彌漫性大B細(xì)胞淋巴瘤(diffuse large B cell lymphoma,DLBCL)是非霍奇金淋巴瘤(NHL)中最常見(jiàn)類型,占全部NHL患者的30%-40%。具有高度異質(zhì)性,不同亞型具有不同臨床特征、遺傳學(xué)改變和治療反應(yīng)。R-CHOP為基礎(chǔ)的聯(lián)合治療方案是目前DLBCL的標(biāo)準(zhǔn)方案,使得患者的5年生存期達(dá)到60%-70%,約30%-50%的患者會(huì)因藥物抵抗或疾病迅速?gòu)?fù)發(fā)而死亡。因此,該病目前仍是不可治愈的惡性疾病。腫瘤的發(fā)生發(fā)展是一個(gè)涉及多基因表達(dá)異常及轉(zhuǎn)錄后調(diào)控異常的復(fù)雜過(guò)程,然而任何生物反應(yīng)的改變均伴隨著能量的變化,因而能量代謝異常在腫瘤發(fā)生發(fā)展中的作用也越來(lái)越受到研究者的重視,目前認(rèn)為代謝改變是腫瘤的一個(gè)新特征,癌細(xì)胞通過(guò)代謝改變維持其高增殖率。PPA1為無(wú)機(jī)焦磷酸酶(inorganic pyrophosphatase,PPase)的家族成員之一,通過(guò)水解無(wú)機(jī)焦磷酸鹽(PPi)為2分子的正磷酸鹽(Pi),同時(shí)釋放能量,還可以使H~+從胞質(zhì)泵入膜內(nèi),起到質(zhì)子泵的作用。同時(shí)在特定條件下可作為能量供體和ATP替代物,在細(xì)胞生長(zhǎng)發(fā)育中也具有重要作用。目前關(guān)于PPA1與腫瘤的相關(guān)研究提示其在多種實(shí)體腫瘤中高表達(dá),這與PPA1能夠滿足惡性腫瘤快速生長(zhǎng)、異常分化過(guò)程中能量供給需求增加相關(guān)。然而PPA1在血液腫瘤尤其是高度異質(zhì)性的DLBCL中的作用尚未見(jiàn)報(bào)道。本課題旨在探討PPA1在彌漫性大B細(xì)胞淋巴瘤的表達(dá)及其表達(dá)與臨床特征之間的相關(guān)性,并通過(guò)體內(nèi)外實(shí)驗(yàn)探討PPA1對(duì)彌漫性大B細(xì)胞淋巴瘤細(xì)胞增殖及凋亡的影響及可能機(jī)制,為PPA1能否成為彌漫性大B細(xì)胞淋巴瘤新的檢測(cè)指標(biāo)用于早期診斷、預(yù)后判斷及治療靶點(diǎn)的選擇。我們首先采用免疫組化的方法檢測(cè)了65例DLBCL患者和20例反應(yīng)性淋巴結(jié)增生的患者中PPA1的表達(dá)情況。結(jié)果顯示PPA1在DLBCL患者的表達(dá)明顯高于對(duì)照組(p0.05),其高表達(dá)與患者B癥狀和IPI評(píng)分相關(guān)(p0.05)。接著,分別采用Real-time PCR和Western blot法檢測(cè)了PPA1在DLBCL細(xì)胞系及正常人永生B淋巴細(xì)胞中的表達(dá),結(jié)果顯示,與對(duì)照組相比,PPA1在大部分DLBCL細(xì)胞系中高表達(dá)(p0.05),PPA1蛋白水平在DLBCL中均明顯增高(p0.05)。然后,我們采用RNA干擾技術(shù)研究了PPA1基因沉默后對(duì)DLBCL細(xì)胞系增殖和凋亡的影響。結(jié)果顯示沉默PPA1后DLBCL細(xì)胞增殖能力減低,凋亡明顯增加(p0.05)。進(jìn)一步的機(jī)制探討中我們發(fā)現(xiàn)沉默PPA1后DLBCL中P53和P21表達(dá)量明顯增加,可能機(jī)制為通過(guò)調(diào)節(jié)JNK-P53通路來(lái)影響細(xì)胞增殖。同時(shí)發(fā)現(xiàn)沉默PPA1后caspase3剪切體表達(dá)量明顯增加,提示PPA1可能通過(guò)下調(diào)caspase3剪切體進(jìn)而抑制細(xì)胞調(diào)亡過(guò)程的�？傊�,本研究揭示PPA1在DLBCL發(fā)生發(fā)展中具有重要意義,為其成為新的靶標(biāo)用于疾病早期診斷、預(yù)后分層及治療提供了理論依據(jù)。
【學(xué)位單位】：重慶醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位年份】：2018
【中圖分類】：R733.1
【部分圖文】：

圖 4.1 PPA1 不同表達(dá)情況及在 DLBCL 組織中的分布Figure 4.1 Different expression of PPA1 and distribution in DLBCL organization2 PPA1 在彌漫性大 B 細(xì)胞淋巴瘤細(xì)胞系中的表達(dá)為了進(jìn)一步在細(xì)胞水平驗(yàn)證 PPA1 在 DLBCL 中的表達(dá)情況，分別采用Real-time PCR 和 Western blot 方法檢測(cè)對(duì)照組細(xì)胞：人正常 B 細(xì)胞永生化細(xì)胞系HMy2.CIR 和 DLBCL 細(xì)胞系：OCI-Lyl9、SU-DHL-4、VAL、SU-DHL-2 和 SU-DHL-8中PPA1的表達(dá)情況。其中DLBCL細(xì)胞系包括ABC亞型（SU-DHL-2和SU-DHL-8）和 GCB 亞型（OCI-Lyl9、SU-DHL-4 和 VAL）。2.1 Real-time PCR 檢測(cè) PPA1 在彌漫性大 B 細(xì)胞淋巴瘤細(xì)胞系中的表達(dá)PPA1 的 mRNA 表達(dá)量是相對(duì)于 GAPDH 的相對(duì)表達(dá)量，PPA1 在不同 DLBCL

在細(xì)胞水平驗(yàn)證 PPA1 在 DLBCL 中的表達(dá) Western blot 方法檢測(cè)對(duì)照組細(xì)胞：人正常 BCL 細(xì)胞系：OCI-Lyl9、SU-DHL-4、VAL、SU-D況。其中DLBCL細(xì)胞系包括ABC亞型（SU-DI-Lyl9、SU-DHL-4 和 VAL）。CR 檢測(cè) PPA1 在彌漫性大 B 細(xì)胞淋巴A 表達(dá)量是相對(duì)于 GAPDH 的相對(duì)表達(dá)量，P況以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（ x ±x）表示，結(jié)果顯示：A 在 DLBCL 中都有表達(dá)，在部分細(xì)胞系中表情況如圖 4.2。

重慶醫(yī)科大學(xué)博士研究生學(xué)位論文2.2 Western blot 檢測(cè) PPA1 在彌漫性大 B 細(xì)胞淋巴瘤細(xì)胞系中的表達(dá)分別收集 HMy2.CIR 和 DLBCL 各細(xì)胞系全蛋白質(zhì)，采用 Western blot 檢測(cè)PPA1 的表達(dá)，PPA1 的表達(dá)是其與β-actin 的相對(duì)表達(dá)量，結(jié)果顯示，PPA1 蛋白表達(dá)水平在 DLBCL 中明顯高于 HMy2.CIR（P<0.05）。其在 HMy2.CIR 和 DLBCL各細(xì)胞系中的表達(dá)情況如圖 4.3 所示。

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前1條

1 Zhitao Ying;Xuejuan Wang;Yuqin Song;Wen Zheng;Xiaopei Wang;Yan Xie;Ningjing Lin;Meifeng Tu;Lingyan Ping;Weiping Liu;Lijuan Deng;Chen Zhang;Zhi Yang;Jun Zhu;;Prognostic value of interim ~(18)F-FDG PET/CT in diffuse large B-cell lymphoma[J];Chinese Journal of Cancer Research;2013年01期

本文編號(hào)：2818586