發(fā)布時(shí)間：2017-06-25 22:16

  本文關(guān)鍵詞：轉(zhuǎn)錄因子c-Jun通過(guò)調(diào)控β3GnT8表達(dá)改變肝癌細(xì)胞侵襲、遷移機(jī)制研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的:探討轉(zhuǎn)錄因子c-Jun通過(guò)對(duì)β3GnT8的調(diào)控作用發(fā)揮對(duì)肝癌細(xì)胞侵襲、遷移調(diào)控的作用機(jī)制。方法:(1)培養(yǎng)三種人肝癌細(xì)胞株SK-Hep-1、SMMC7721、HepG2,Real time PCR及Western blot檢測(cè)c-jun和β3GnT8的表達(dá);(2)染色質(zhì)免疫共沉淀(ChIP)檢測(cè)轉(zhuǎn)錄因子c-Jun與β3GnT8啟動(dòng)子區(qū)相互結(jié)合;(3)c-jun正義載體及空載體和c-jun干擾載體及空載體分別通過(guò)脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染c-Jun低表達(dá)細(xì)胞株SK-Hep-1和c-Jun高表達(dá)細(xì)胞株HepG2,熒光顯微鏡觀察轉(zhuǎn)染效率;(4)Real time PCR及Western blot檢測(cè)轉(zhuǎn)染后SK-Hep-1和HepG2 c-jun、β3GnT8、CD147以及一些相關(guān)分子的表達(dá)變化;(5)Lectin blot檢測(cè)轉(zhuǎn)染后多聚乳糖胺表達(dá)變化;(6)Transwell檢測(cè)轉(zhuǎn)染后SK-Hep-1和HepG2細(xì)胞侵襲、遷移能力變化;(7)劃痕損傷修復(fù)實(shí)驗(yàn)檢測(cè)轉(zhuǎn)染后SK-Hep-1和HepG2細(xì)胞遷移能力變化;(8)低表達(dá)β3GnT8 SK-Hep-1與SMMC7721構(gòu)建上調(diào)β3GnT8穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞株;(9)c-jun干擾載體及空載體分別通過(guò)脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染SK-Hep-1與SMMC7721上調(diào)β3GnT8穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞株,Western blot檢測(cè)轉(zhuǎn)染后SK-Hep-1和SMMC7721 c-Jun、β3GnT8、CD147表達(dá)變化,Lectin blot檢測(cè)細(xì)胞多聚乳糖胺表達(dá)變化,Transwell實(shí)驗(yàn)檢測(cè)細(xì)胞侵襲、遷移能力變化。結(jié)果:(1)三種肝癌細(xì)胞中HepG2的c-Jun表達(dá)量最高,其次為SMMC7721,SK-Hep-1的c-Jun表達(dá)最低;β3GnT8在HepG2中表達(dá)最高,SK-Hep-1中表達(dá)適中,SMMC7721表達(dá)最低;(2)ChIP結(jié)果顯示,SK-Hep-1和HepG2細(xì)胞中轉(zhuǎn)錄因子c-Jun結(jié)合到β3GnT8 DNA啟動(dòng)子區(qū);(3)Real time PCR及Western blot檢測(cè)發(fā)現(xiàn),與對(duì)照組相比,SK-Hep-1細(xì)胞上調(diào)c-jun后,細(xì)胞β3GnT8 mRNA及蛋白表達(dá)升高,GNTⅤ蛋白表達(dá)升高,HG-CD147蛋白表達(dá)升高,MMP14 mRNA表達(dá)升高,TIMP2蛋白表達(dá)降低;與對(duì)照組相比,HepG2細(xì)胞干擾c-jun后,細(xì)胞β3GnT8mRNA及蛋白表達(dá)下降,GNTⅤ蛋白表達(dá)下降,CD147 mRNA及HG-CD147蛋白表達(dá)下降,MMPs mRNA表達(dá)下降,TIMP2蛋白表達(dá)升高;(4)Lectin blot結(jié)果顯示,與對(duì)照組相比,SK-Hep-1細(xì)胞上調(diào)c-jun后,細(xì)胞多聚乳糖胺表達(dá)升高;與對(duì)照組相比,HepG2細(xì)胞干擾c-jun后,細(xì)胞多聚乳糖胺表達(dá)下降;(5)Transwell及細(xì)胞劃痕損傷修復(fù)實(shí)驗(yàn)表明,與對(duì)照組相比,SK-Hep-1細(xì)胞上調(diào)c-jun后,細(xì)胞侵襲、遷移能力上升;HepG2細(xì)胞干擾c-jun后,細(xì)胞侵襲、遷移能力下降;(6)Western blot檢測(cè)SK-Hep-1與SMMC7721β3GnT8穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞株蛋白表達(dá),與對(duì)照組相比,β3GnT8表達(dá)顯著升高,HG-CD147表達(dá)升高,Lectin blot實(shí)驗(yàn)表明,細(xì)胞多聚乳糖胺表達(dá)顯著升高,Transwell實(shí)驗(yàn)表明,細(xì)胞侵襲遷移能力上升;Western blot檢測(cè)SK-Hep-1與SMMC7721β3GnT8穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞株轉(zhuǎn)染c-jun干擾載體后蛋白表達(dá),與穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞株相比,β3GnT8表達(dá)下降,HG-CD147表達(dá)下降,Lectin blot實(shí)驗(yàn)表明,細(xì)胞多聚乳糖胺表達(dá)下降,Transwell實(shí)驗(yàn)表明,細(xì)胞侵襲遷移能力下降。結(jié)論:(1)β3GnT8可通過(guò)改變多聚乳糖胺的表達(dá)和糖蛋白CD147糖基化水平影響細(xì)胞功能,在肝癌細(xì)胞侵襲、遷移過(guò)程中發(fā)揮重要作用,過(guò)表達(dá)β3GnT8可提高肝癌細(xì)胞侵襲、遷移能力。(2)c-Jun作為轉(zhuǎn)錄因子在SK-Hep-1和HepG2細(xì)胞中調(diào)控β3GnT8的表達(dá),該作用可能是c-Jun調(diào)控肝癌細(xì)胞侵襲、遷移能力的機(jī)制之一。
【關(guān)鍵詞】：β3GnT8 侵襲遷移 CD147 多聚乳糖胺 轉(zhuǎn)錄因子c-Jun 肝癌
【學(xué)位授予單位】：蘇州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R735.7
【目錄】：

• 摘要4-6
• Abstract6-9
• 前言9-25
• 參考文獻(xiàn)17-25
• 1.引言25-26
• 2.材料與方法26-41
• 3.實(shí)驗(yàn)結(jié)果41-59
• 4.討論59-63
• 參考文獻(xiàn)63-66
• 全文總結(jié)66-67
• 綜述：肝癌中轉(zhuǎn)錄因子c-Jun的作用研究67-75
• 參考文獻(xiàn)71-75
• 攻讀學(xué)位期間本人出版或公開發(fā)表的論文75-76
• 受資助的基金項(xiàng)目76-77
• 附錄Ⅰ 中英文縮略詞表77-79
• 致謝79-80

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本文編號(hào)：483798