發(fā)布時(shí)間：2021-05-07 20:59

　　代謝重編程是腫瘤細(xì)胞的標(biāo)志性特征之一,其代表性事件為Warburg效應(yīng),表現(xiàn)為即使在氧氣充足的條件下,腫瘤細(xì)胞也要消耗大量葡萄糖進(jìn)行糖酵解代謝,并產(chǎn)生大量的乳酸,為腫瘤細(xì)胞的快速增殖提供物質(zhì)和能量保證。Warburg效應(yīng)的發(fā)生受到多種代謝酶調(diào)節(jié),其中丙酮酸激酶是催化糖酵解最后一步的限速酶,其M2型丙酮酸激酶（Pyruvate kinase M2,PKM2）在腫瘤細(xì)胞中特異性高表達(dá),能夠通過其酶活性及核內(nèi)非代謝酶功能共同促進(jìn)Warburg效應(yīng)及腫瘤生長。PKM2功能可受乙�；⒘姿峄榷喾N蛋白質(zhì)翻譯后修飾調(diào)節(jié)。最近的研究報(bào)道,PKM2也可發(fā)生O-Glc NAc修飾。我們實(shí)驗(yàn)室前期工作表明,O-Glc NAc修飾能夠促進(jìn)PKM2解聚并入核,增強(qiáng)其核內(nèi)非代謝酶功能,并通過質(zhì)譜分析鑒定出T405和S406是PKM2的O-Glc NAc修飾位點(diǎn),然而T405/S406雙突變并不能完全消除PKM2 O-Glc NAc修飾,說明PKM2還存在其它的O-Glc NAc修飾位點(diǎn),但是這兩個(gè)位點(diǎn)突變后使PKM2 O-Glc NAc修飾水平明顯降低。于是我們推測T405和S406可能是PKM2 O-Glc ... 

【文章來源】：東北師范大學(xué)吉林省 211工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：43 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
中文摘要
英文摘要
一 引言
    1.Warburg效應(yīng)
    2.M2型丙酮酸激酶(PKM2)
        2.1 PKM2的功能及調(diào)節(jié)
        2.2 PKM2的蛋白質(zhì)翻譯后修飾
    3.O-GlcNAc修飾
        3.1 O-GlcNAc修飾的酶
        3.2 O-GlcNAc修飾的供體
    4.立題依據(jù)與研究思路
二 材料和方法
    1.實(shí)驗(yàn)試劑
        1.1 抗體
        1.2 其它主要試劑
    2.實(shí)驗(yàn)材料
        2.1 細(xì)胞株及菌株
        2.2 真核表達(dá)載體
    3.實(shí)驗(yàn)儀器
    4.實(shí)驗(yàn)方法
        4.1 細(xì)胞培養(yǎng)
        4.2 構(gòu)建質(zhì)粒
        4.3 瞬時(shí)轉(zhuǎn)染
        4.4 免疫印跡法(WB)
        4.5 丙酮酸激酶活性的檢測
        4.6 提取細(xì)胞漿蛋白和核蛋白
        4.7 戊二醛交聯(lián)試驗(yàn)
        4.8 蛋白質(zhì)的免疫沉淀試驗(yàn)(IP)
        4.9 葡萄糖含量檢測
        4.10 乳酸含量檢測
三 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
    1.OGT真核表達(dá)質(zhì)粒的構(gòu)建
    2.OGT過表達(dá)可上調(diào)PKM2T405/S406的O-GlcNAc修飾
    3.T405/S406的O-GlcNAc修飾促進(jìn)PKM2四聚體解聚
    4.T405/S406的O-GlcNAc修飾降低PKM2酶活性
    5.T405/S406的O-GlcNAc修飾促進(jìn)PKM2核易位
    6.T405/S406的O-GlcNAc修飾增強(qiáng)PKM2非代謝酶功能
    7.T405/S406的O-GlcNAc修飾促進(jìn)Warburg效應(yīng)
四 討論
    1.T405/S406的O-GlcNAc修飾促進(jìn)PKM2四聚體解聚的可能機(jī)制
    2.T405/S406的O-GlcNAc修飾促進(jìn)PKM2核易位的可能機(jī)制
五 結(jié)論
參考文獻(xiàn)
致謝



本文編號(hào)：3174050