛋白質(zhì)在對照裸鼠體內(nèi)均未發(fā)現(xiàn)。對照組和實驗組裸鼠在生長過程中同時出現(xiàn)的差異蛋白有4個,M/Z分別1264.62、1491.80、4014.16和8373.05,其中,4014.16和8373.05在對照組中上調(diào),1264.62和1491.80在對照組中下調(diào),而這4個蛋白在實驗組中沒有規(guī)律性變化。(3)注射Li-7細胞的裸鼠,對照組和實驗組出現(xiàn)了12個差異性微量蛋白,M/Z分別為1027.39、1087.44、1179.59、1192.62、1483.17、1563.20、3763.00、3869.26、4319.54、6646.16、8793.72和9259.75。結論:1.人類HCC細胞系Hep G2和Li-7在裸鼠體內(nèi)不致瘤。并不是每一種肝癌細胞系在裸鼠體內(nèi)都可以復制出模型。2.采用SELDI-TOF-MS分析血清的蛋白變化,篩選具有差異的蛋白,可以為肝癌的診斷和研究提供新思路。3.不同肝癌細胞系在裸鼠體內(nèi)所產(chǎn)生的的微量蛋白種類和數(shù)量不同,提示不同細胞系的肝癌應具有不同的微量蛋白標志物。
【關鍵詞】：SELDI-TOF-MS HCC 蛋白質(zhì)組學 Hep G2 Li-7
【學位授予單位】：四川醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R735.7
【目錄】：

• 中文摘要4-7
• 英文摘要7-10
• 前言10-19
• 第一部分 人類 HCC 細胞系 Hep G2 和 Li-7 在裸鼠中的成瘤研究19-28
• 材料與方法19-28
• 1 實驗材料19-20
• 2 主要實驗試劑20
• 3 主要實驗儀器20-21
• 4 實驗方法21-28
• 第二部分 裸鼠血清蛋白譜分析28-31
• 1 實驗材料28
• 2 主要實驗試劑28
• 3 主要實驗儀器28-29
• 4 實驗方法29-31
• 結果31-41
• 討論41-48
• 結論48-49
• 參考文獻49-53
• 英漢縮略詞對照表53-55
• 致謝55-56
• 膽管細胞性肝癌的診斷和預后血清標志物（綜述）56-86
• References73-86

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 郝華;歐海玲;崔錦珠;;蛋白質(zhì)組學技術在肝癌研究中的應用進展[J];臨床和實驗醫(yī)學雜志;2009年05期

  本文關鍵詞：人類肝細胞性肝癌細胞系Hep G2和Li-7在裸鼠體內(nèi)成瘤研究及其血清蛋白譜分析，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：509972