發(fā)布時間：2024-06-03 01:51

　　目的:結(jié)直腸癌(Colorectal cancer,CRC)是發(fā)病率為全球第三位的惡性腫瘤,也是致死率為第四位的惡性腫瘤。近20年來,我國結(jié)直腸癌的發(fā)病率與死亡率呈逐年遞增趨勢。在初診時約有25%的患者即被診斷為晚期結(jié)直腸癌,而約50%的接受結(jié)直腸癌根治手術(shù)的早期患者也會進展成為晚期結(jié)直腸癌。晚期結(jié)直腸癌的治療效果至今仍不能令人滿意,即使接受過化療及靶向治療,許多患者仍因疾病迅速進展而死亡。因此,進一步分析結(jié)直腸癌的基因組信息,發(fā)現(xiàn)并篩選出預測早期腸癌的新的生物標志物,深入研究結(jié)直腸癌的發(fā)生發(fā)展、侵襲和轉(zhuǎn)移的分子機制,對于改善結(jié)直腸癌的早期診治效果,降低結(jié)直腸癌的患病率與死亡率具有重要意義。P2X7受體(P2X7R)由位于人類染色質(zhì)12上的P2rx7基因編碼,有13個外顯子,編碼595個氨基酸組成的膜蛋白。它屬于P2X受體家族,該家族的成員可以被細胞外三磷酸腺苷(ATP)激活。P2X7R在不種類型的細胞中都有表達,參與調(diào)節(jié)炎癥,細胞增殖和調(diào)亡,新陳代謝和吞噬作用。P2X7R在多種類型的腫瘤中都有異常改變,它與腫瘤的進展、遷移和侵襲高度相關(guān)。大多數(shù)研究發(fā)現(xiàn)P2X7R在許多腫瘤中呈高表達,...

【文章頁數(shù)】：110 頁

【學位級別】：博士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
英文縮略語
第一部分 :P2X7受體在人結(jié)直腸癌中的表達及與預后轉(zhuǎn)移的關(guān)系
    1 前言
    2 材料與方法
        2.1 實驗動物,主要試劑和儀器
            2.1.1 主要試劑
            2.1.2 主要儀器
        2.2 研究對象
            2.2.1 臨床標本及實驗分組
            2.2.2 細胞系及實驗分組
        2.3 實驗方法
            2.3.1 免疫組化法檢測P2X7受體在不同的臨床標本中的表達
            2.3.2 細胞培養(yǎng)
            2.3.3 Western-blot法檢測P2X7 受體蛋白
            2.3.4 Real-time PCR(q RT-PCR)法檢測P2X7 受體的m RNA
            2.3.5 統(tǒng)計學分析
    3 結(jié)果
        3.1 P2X7R在結(jié)直腸癌組織和癌旁正常結(jié)直腸組織中的表達
        3.2 P2X7R的表達與結(jié)直腸癌臨床病理特征之間的關(guān)系
        3.3 P2X7R的表達與結(jié)直腸癌預后的關(guān)系
        3.4 P2X7R表達與結(jié)直腸癌標志物之間的聯(lián)系
        3.5 P2X7R表達與結(jié)直腸癌轉(zhuǎn)移的關(guān)系
        3.6 P2X7R在結(jié)直腸轉(zhuǎn)移癌細胞系中的表達
    4 討論
    5 結(jié)論
第二部分 :體外實驗中A438079對結(jié)直腸癌細胞增殖、遷移、凋亡及焦亡的影響
    1 前言
    2 材料和方法
        2.1 主要試劑和儀器
            2.1.1 主要試劑
            2.1.2 主要儀器
            2.1.3 主要溶液配制
        2.2 研究對象及實驗分組
            2.2.1 研究對象
            2.2.2 實驗分組
        2.3 實驗方法
            2.3.1 培養(yǎng)結(jié)直腸癌細胞,加入抑制劑A438079
            2.3.2 CCK-8 法檢測HCT-116、SW620 細胞增殖
            2.3.3 細胞劃痕實驗
            2.3.4 Transwell法檢測HCT-116、SW620 細胞的遷移與侵襲
            2.3.5 流式細胞儀檢測HCT-116、SW620 細胞的凋亡(Annexin V-FITC/PI雙染法)
            2.3.6 Western-blot法檢測HCT-116、SW620 細胞的凋亡、焦亡通路的相關(guān)蛋白表達
            2.3.7 q RT-PCR檢測HCT-116、SW620 細胞的凋亡通路的相關(guān)基因m RNA表達
            2.3.8 統(tǒng)計學分析
    3 結(jié)果
        3.1 A438079影響結(jié)直腸癌細胞的形態(tài)
        3.2 A438079抑制結(jié)直腸癌細胞的增殖
        3.3 A438079抑制結(jié)直腸癌細胞的侵襲及遷移
            3.3.1 Transwell小室法檢測對結(jié)直腸癌細胞侵襲的影響
            3.3.2 Transwell法檢測對結(jié)直腸癌細胞遷移的影響
            3.3.3 劃痕實驗檢測對結(jié)直腸癌細胞遷移的影響
        3.4 A438079促進結(jié)直腸癌細胞的凋亡
        3.5 A438079 通過Bcl-2/Caspase9/Caspase3 信號通路促進細胞凋亡
            3.5.1 A438079對凋亡相關(guān)蛋白的作用
            3.5.2 A438079對凋亡相關(guān)基因mRNA的作用
        3.6 A438079 通過NLRP3/Caspase1 信號通路抑制細胞焦亡
    4 討論
    5 結(jié)論
第三部分 :體內(nèi)實驗中A438079對結(jié)直腸癌生長、凋亡及焦亡的影響
    1 前言
    2 材料和方法
        2.1 主要試劑和儀器
            2.1.1 主要試劑
            2.1.2 主要儀器
            2.1.3 主要溶液配制
        2.2 研究對象及實驗分組
            2.2.1 研究對象
            2.2.2 實驗分組
        2.3 實驗方法
            2.3.1 建立結(jié)直腸癌細胞SW620荷瘤鼠模型
            2.3.2 HE染色法檢測裸鼠移植瘤組織的形態(tài)學變化
            2.3.3 TUNEL法檢測移植瘤組織的凋亡(顯色法)
            2.3.4 Western-blot法檢測裸鼠移植瘤組織凋亡、焦亡通路的相關(guān)蛋白表達
            2.3.5 統(tǒng)計學分析
    3 結(jié)果
        3.1 A438079能夠抑制裸鼠結(jié)直腸癌移植瘤的生長
        3.2 A438079未影響荷瘤裸鼠的體重增長
        3.3 A438079促進了裸鼠結(jié)直腸癌移植瘤組織的凋亡
        3.4 A438079 通過Bcl-2/Caspase9/Caspase3 信號通路促進細胞凋亡
        3.5 A438079 通過NLRP3/Caspase1 信號通路抑制細胞焦亡
    4 討論
    5 結(jié)論
本研究創(chuàng)新性的自我評價
參考文獻
綜述
    參考文獻
攻讀學位期間取得的研究成果
致謝
個人簡歷



本文編號：3987992