背景:過氧化物酶體增殖物激活受體（peroxisome-proliferators-activated receptors,PPARs）共包含PPARα、PPARδ、PPARγ三個成員。作為PPARs家族成員之一,PPARδ在調(diào)控炎癥、代謝、腫瘤發(fā)生等方面發(fā)揮重要的作用,然而PPARδ轉(zhuǎn)錄后修飾對腫瘤進展的影響目前依然不清楚。大量研究表明表皮生長因子受體（epidermal growth factor receptor,EGFR）異常表達或激活促進腫瘤發(fā)生。EGFR屬于酪氨酸激酶,我們課題組前期研究表明,EGFR能誘導(dǎo)PPARγ磷酸化,從而抑制PPARγ抗腫瘤功能,該研究顯示EGFR能誘導(dǎo)底物磷酸化,從而改變其功能。然而EGFR與PPARδ相關(guān)性及其作用機制目前不是很清楚。方法:利用免疫共沉淀、Western blot分析相關(guān)蛋白的表達以及PPARδ與EGFR相關(guān)性;利用液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法鑒定EGFR誘導(dǎo)PPARδ磷酸化位點;隨后進一步利用體外磷酸化方法確定EGFR誘導(dǎo)PPARδ-Y108位點磷酸化;利用雙熒光報告分析PPARδ活力,及其下游代謝相關(guān)基因SLC1A5和Glut1轉(zhuǎn)錄活... 

【文章來源】：江蘇大學(xué)江蘇省

【文章頁數(shù)】：67 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
abstract
第一章 緒論
    1.1 EGFR
        1.1.1 EGFR概述
        1.1.2 EGFR胞內(nèi)信號傳導(dǎo)
    1.2 PPARδ
        1.2.1 PPARδ概述
        1.2.2 PPARδ信號與腫瘤
    1.3 腫瘤細胞代謝
        1.3.1 腫瘤細胞糖代謝
        1.3.2 腫瘤細胞氨基酸代謝
    1.4 研究意義
    1.5 主要研究內(nèi)容與技術(shù)路線
        1.5.1 主要研究內(nèi)容
        1.5.2 技術(shù)路線
第二章 EGFR誘導(dǎo)PPARδ-Y108位點磷酸化
    2.1 實驗材料
        2.1.1 細胞系與質(zhì)粒
        2.1.2 實驗儀器
        2.1.3 實驗試劑、耗材與抗體
    2.2 實驗方法
        2.2.1 質(zhì)粒構(gòu)建
        2.2.2 細胞培養(yǎng)
        2.2.3 細胞加藥處理
        2.2.4 質(zhì)粒轉(zhuǎn)染
        2.2.5 細胞總蛋白提取
        2.2.6 細胞蛋白濃度測定與定量
        2.2.7 Western blot檢測
        2.2.8 免疫共沉淀
        2.2.9 磷酸化位點比對分析
        2.2.10 質(zhì)譜分析
        2.2.11 蛋白純化
        2.2.12 體外磷酸化
    2.3 實驗結(jié)果與分析
        2.3.1 EGFR誘導(dǎo)PPARδ-Y108 位點磷酸化
    2.4 本章小結(jié)
第三章 EGFR/PPARδ信號促進腫瘤細胞代謝
    3.1 實驗材料
        3.1.1 細胞系與質(zhì)粒
        3.1.2 實驗儀器
        3.1.3 實驗耗材、試劑與抗體
    3.2 實驗方法
        3.2.1 細胞培養(yǎng)
        3.2.2 質(zhì)粒轉(zhuǎn)染
        3.2.3 雙熒光素酶報告基因檢測
        3.2.4 熒光定量PCR檢測
        3.2.5 Western blot檢測
        3.2.6 腫瘤細胞葡萄糖消耗檢測
        3.2.7 腫瘤細胞乳酸釋放檢測
        3.2.8 腫瘤細胞谷氨酰胺攝入檢測
        3.2.9 統(tǒng)計學(xué)數(shù)據(jù)分析
    3.3 實驗結(jié)果與分析
        3.3.1 PPARδ-Y108 磷酸化增加Glut1和SLC1A5 表達
        3.3.2 PPARδ-Y108 磷酸化促進腫瘤細胞代謝
    3.4 本章小結(jié)
第四章 PPARδ-Y108 磷酸化促進腫瘤生長
    4.1 實驗材料
        4.1.1 細胞系與質(zhì)粒
        4.1.2 實驗儀器
        4.1.3 實驗試劑、耗材與抗體
        4.1.4 實驗動物
    4.2 實驗方法
        4.2.1 細胞培養(yǎng)
        4.2.2 質(zhì)粒轉(zhuǎn)染
        4.2.3 G418 篩選細胞
        4.2.4 軟瓊脂集落形成分析
        4.2.5 構(gòu)建裸鼠異種移植瘤模型
        4.2.6 腫瘤組織Western blot檢測
        4.2.7 統(tǒng)計學(xué)數(shù)據(jù)分析
    4.3 實驗結(jié)果與分析
        4.3.1 PPARδ-Y108 磷酸化促進腫瘤細胞增殖
        4.3.2 PPARδ-Y108 磷酸化促進腫瘤生長
    4.4 本章小結(jié)
第五章 PPARδ-Y108 磷酸化增加腫瘤細胞化療抗性
    5.1 實驗材料
        5.1.1 細胞系與質(zhì)粒
        5.1.2 實驗儀器
        5.1.3 實驗試劑、耗材
    5.2 實驗方法
        5.2.1 細胞培養(yǎng)
        5.2.2 質(zhì)粒轉(zhuǎn)染
        5.2.3 G418 篩選細胞
        5.2.4 MTT檢測
        5.2.5 統(tǒng)計學(xué)數(shù)據(jù)分析
    5.3 實驗結(jié)果與分析
        5.3.1 PPARδ-Y108 磷酸化增強腫瘤細胞化療抗性
    5.4 本章小結(jié)
第六章 總結(jié)
參考文獻
致謝
在讀期間學(xué)術(shù)成果
參與課題



本文編號：3196835