腫瘤相關巨噬細胞(Tumor-associated macrophages,TAMs)是一類腫瘤組織中浸潤最為豐富的免疫細胞,其主要由血液中的單核細胞分化而來,呈現(xiàn)高度的異質性和可塑性。TAMs受腫瘤微環(huán)境中多種細胞因子、生長因子的調控,在實體瘤或者相鄰組織中主要極化為M2型巨噬細胞,參與腫瘤細胞的生長、血管生成、免疫逃逸等,進而促進腫瘤的發(fā)生、發(fā)展和轉移。越來越多的臨床觀察表明,大量的TAMs浸潤與肺癌患者的低生存率或者不良預后密切相關,這些都涉及到TAMs在維持腫瘤微環(huán)境中的重要作用。近幾年的研究發(fā)現(xiàn),腫瘤微環(huán)境中大量存在的ATP會通過相應的嘌呤受體參與到微環(huán)境的免疫調控,其中P2X7受體的功能最為關鍵和重要,其在炎癥級聯(lián)反應、維持腫瘤細胞存活和增殖中發(fā)揮著重要作用。然而,P2X7受體對于腫瘤微環(huán)境中TAMs的調控作用和機制目前并不清楚。為此,我們通過Q-PCR、Western blot和流式細胞術檢測P2X7受體在巨噬細胞上的表達情況,結果顯示其在TAMs和IL-4誘導的M2型巨噬細胞上呈現(xiàn)表達上調,提示其對TAMs的重要調控作用。已有文獻報道,巨噬細胞的功能性極化和吞噬對于腫瘤...

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【學位級別】：博士

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摘要
ABSTRACT
第一章 研究背景及文獻綜述
    1.1 腫瘤微環(huán)境與免疫治療
    1.2 腫瘤微環(huán)境中的慢性炎癥和巨噬細胞
    1.3 肺癌微環(huán)境的生物學機理及其治療策略
    1.4 腫瘤微環(huán)境中的嘌呤及其受體
    1.5 P2X7受體在腫瘤中的研究現(xiàn)狀與展望
第二章 實驗材料與方法
    一 實驗材料
        1.1 實驗細胞和動物
        1.2 實驗試劑
        1.3 實驗耗材和儀器
    二 實驗方法
        2.1 細胞、組織的RNA提取和反轉
        2.2 常規(guī)PCR和實時熒光定量PCR
        2.3 L929上清的制備、骨髓來源巨噬細胞的提取和極化
        2.4 基因敲除小鼠鑒定
        2.5 腫瘤小鼠模型的建立
        2.6 小鼠活體成像IVIS
        2.7 腫瘤組織消化和流式細胞分析
        2.8 組織蘇木精-伊紅(HE)染色
        2.9 組織切片免疫組織化學染色和免疫熒光染色
        2.10 酶聯(lián)免疫吸附測定ELISA(雙抗夾心法)
        2.11 蛋白提取和Western blot實驗步驟
        2.12 活細胞染料染色方法
        2.13 Mojosort CD4/CD8T細胞提取和激活
        2.14 巨噬細胞與T細胞共培養(yǎng)以及功能檢測
第三章 實驗結果與討論
    第一節(jié) P2X7受體在腫瘤相關巨噬細胞(TAMs)中呈現(xiàn)高表達
        1.引言
        2.實驗結果
        3.小結
    第二節(jié) P2X7受體對巨噬細胞極化和吞噬功能的調控
        1.引言
        2.實驗結果
        3.小結
    第三節(jié) P2X7受體缺失通過調控TAMs抑制小鼠肺癌的發(fā)生發(fā)展
        1.引言
        2.實驗結果
        3.小結
    第四節(jié) P2X7受體缺失的TAMs抑制腫瘤生長的機制
        1.引言
        2.實驗結果
        3.小結
    第五節(jié) P2X7受體調控巨噬細胞極化的分子機制
        1.引言
        2.實驗結果
        3.小結
    第六節(jié) 聯(lián)合P2X7受體抑制劑和臨床化療藥物協(xié)同抑制腫瘤的生長
        1.引言
        2.實驗結果
        3.小結
第四章 全文總結與展望
參考文獻
附錄1 縮略詞
附錄2 本文中所有PCR引物序列列表
附錄3 博士期間相關科研項目、學術成果以及學術會議
后記



本文編號：3757556