轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β（Transforming growth factor-β,TGF-β）超家族信號(hào)在調(diào)控細(xì)胞增殖,細(xì)胞凋亡,細(xì)胞分化,細(xì)胞遷移及細(xì)胞命運(yùn)決定過(guò)程中發(fā)揮著重要的作用。經(jīng)典的TGF-β信號(hào)通路由跨膜的絲氨酸/蘇氨酸激酶受體和胞內(nèi)效應(yīng)蛋白Smad蛋白組成。當(dāng)TGF-β信號(hào)通路被激活,磷酸化的R-Smad（Smad2和Smad3）會(huì)和Co-Smad（Smad4）結(jié)合形成三元復(fù)合體并轉(zhuǎn)錄入核。Smad復(fù)合體會(huì)和很多細(xì)胞核里面的轉(zhuǎn)錄促進(jìn)因子或者抑制因子結(jié)合,共同調(diào)控基因轉(zhuǎn)錄。因此,TGF-β信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)需要Smad和眾多轉(zhuǎn)錄因子或者Smad結(jié)合蛋白的參與。WDR74 屬于 WD40 repeat proteins 超家族,WDR74 包含 6 個(gè) WD40 區(qū)域,并且在進(jìn)化上保守。WDR74第一次被發(fā)現(xiàn)是在肺轉(zhuǎn)移的犬乳腺細(xì)胞中高表達(dá),這表明WDR74很可能跟癌癥轉(zhuǎn)移有很大的相關(guān)性。另外,已有研究也表明WDR74對(duì)小鼠的胚胎發(fā)育至關(guān)重要。近年來(lái),多篇文獻(xiàn)報(bào)道證實(shí),WDR74跟核糖體的形成至關(guān)重要。雖然WD40 repeat蛋白超家族在多種細(xì)胞功能,如細(xì)胞分裂,細(xì)胞命運(yùn)決定,基因轉(zhuǎn)錄,細(xì)胞跨... 

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【學(xué)位級(jí)別】：博士

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經(jīng)典的TGF

２．結(jié)果和分析??２．１?ＷＤＲ７４和Ｓｍａｄ２／３在細(xì)胞內(nèi)存在相互作用??我們將目的質(zhì)粒?ＨＡ－Ｓｍａｄ２，?ＨＡ－Ｓｍａｄ３，?ＦＬＡＧ－ＷＤＲ７４?和?Ｍｙｃ－ＴｐＲＩ?（Ｔ２０２Ｄ）??轉(zhuǎn)染到ＨＥＫ２９３Ｔ細(xì)胞中，進(jìn)行蛋白免疫共沉淀實(shí)驗(yàn)。用ＦＬＡＧ抗體去ＩＰ帶有ＨＡ??ｔａｇ的Ｓｍａｄ２和Ｓｍａｄ３。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明在細(xì)胞內(nèi)ＷＤＲ７４和Ｓｍａｄ２，?Ｓｍａｄ３確實(shí)存??在相互作用，并且這一作用在持續(xù)激活的ＴＧＦ－Ｐ?ｒｅｃｅｐｔｏｒ?Ｉ?－ＡＬＫ５?（Ｔ２０２Ｄ）存在的??情況下變得更強(qiáng)（圖２．１．１）。內(nèi)源的蛋白免疫共沉淀實(shí)驗(yàn)也得到了相同的結(jié)論。??ＨａＣａＴ細(xì)胞中，ＴＧＦ－ｐ處理細(xì)胞１小時(shí)，用內(nèi)源的Ｓｍａｄ２／３抗體去內(nèi)源的??ＷＤＲ７４，抗兔的ＩｇＧ作為陰性對(duì)照。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明ＷＤＲ７４和Ｓｍａｄ２和Ｓｍａｄ３的??相互作用在ＴＧＦ－Ｐ的作用下變得更強(qiáng)（圖２．１．２）。??Ｆｌａｇ－ＷＤＲ７４?＋?＋?＋?＋??－－?－－?－Ｆｌａｇ－ＷＤＲ７４?＋?＋?＋?＋??

ＨＡ－ＷＤＲ７４蛋白４°Ｃ旋轉(zhuǎn)孵育４小時(shí)，然后洗ｂｅａｄｓ，?Ｗｅｓｔｅｒｎ?ｂｌｏｔｔｉｎｇ檢測(cè)。??ＧＳＴ－Ｐｕｌｌｄｏｗｎ實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，ＧＳＴ－Ｓｍａｄ２／３／４和ＨＡ－ＷＤＲ７４之間存在直接的相互??作用，并且ＷＤＲ７４和Ｓｍａｄ２，?Ｓｍａｄ３，?Ｓｍａｄ４之間的親和能力大致一樣（圖２．２）。??１９??

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]TGF-β信號(hào)通路調(diào)控乳腺癌上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化的研究進(jìn)展[J]. 馬艷,劉虹,張浩,邵榮光.  藥學(xué)學(xué)報(bào). 2015(04)



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