目的:利用噬菌體隨機七肽庫體外篩選能與人膀胱癌EJ細胞特異性結合的小分子多肽,為膀胱癌的早期診斷和靶向治療提供理論基礎。方法:以膀胱癌細胞系EJ為靶細胞,人正常膀胱移行上皮細胞為吸附細胞,對噬菌體隨機七肽庫進行3輪體外減性篩選;隨機挑取30個陽性噬菌體克隆,用ELISA法鑒定其與EJ細胞結合的特異性;對陽性噬菌體克隆進行測序分析;采用固相化學合成法制備EJ細胞導向肽及其對照肽;通過MTT試驗和細胞損傷修復實驗研究該膀胱腫瘤導向肽對EJ細胞生長的影響。結果:1、經過3輪“篩選-擴增-再篩選”,與EJ細胞特異結合的噬菌體得到高度富集,回收率也增加了近200倍。2、ELISA法鑒定結果顯示,特異性結合系數(shù)≥2的陽性噬菌體克隆共有17個。3、測序結果顯示,其中R2、R5、R9、R12、R16、R17、R21、R24八個噬菌體克隆的序列均為AVEAAKT,該肽段重復率最高且無同源性。4、制備了EJ細胞導向肽AVEAAKT及其對照肽,純度達95%。5、MTT試驗結果顯示,該膀胱腫瘤導向肽及其對照肽的相對抑制率均低于30%,細胞損傷修復實驗結果顯示,單位時間內,各組細胞表現(xiàn)出相同的生長趨勢,從而證實了該膀胱腫瘤導向肽對EJ細胞的生長幾乎無影響。結論:本實驗利用噬菌體展示技術體外篩選獲得了能與人膀胱癌EJ細胞特異性結合的小分子多肽AVEAAKT,并證實了該多肽對EJ細胞的生長幾乎無影響。經查該肽段與已知蛋白尚無同源性,因此它很有可能為膀胱癌的早期診斷和靶向治療提供新的思路。
【學位單位】：山西醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位年份】：2018
【中圖分類】：R737.14
【部分圖文】：

山西醫(yī)科大學碩士學位論文結 果1.細胞培養(yǎng)人移行性膀胱癌 EJ 細胞和正常膀胱黏膜上皮細胞常規(guī)培養(yǎng)于含 1%雙抗、10%FBS 的 RPMI-1640 培養(yǎng)液中，在普通光學顯微鏡下觀察可見細胞貼壁生長，狀態(tài)良好，細胞膜完整、胞漿飽滿，EJ 細胞多呈梭形(圖 1)，人膀胱正常上皮細胞多呈不規(guī)則形(圖 2)。

山西醫(yī)科大學碩士學位論文結 果1.細胞培養(yǎng)人移行性膀胱癌 EJ 細胞和正常膀胱黏膜上皮細胞常規(guī)培養(yǎng)于含 1%雙抗、10%FBS 的 RPMI-1640 培養(yǎng)液中，在普通光學顯微鏡下觀察可見細胞貼壁生長，狀態(tài)良好，細胞膜完整、胞漿飽滿，EJ 細胞多呈梭形(圖 1)，人膀胱正常上皮細胞多呈不規(guī)則形(圖 2)。

圖 3. ELISA 法鑒定噬菌體克隆與 EJ 細胞的結合情況菌體單鏈 DNA 的測序及分析 17 個陽性噬菌體的 DNA 測序結果顯示，R2、R5、R9、R12、R24 八個噬菌體克隆的序列均為 AVEAAKT（圖 4），R6、R20、隆的序列均為 SILPVTR，R11 噬菌體克隆測序失敗，其他噬間無重復（表 2）。登錄 NCBI/BLAST 網站，選擇 protein b析，結果顯示，AVEAAKT 與現(xiàn)有的基因和蛋白質無同源性。R1R2R3R4R5R6R7R8R9R10R11R12R13R14R15R16R17R18R19R20R21R22R23R24R25R26R27R28
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本文編號：2841196