乳腺癌是女性排名第一的惡性腫瘤,乳腺癌的早期診斷和治療對(duì)增長(zhǎng)患者生存期具有重要意義。乳腺癌患者的外周血中除了特殊蛋白、核酸等常規(guī)的血清標(biāo)志物外,還存在一些微尺度的納米囊泡,研究發(fā)現(xiàn),這些納米囊泡可作為乳腺癌早期診斷的生物標(biāo)志物。外泌體是脂質(zhì)包封的納米級(jí)囊泡中的一種,腫瘤來(lái)源的外泌體包含很多癌蛋白、mRNA等腫瘤特異性分子標(biāo)志物,外泌體可以充當(dāng)細(xì)胞間的分子信使,參與腫瘤細(xì)胞和微環(huán)境之間的信號(hào)傳導(dǎo)。此外,由于腫瘤細(xì)胞表面外泌體分泌旺盛,且可以從體液中分離出來(lái),因此,在液體活檢中,外泌體被認(rèn)為是一種重要的生物標(biāo)志物,在癌癥的診斷、預(yù)后和治療等方面擁有巨大的潛力。到目前為止,關(guān)于外泌體檢測(cè)的研究已經(jīng)有很多報(bào)道,但是方便、低成本的檢測(cè)方法還亟待開(kāi)發(fā)�；诖�,我們提出了兩種省時(shí)低耗的外泌體檢測(cè)方法,一種是利用G-四鏈體DNA過(guò)氧化物模擬酶實(shí)現(xiàn)高靈敏度的外泌體檢測(cè);第二種方法以不規(guī)則的四面體DNA結(jié)構(gòu)為支架,串聯(lián)天然酶與人工酶（G-四鏈體）,通過(guò)酶級(jí)聯(lián)信號(hào)放大實(shí)現(xiàn)外泌體檢測(cè)。本論文的主要研究?jī)?nèi)容如下:1、基于氯化血紅素（hemin）/G-四鏈體模擬辣根過(guò)氧化物酶（HRP）的優(yōu)越性,我們將高特異性的m... 

【文章來(lái)源】：華東理工大學(xué)上海市 211工程院校 教育部直屬院校

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【部分圖文】：

圖１．?１外泌體的結(jié)構(gòu)與組分??Ｆｉｇ．?１．１?Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ?ａｎｄ?ｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎ?ｏｆ?ｅｘｏｓｏｍｅｓ??

開(kāi)發(fā)了很多檢測(cè)方法。傳統(tǒng)的檢測(cè)技術(shù)主要包括納米顆??粒跟蹤分析（ＮＴＡ）、動(dòng)態(tài)光散射（ＤＬＳ）、酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ＥＬＩＳＡ）和流式細(xì)胞術(shù)等。??１．３．１傳統(tǒng)定量方法??１．３丄１?透射電鏡（ＴＥＭ）??外泌體的大小和結(jié)構(gòu)可以用通過(guò)電子顯微鏡來(lái)鑒定。在生物材料的傳統(tǒng)電子顯微鏡??中，樣品制備需要固定、脫水和金屬化。樣品制備可能會(huì)導(dǎo)致樣品的損傷（例如，囊泡??可能會(huì)瓦解），導(dǎo)致杯狀的形貌，而低溫電子顯微鏡顯示出完美的特殊結(jié)構(gòu)［１３］，有趣的??是，在二氧化硅納米粒子上捕獲的外泌體（圖１．２Ａ），在沒(méi)有低溫固定的情況下仍然保持??球形［４６］，應(yīng)用免疫金顆粒可以檢測(cè)到表面生物標(biāo)志物的存在［４７］。圖１．２Ｂ顯示了與外泌??體和杯狀外泌體膜上的Ｒａｂ５蛋白標(biāo)記物結(jié)合的金納米顆粒的定位，其大小在３０－３００?ｎｍ??范圍內(nèi)［４８１，外泌體簇的尺寸為３００?ｎｍ。而計(jì)算異質(zhì)樣品中外泌體的數(shù)量，需要大量的??圖像進(jìn)行評(píng)估，這也代表了電子顯微鏡的實(shí)際局限性［４９１。??圖１．２外泌體的ＴＥＭ圖像（Ａ）捕獲的外泌體經(jīng)ｐＨ為７．１磷鎢酸陰性染色后的ＴＥＭ圖像（Ｂ）??外切結(jié)合外泌體的免疫特性??Ｆｉｇ．?１．２?ＴＥＭ?ｉｍａｇｅｓ?ｏｆ?ｅｘｏｓｏｍｅｓ?（Ａ）?ＴＥＭ?ｉｍａｇｅ?ｏｆ?ｃａｐｔｕｒｅｄ?ｅｘｏｓｏｍｅｓ?ｆｏｌｌｏｗｉｎｇ?ｎｅｇａｔｉｖｅ??ｓｔａｉｎｉｎｇ?ｗｉｔｈ?ｐＨ?７．１?ｐｈｏｓｐｈｏｔｕｎｇｓｔｉｃ?ａｃｉｄ?（Ｂ）?ｉｍｍｕｎｏｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ?ｏｆ?ＥｘｏＣｈｉｐ－ｂｏｕｎｄｅｄ?ｅｘｏｓｏｍｅｓ??

第８頁(yè)?華東理工大學(xué)碩士學(xué)位論文??流式細(xì)胞術(shù)以流式細(xì)胞儀為依托，是一種分析細(xì)胞表面和細(xì)胞內(nèi)分子（蛋白）表達(dá)的??技術(shù)６１：，可以測(cè)量外泌體的多種表面標(biāo)記物。簡(jiǎn)單地說(shuō)，懸浮在液體中的單分散細(xì)胞通??過(guò)激光束的路徑，每個(gè)單元將光偏轉(zhuǎn)到正向（正向散射）或側(cè)向（側(cè)向散射）。探測(cè)到的散??射光被轉(zhuǎn)換成與其強(qiáng)度成正比的電壓脈沖。通過(guò)超速離心法，從骨髓樹(shù)狀的細(xì)胞（ＢＭＤＣ）??提取的外泌體（ＢＭＤＣｓ）通過(guò)被動(dòng)吸附被涂布到４?ｊａＭ醛／硫酸乳膠珠上。標(biāo)記兩種不同??熒光的外泌體與抗體進(jìn)行孵育，圖１．３中展示了流式細(xì)胞儀的觀察結(jié)果。與其他技術(shù)相??比，流式細(xì)胞術(shù)的主要優(yōu)點(diǎn)是可以測(cè)量每個(gè)外泌體相關(guān)的單個(gè)或多個(gè)表面標(biāo)記物。??＾?ＡＰＣ－ＬＡＭＰ－１?ａｎｄ??４?ＵｎＳｌａ＇ｎｅｄ?，?ＦＩＴＣ－ＭＨＣ－ＩＩ??個(gè)?１０?４０．００?０＾７］?１〇＇?Ｊ１５．４８?６＾６??１０３?￣?１〇３－?．??１０２?ｎ?１０２＂１??ｌ???＾?１０。冬＂和?Ｕ．１?■?＂ｎ??１０°?１〇＇?１〇２?１〇３?１〇４?１０°?１０１?１０２?１０３?１０４??ＦＬ１?？??圖１．３抗體標(biāo)記的－ＢＭＤＣ－外泌體的流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)結(jié)果??Ｆｉｇ．?１．３?Ｆｌｏｗ?ｃｙｔｏｍｅｔｒｙ?ｒｅｓｕｌｔ?ｆｏｒ?ａｎｔｉｂｏｄｙ－ｌａｂｅｌｅｄ－ＢＭＤＣ?ｅｘｏｓｏｍｅｓ??１．３．２夕卜泌體定量新技術(shù)??為了提高外泌體檢測(cè)的靈敏度、速度和效率，研究人員試圖建立新的生物傳感器用??于檢測(cè)外泌體，如表面等離子體共振（ＳＰＲ）、表面增強(qiáng)拉曼散射（ＳＥＲＳ）、熒光、電化??學(xué)和紫外分光光譜學(xué)等檢測(cè)器。儀器的簡(jiǎn)易性和生物傳感器的普及性使

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]Exosomes as therapeutic drug carriers and delivery vehicles across biological membranes:current perspectives and future challenges[J]. Dinh Ha,Ningning Yang,Venkatareddy Nadithe.  Acta Pharmaceutica Sinica B. 2016(04)



本文編號(hào)：3522146