研究目的根據(jù)CRISPR-Cas9文庫篩選方法,利用人類Gec KOv2(A)文庫在CAL27細(xì)胞上進(jìn)行全基因組順鉑耐藥基因篩選。同時,用體外藥物濃度遞增法篩選培養(yǎng)出一株對順鉑耐藥的CAL27/Cisplatin細(xì)胞,檢測分析CAL27/Cisplatin和CAL27細(xì)胞在正常培養(yǎng)狀態(tài)下和順鉑處理后各組細(xì)胞中mRNA表達(dá)譜差異。將CRISPR/Cas9文庫高通量篩選數(shù)據(jù)與轉(zhuǎn)錄組測序數(shù)據(jù)進(jìn)行聯(lián)合生物信息學(xué)分析,最終篩選出在CAL27細(xì)胞順鉑耐藥機(jī)制中起重要作用的關(guān)鍵基因,并初步驗證其相關(guān)功能和機(jī)制,為后續(xù)進(jìn)一步研究人口腔鱗狀細(xì)胞癌(Oral Squamous Cell Carcinoma,OSCC)順鉑耐藥機(jī)制及開發(fā)順鉑耐藥逆轉(zhuǎn)藥物提供重要依據(jù)。研究方法1、將攜帶嘌呤霉素抗性的人類Gec KOv2(A)文庫病毒感染CAL27細(xì)胞,嘌呤霉素抗性選擇感染陽性細(xì)胞獲得穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞。再分別給予溶劑DMSO和藥物順鉑進(jìn)行陽性篩選,提取存活細(xì)胞的g DNA。PCR擴(kuò)增包含g RNA的目的片段,高通量測序各組g RNA豐度變化,生物信息學(xué)分析確定具有顯著差異的CAL27細(xì)胞順鉑耐藥相關(guān)基因。2、體外藥物濃...

【文章頁數(shù)】：93 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
abstract
中、英文縮略詞表
前言
第一部分 全基因組CRISPR/Cas9 篩選OSCC順鉑耐藥相關(guān)基因
    引言
    材料與方法
        一、實(shí)驗材料
        二、實(shí)驗方法
    實(shí)驗結(jié)果
        一、CAL27細(xì)胞為順鉑敏感細(xì)胞
        二、2μMDDP為適宜順鉑陽性篩選濃度
        三、6對PCR擴(kuò)增反應(yīng)引物符合實(shí)驗要求
        四、6組樣本PCR擴(kuò)增產(chǎn)物定量混合比例確定
        五、6組樣本PCR擴(kuò)增反應(yīng)產(chǎn)物質(zhì)檢符合建庫測序要求
        六、gRNA測序數(shù)據(jù)分布與序列組成
        七、測序數(shù)據(jù)質(zhì)控合格
        八、測序數(shù)據(jù)定量分析結(jié)果
        九、測序數(shù)據(jù)差異分析結(jié)果
    討論
    結(jié)論
第二部分 順鉑耐藥CAL27/Cisplatin細(xì)胞株的篩選培養(yǎng)及轉(zhuǎn)錄組測序分析
    引言
    材料與方法
        一、實(shí)驗材料
        二、實(shí)驗方法
    實(shí)驗結(jié)果
        一、順鉑耐藥CAL27/cisplatin細(xì)胞株篩選培養(yǎng)成功
        二、細(xì)胞樣本提取的RNA質(zhì)控合格
        三、測序數(shù)據(jù)質(zhì)控合格
        四、測序數(shù)據(jù)定量分析結(jié)果
        五、測序數(shù)據(jù)差異分析結(jié)果
        六、CRISPR/Cas9 文庫高通量篩選數(shù)據(jù)與RNA-Seq篩選數(shù)據(jù)聯(lián)合分析結(jié)果
    討論
    結(jié)論
第三部分 IRF7在CAL27 細(xì)胞順鉑耐藥中的作用及相關(guān)功能初步研究
    引言
    材料與方法
        一、實(shí)驗材料
        二、實(shí)驗方法
    實(shí)驗結(jié)果
        一、sh-IRF7-2敲減效率最高
        二、敲減IRF7 表達(dá)降低順鉑對CAL27 細(xì)胞抑制率
        三、敲減IRF7 表達(dá)降低順鉑處理后CAL27 細(xì)胞凋亡率
        四、敲減IRF7 表達(dá)能降低CAL27 裸鼠移植瘤對順鉑敏感性
    討論
    結(jié)論
全文結(jié)論
參考文獻(xiàn)
綜述 順鉑化療耐藥分子機(jī)制研究進(jìn)展
    參考文獻(xiàn)
在校期間發(fā)表論文和參加科研工作情況
致謝



本文編號：3834273