惡性黑色素瘤是最常見的惡性腫瘤之一,其發(fā)病率以每年3-5%的速度快速增長。腫瘤細(xì)胞上調(diào)表面程序性死亡-配體1（programmed cell death-ligand 1,PD-L1）的表達(dá)并通過與T細(xì)胞表面的程序性死亡蛋白1（programmed cell death 1,PD-1）相互作用引起免疫檢查點反應(yīng)以逃避免疫監(jiān)視。目前,靶向PD-1/PD-L1的藥物在治療腫瘤包括轉(zhuǎn)移性黑色素瘤方面展現(xiàn)出很好的前景,但是患者反應(yīng)率較低,其具體機(jī)制尚不清楚。研究發(fā)現(xiàn),PD-L1不僅高表達(dá)于多數(shù)腫瘤細(xì)胞,也富集于腫瘤細(xì)胞分泌的外泌體中,并參與機(jī)體免疫系統(tǒng)的抑制。最新研究表明,黑色素瘤細(xì)胞PD-L1表達(dá)上調(diào),即使在缺乏適應(yīng)性免疫的情況下仍然促進(jìn)腫瘤的生長,提示PD-L1除具有免疫抑制作用外,還具有促進(jìn)腫瘤細(xì)胞增殖的能力。我們前期在黑色素瘤細(xì)胞系中過表達(dá)PD-L1,同樣可以促進(jìn)細(xì)胞的增殖能力。據(jù)此,我們推測腫瘤細(xì)胞PD-L1具有促進(jìn)細(xì)胞增殖的能力,其分泌外泌體到微環(huán)境中,所攜帶的PD-L1除參與免疫抑制外,還促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的增殖。為了證實我們的推測,本課題首先利用Tamaxifen誘導(dǎo)的Braf

【文章來源】：山東師范大學(xué)山東省

【文章頁數(shù)】：78 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

外泌體的生物發(fā)生及其自母細(xì)胞的釋放[19]

33.2.外泌體的形態(tài)和分子組成外泌體的形態(tài)可以通過電子顯微鏡（electronmicroscope，EM）確定，其形態(tài)為杯狀囊泡結(jié)構(gòu)，直徑30-120nm（圖1-2A）。每個外泌體都帶有親本細(xì)胞的印記，其內(nèi)容物包括DNA，mRNA，微小RNA以及酶和可溶性因子，它們均具有生物活性，并且能夠在靶細(xì)胞中執(zhí)行功能性應(yīng)答并重新編程核酸[16,20]（圖1-2B）。此外，TSG101、Alix、HSP70、CD9、CD63和CD81是在外泌體中高度富集的特異性蛋白，常被用作鑒定外泌體的標(biāo)記物[21]。以上為一般外泌體的特征，腫瘤外泌體具有自己的獨特性，其分子貨物部分來源于親代腫瘤細(xì)胞的表面[22]。由于癌細(xì)胞傾向于表達(dá)和利用各種免疫抑制分子來鈍化抗腫瘤免疫反應(yīng)[23]，腫瘤來源的外泌體富含免疫抑制蛋白，包括死亡受體配體（例如FasL或TRAIL），檢查點受體配體（例如PD-L1），抑制性細(xì)胞因子（例如IL10和TGF-β1）等。已有文獻(xiàn)報道，轉(zhuǎn)移性黑色素瘤和前列腺癌的外泌體中富含大量的PD-L1[5,24]。圖1-2外泌體形態(tài)和分子組成[19]Figure1-2Exosomemorphologyandthemolecularcontent[19]山東師范大學(xué)碩士學(xué)位論文

43.3.外泌體與其細(xì)胞靶點的通訊前腫瘤來源的外泌體可以將攜帶前腫瘤的信息傳輸?shù)狡渌麗盒约?xì)胞或正常細(xì)胞中[25,26]。外泌體利用以下一種或多種機(jī)制與靶細(xì)胞相互作用：（a）通過表面分子指導(dǎo)信號傳導(dǎo)以激活細(xì)胞內(nèi)信號傳導(dǎo)；（b）與靶細(xì)胞膜融合，然后將蛋白或基因轉(zhuǎn)移到細(xì)胞中；（c）調(diào)節(jié)外泌體的吞噬作用及內(nèi)吞；（d）受體介導(dǎo)的內(nèi)吞作用[27]。圖1-3總結(jié)了受體細(xì)胞攝取外泌體的各種途徑以及細(xì)胞攝取后的結(jié)果。圖1-3外泌體通過幾種途徑與靶細(xì)胞相互作用[19]。Figure1-3Exosomesmayinteractwithtargetcellsbyoneofseveralpathways[19].3.4.外泌體的純化及表征為了深入了解外泌體的生理功能，外泌體的純化和定量對于滿足基礎(chǔ)研究和臨床應(yīng)用的需求至關(guān)重要。外泌體的純化主要分為五類：基于密度和大小的超速離心（ultracentrifugation，UC）、依賴大小的超濾和體積排阻色譜（sizeexclusionchromatograph，SEC）等、基于密度的密度梯度離心分離以及利用外泌體上特定標(biāo)記的免山東師范大學(xué)碩士學(xué)位論文

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]運(yùn)用抗PD-L1抗體治療晚期癌癥患者的安全性與療效評價[J]. 姜孝新,Julie R.Brahmer,Scott S.Tykodi,Laura Q.M.Chow.  腫瘤藥學(xué). 2012(03)



本文編號：3266739