原發(fā)性肝癌是全球常見的惡性腫瘤之一,肝癌患者5年總體生存率不超過17%,目前針對晚期肝癌的一線用藥仍以多重酪氨酸激酶受體抑制劑為主,其中一線抗肝癌藥物索拉非尼相對安慰劑來說,僅增加了肝癌患者2.7個月的生存期,且其容易產生耐藥性。目前認為,晚期肝癌藥物開發(fā)策略主要為尋找靶向新通路的分子或尋找索拉非尼增敏的分子。Notch和Wnt通路是介導肝癌發(fā)生發(fā)展的重要通路,其中Wnt通路的重要轉導蛋白β-catenin在肝癌中的突變率達到20-40%。實驗室前期通過RBP-Jκ熒光素酶報告基因系統(tǒng)篩選到一個Notch通路的抑制劑鴉膽子苦素D（BD）,其能明顯抑制Notch通路配體Jagged1的表達,同時對肝癌細胞有明顯的抑制作用。在藥效評價上,本研究通過肝癌原位移植模型進一步驗證BD抗肝癌及與索拉非尼聯(lián)用的效果;機制上,本研究進一步深入探究BD抗肝癌作用機制,以期為肝癌治療提供一定的科學依據及先導化合物。研究方法:1、本研究通過裸鼠原位肝癌模型驗證BD對肝癌生長作用的影響及聯(lián)合索拉非尼的治療效果;通過H&E及免疫組化技術測定BD對裸鼠肝原位腫瘤細胞生長的影響;2、通過β-catenin和... 

【文章來源】：中國人民解放軍海軍軍醫(yī)大學上海市 211工程院校

【文章頁數】：91 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
縮略詞表
前言
    一、肝癌及臨床治療簡介
        （一）肝癌及其風險因素
        （二）肝癌治療策略
        （三）肝癌臨床試驗藥物總結
    二、Wnt信號通路與肝癌及其臨床試驗藥物
        （一）Wnt信號通路簡介
        （二）Wnt通路與肝癌
        （三）Wnt通路臨床試驗藥物總結
    三、鴉膽子苦素類化合物的抗腫瘤研究現(xiàn)狀
第一章 Bruceine D體內抗腫瘤及協(xié)同索拉非尼抗肝癌研究
    一、引言
    二、實驗材料
        （一）實驗動物
        （二）實驗用具
        （三）藥品和試劑
        （四）主要儀器
    三、實驗方法
        （一）溶液配制
        （二）裸鼠肝癌原位異體移植瘤模型建立
        （三）藥物處理和取材
        （四）細胞復蘇、培養(yǎng)、凍存
        （五）腫瘤組織H&E染色分析
        （六）腫瘤組織免疫組織化學分析—TUNEL和Ki67
    四、實驗結果
        （一）BD抑制肝癌細胞在裸鼠肝臟內生長
        （二）BD增強索拉非尼體內抗肝癌作用
    五、小結與討論
第二章 Bruceine D抗腫瘤機制研究
    一、引言
    二、實驗材料
        （一）細胞株及菌株
        （二）藥品與試劑
        （三）實驗儀器
    三、實驗方法
        （一）細胞培養(yǎng)
        （二）免疫印跡實驗（Western blot）
        （三）RT-PCR
        （四）shJagged1和shβ-catenin干擾實驗
        （五）Wnt通路激活劑及抑制劑處理對Jagged1蛋白表達影響 35
        （六）免疫共沉淀（Co-Immunoprecipitation）
        （七）細胞核質分離實驗
        （八）免疫熒光共聚焦
        （九）Wnt3a重組蛋白及GSK3β 抑制劑處理對BD作用的影響37
        （十）蛋白酶抑制劑處理驗證BD對 β-catenin降解途徑的影響 37
        （十一）CRM1抑制劑處理檢測BD對 β-catenin出核途徑的影響
    四、實驗結果
        （一）肝癌細胞上Wnt/β-catenin與Jagged1的調控關系及BD對Wnt通路轉錄水平的影響
        （二）BD對 β-catenin細胞核內水平的影響
        （三）BD對 β-catenin總量影響及與GSK3β 上游通路的關系 .. 41
        （四）BD誘導 β-catenin的蛋白酶體降解
        （五）BD對 β-catenin出核途徑CRM1的影響
        （六）BD對肝癌組織中 β-catenin和Jagged1的表達量的影響 . 44
    五、小結與討論
第三章 Bruceine D抗腫瘤靶標驗證
    一、引言
    二、實驗材料
        （一）菌株
        （二）藥品與試劑
        （三）實驗儀器
    三、實驗方法
        （一）蛋白表達與純化
        （二）Cellular Thermal Shift Assay（CETSA）
        （三）Protein Thermal Shift Assay
        （四）Biacore
        （五）MicroScale Thermophoresis（MST）
    四、實驗結果
        （一）CETSA
        （二）Thermal Shift Assay
        （三）Biacore
        （四）MST
    五、小結與討論
全文總結
參考文獻
文獻綜述
    參考文獻
碩士期間發(fā)表論文情況
致謝


【參考文獻】：
期刊論文
[1]Second line systemic therapies for hepatocellular carcinoma: Reasons for the failure[J]. Marcello Maida,Massimo Iavarone,Maurizio Raineri,Calogero Cammà,Giuseppe Cabibbo.  World Journal of Hepatology. 2015(17)
[2]Alcohol and hepatocellular carcinoma:A review and a point of view[J]. Gianni Testino,Silvia Leone,Paolo Borro.  World Journal of Gastroenterology. 2014(43)
[3]鴉膽子油乳抗腫瘤機制及其臨床應用研究進展[J]. 趙楠,韓鳳娟,王桂媛,李玉花.  生物技術通訊. 2014(05)
[4]High-intensity focused ultrasound ablation:An effective bridging therapy for hepatocellular carcinoma patients[J]. Tan To Cheung,Sheung Tat Fan,See Ching Chan,Kenneth SH Chok,Ferdinand SK Chu,Caroline R Jenkins,Regina CL Lo,James YY Fung,Albert CY Chan,William W Sharr,Simon HY Tsang,Wing Chiu Dai,Ronnie TP Poon,Chung Mau Lo.  World Journal of Gastroenterology. 2013(20)



本文編號：3174062