肝癌(HCC)已成為全球第二大癌癥相關的死亡病因,根據(jù)2015年全國癌癥統(tǒng)計分析,肝癌占國內惡性腫瘤發(fā)病率的五分之一,已成為嚴重威脅我國人民健康和生命的一大殺手。據(jù)統(tǒng)計,90%以上的肝癌是原發(fā)性肝癌,可由慢性乙型肝炎病毒(HBV)、丙型肝炎病毒(HCV)、酗酒、或與糖尿病和肥胖相關的代謝性疾病所誘發(fā)。手術切除,肝移植,放療及藥物化療是目前治療肝癌的常見方式,而手術切除仍是治療肝癌最有效的手段。但是由于肝癌的高轉移潛能和腫瘤新生血管的侵犯,臨床上只有不足20%的患者能行手術切除,并且肝癌的高復發(fā)性又導致患者術后5年的生存率不到30%,這一現(xiàn)象是目前困擾臨床治療的一大難題。研究認為肝癌的高轉移性和異常激活的血管生成,是導致肝癌患者術后易復發(fā)及低生存率的主要原因。因此研究闡明調控肝癌轉移和異常血管新生的原因及探究肝癌治療新的靶點,是目前急需解決的問題,同時也具有非常重要的意義。腫瘤壞死因子α誘導蛋白1(TNFAIP1),又稱B12或BACURD2,是一種可由TNF-α或LPS誘導的蛋白,在參與腫瘤細胞的增殖、凋亡、遷移、DNA合成、免疫、神經元發(fā)育和阿爾茲海默疾病中,起重要的調控作用。然而,T...

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【學位級別】：博士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
1.前言
2 實驗材料和方法
    2.1 實驗材料與試劑
        2.1.1 實驗材料
        2.1.2 實驗試劑
    2.2 儀器與設備
    2.3 實驗方法
        2.3.1 病人組織樣本
        2.3.2 實驗動物
        2.3.3 細胞培養(yǎng)、凍存和復蘇
        2.3.4 質粒構建及質粒提取
        2.3.5 細胞轉染
        2.3.6 構建穩(wěn)轉細胞系
        2.3.7 RNA提取和熒光定量PCR(RT-qPCR)
        2.3.8 Western blot分析
        2.3.9 免疫組化和評分
        2.3.10 蘇木精-伊紅(HE)染色
        2.3.11 免疫熒光
        2.3.12 免疫共沉淀
        2.3.13 液相色譜-串聯(lián)質譜法(LC-MS/MS)
        2.3.14 蛋白質純化和GST-pull down
        2.3.15 泛素化分析
        2.3.16 細胞增殖和TUNEL分析
        2.3.17 Trans well分析
        2.3.18 血管生成實驗
        2.3.19 肺轉移實驗
        2.3.20 裸鼠成瘤實驗
        2.3.21 統(tǒng)計分析
3 結果與分析
    3.1 TNFAIP1 在肝癌組織中低表達
    3.2 TNFAIP1 在肝癌轉移組織和肝癌細胞中低表達
    3.3 TNFAIP1 抑制肝癌細胞增殖和成瘤
    3.4 TNFAIP1 促進肝癌細胞凋亡
    3.5 TNFAIP1 抑制肝癌細胞的遷移、侵襲和轉移
    3.6 TNFAIP1 下調與細胞增殖,遷移和侵襲相關基因的表達
    3.7 TNFAIP1 抑制肝癌血管生成
    3.8 TNFAIP1 下調血管內皮生長因子(VEGF)的表達
    3.9 TNFAIP1 通過阻斷NF-κB的轉錄活性抑制肝癌的進展
    3.10 .TNFAIP1與CSNK2B相互作用,促進其泛素介導的降解,抑制CSNK2B依賴的NF-κB轉錄激活
        3.10.1 TNFAIP1與CSNK2B存在相互作用
        3.10.2 CSNK2B促進NF-κB通路的轉錄激活
        3.10.3 TNFAIP1 下調CSNK2B的表達
        3.10.4 TNFAIP1-Cul3 復合物促進CSNK2B泛素介導的降解
        3.10.5 TNFAIP1 下調CSNK2B抑制NF-κB通路
    3.11 .過表達CSNK2B逆轉TNFAIP1 對肝癌的作用
    3.12 臨床肝癌標本中TNFAIP1與CSNK2B的相關性分析
4 討論
參考文獻
攻讀博士學位期間已發(fā)表的學術論文目錄
英文縮寫表
致謝



本文編號：4049336