發(fā)布時(shí)間：2021-12-19 01:06

　　目的：設(shè)計(jì)同時(shí)靶向B淋巴細(xì)胞表面CD20 和CD19 兩個(gè)抗原蛋白的雙特異嵌合抗原受體（chimeric antigen receptor,CAR）并制備BiCAR-T細(xì)胞，檢測(cè)其對(duì)B淋巴細(xì)胞腫瘤細(xì)胞的殺傷作用以及對(duì)免疫缺陷B-NSG小鼠白血病模型的治療效果。方法：構(gòu)建基于鼠源CD19 和人源化CD20 scFv 的雙靶點(diǎn)CAR分子，將CAR基因裝載于慢病毒載體中，在293T細(xì)胞中包裝慢病毒，感染健康人T 細(xì)胞制備BiCAR-T 細(xì)胞。構(gòu)建表達(dá)CD19 和CD20 的K562-CD19-GFP、K562-CD20-GFP 以及表達(dá)Luciferase 的Nalm6-Luc-GFP 細(xì)胞作為靶細(xì)胞，將BiCAR-T 細(xì)胞與靶細(xì)胞共同孵育，檢測(cè)其對(duì)靶細(xì)胞殺傷能力及釋放IFN-γ 水平。使用Nalm6-Luc-GFP 細(xì)胞構(gòu)建白血病小鼠模型，尾靜脈注射BiCAR-T細(xì)胞，通過小動(dòng)物成像方法觀察BiCAR-T細(xì)胞對(duì)荷瘤小鼠的治療作用。結(jié)果：健康人來源的BiCAR-T 細(xì)胞經(jīng)7 d 培養(yǎng)后擴(kuò)增良好，擴(kuò)增倍數(shù)為20～50 倍，陽性率為10%～92%，顯示成功制備BiCAR-T細(xì)胞。在效靶比為10∶... 

【文章來源】：中國(guó)腫瘤生物治療雜志. 2020,27(03)北大核心CSCD

【文章頁數(shù)】：7 頁

【部分圖文】：

CD20/CD19 CAR分子設(shè)計(jì)示意圖

為了進(jìn)一步驗(yàn)證雙靶點(diǎn)BiCAR-T細(xì)胞對(duì)于CD19和/或CD20陽性腫瘤細(xì)胞的殺傷能力，基于CD19和CD20陰性腫瘤細(xì)胞K562構(gòu)建了靶細(xì)胞K562-CD19-GFP和K562-CD20-GFP。另外還構(gòu)建了同時(shí)表達(dá)luciferase和GFP的CD19和CD20雙陽性的Nalm6-Luc-GFP細(xì)胞。流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)結(jié)果（圖3）顯示，3種靶細(xì)胞的luciferase表達(dá)陽性率分別為99.9%、99.3%和99.9%。通過單克隆篩選，本實(shí)驗(yàn)獲得GFP陽性細(xì)胞系。圖3 成功構(gòu)建分別表達(dá)CD19、CD20或luciferase及GFP的靶細(xì)胞系

成功構(gòu)建分別表達(dá)CD19、CD20或luciferase及GFP的靶細(xì)胞系


本文編號(hào)：3543492