本文關(guān)鍵詞：LASS2表達(dá)對(duì)膀胱癌EJ細(xì)胞體內(nèi)致瘤能力的影響及機(jī)理探討，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：[目的]建立裸鼠原位膀胱癌種植模型和皮下膀胱癌種植模型；通過(guò)觀察瘤灶的部位和數(shù)目,檢測(cè)腫瘤中LASS2表達(dá)變化,同時(shí)檢測(cè)增殖、凋亡等指標(biāo)(Bcl-2、Bcl-xL、 Bax、Bim、caspase3、Ki-67)的變化,明確LASS2表達(dá)對(duì)膀胱癌EJ細(xì)胞體內(nèi)致瘤能力的影響并探討其機(jī)制。[方法]1.建立原位膀胱癌裸鼠種植模型和皮下膀胱癌裸鼠種植模型(1)原位膀胱癌裸鼠種植模型：分別對(duì)每組的裸鼠常規(guī)消毒并麻醉后,手指擠壓裸鼠下腹部排空膀胱內(nèi)尿液,經(jīng)尿道插入導(dǎo)管,推進(jìn)約1cm左右即可進(jìn)入膀胱,用PBS沖洗膀胱,排空膀胱后向膀胱內(nèi)注入胰蛋白酶,夾管保留30min后放出胰蛋白酶并用PBS沖洗。在裸鼠排空膀胱后將EJ單細(xì)胞懸液灌注入膀胱,并夾管保留1小時(shí),1小時(shí)后拔出導(dǎo)管,膀胱自行排空。DMEM膀胱癌細(xì)胞培養(yǎng)基作為對(duì)照組(2)膀胱癌細(xì)胞皮下注射裸鼠轉(zhuǎn)移模型：碘伏消毒裸鼠皮膚,EJ細(xì)胞株按常規(guī)計(jì)數(shù)后,使用EDTA/胰酶進(jìn)行消化,離心后用生理鹽水重懸。于每只裸鼠左腋皮下注射入膀胱癌EJ細(xì)胞。2.觀察裸鼠致瘤情況。一周2次觀察裸鼠的狀態(tài)及飲食情況,通過(guò)下腹部觸摸膀胱是否有腫塊或變硬,擠壓膀胱觀察是否有血尿,對(duì)癌細(xì)胞的致瘤情況進(jìn)行初步判斷；脫臼處死裸鼠,詳細(xì)檢查裸鼠的胸腔、腹腔、盆腔等肉眼可見(jiàn)部位的臟器有無(wú)腫瘤的出現(xiàn),據(jù)此初步確定腫瘤的轉(zhuǎn)移情況。稱(chēng)取瘤重,繪制腫瘤生長(zhǎng)曲線。3.檢測(cè)LASS2及增殖、凋亡等指標(biāo)變化。應(yīng)用實(shí)時(shí)定量PCR、western blot和免疫組織化學(xué)檢測(cè)腫瘤中LASS2變化、檢測(cè)增殖、凋亡等指標(biāo)(Bcl-2、Bcl-xL、 Bax、Bim、caspase3、Ki-67)。[結(jié)果]1.成功建立了原位膀胱癌裸鼠種植模型和膀胱癌細(xì)胞皮下注射裸鼠轉(zhuǎn)移模型。2.原位膀胱癌裸鼠種植模型致瘤效果不理想,皮下種植組成瘤率100%。兩組模型中的裸鼠均未發(fā)現(xiàn)體內(nèi)臟器轉(zhuǎn)移現(xiàn)象。病理切片觀察,皮下移植組和原位移植瘤組均顯示腫瘤組織內(nèi)有大量分化程度低、形態(tài)不規(guī)則、大小不一、胞質(zhì)豐富的深著色細(xì)胞,細(xì)胞核異型性明顯,同時(shí)可見(jiàn)少量細(xì)胞核分裂。3.免疫組化染色后,證實(shí)LASS2蛋白主要表達(dá)于細(xì)胞的細(xì)胞漿和細(xì)胞膜上,少數(shù)細(xì)胞核中也可以見(jiàn)著染。LASS2的表達(dá)：正常膀胱組原位組皮下組。4.免疫組化對(duì)膀胱腫瘤組織和皮下腫瘤組織的Ki67蛋白進(jìn)行檢測(cè),結(jié)果顯示對(duì)照組原位組皮下組,差異具有顯著性。5.熒光定量PCR檢測(cè)各組間Bc12家族各因子,結(jié)果顯示Bcl-2和Bcl-xl呈現(xiàn)高表達(dá),Bcl-2在皮下種植瘤和原位種植瘤組織中的表達(dá)明顯較正常膀胱組織高；而B(niǎo)cl-xl在原位種植瘤組織中的表達(dá)高于其他兩組,差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；Bax和Bim均呈現(xiàn)低表達(dá),Bax在各組中的表達(dá)水平無(wú)明顯差異；而B(niǎo)im在皮下種植瘤的表達(dá)水平明顯低于正常膀胱組織,原位種植瘤和正常膀胱組織中的Bim表達(dá)也無(wú)明顯差異。6.對(duì)caspase3、LASS2和ki67進(jìn)行了mRNA和蛋白水平的檢測(cè),結(jié)果顯示：caspase3在各組組織中的表達(dá)無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異；LASS2在正常膀胱組織中的表達(dá)較其他兩種腫瘤組織中的表達(dá)顯著升高,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；而ki67在皮下種植瘤組織中的表達(dá)較其他兩種腫瘤組織中的表達(dá)顯著升高,差異也具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。[結(jié)論]1.原位膀胱癌裸鼠種植模型致瘤效果不理想,成瘤率極低,而皮下移植瘤成瘤率為100%。兩組模型體內(nèi)均未見(jiàn)重要臟器轉(zhuǎn)移,轉(zhuǎn)移能力不確切,LASS2基因?qū)τ诎螂装┘?xì)胞體內(nèi)轉(zhuǎn)移能力的影響有待進(jìn)一步的研究檢測(cè)。2.在原位種植組的膀胱組織中,LASS2的表達(dá)明顯低于對(duì)應(yīng)的正常膀胱組織組。同皮下實(shí)體瘤組織比較,原位種植組的LASS2水平提高。原位種植組腫瘤和皮下種植組腫瘤組織中Ki67的蛋白染色均較對(duì)照組的表達(dá)顯著升高。這提示我們LASS2的表達(dá)可能影響體內(nèi)膀胱癌細(xì)胞的成瘤能力,LASS2對(duì)腫瘤增殖能力的影響可能與ki67的表達(dá)改變有關(guān)。
【關(guān)鍵詞】：LASS2 膀胱癌 體內(nèi) 致瘤能力 機(jī)理
【學(xué)位授予單位】：昆明醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類(lèi)號(hào)】：R737.14
【目錄】：

• 縮略詞表5-6
• 中文摘要6-9
• 英文摘要9-12
• 前言12-14
• 材料與方法14-25
• 結(jié)果25-40
• 討論40-46
• 結(jié)論46-47
• 參考文獻(xiàn)47-51
• 綜述51-60
• 參考文獻(xiàn)57-60
• 攻讀學(xué)位期間獲得的學(xué)術(shù)成果60-61
• 致謝61

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