【摘要】：目的:腫瘤的免疫治療是在化療和放療之后,治療腫瘤的又一種有效手段。隨著近幾年對腫瘤免疫治療手段的不斷嘗試和優(yōu)化,現(xiàn)今,腫瘤免疫治療已經(jīng)成為臨床上的重要治療方法之一。雖然相較于傳統(tǒng)方法,腫瘤免疫治療的毒性和對患者機體損傷已經(jīng)有了很大改變,但是不可避免會存在一定的副作用,細胞因子風暴就是其中較為嚴重的問題之一。如何兼顧腫瘤治療療效和降低細胞因子風暴的風險成為一種新的解決思路。舒尼替尼是一種多靶點的酪氨酸激酶抑制劑,是經(jīng)批準的上市抗腫瘤靶向藥。經(jīng)實驗發(fā)現(xiàn)舒尼替尼可以抑制免疫細胞的炎性因子產(chǎn)生,將經(jīng)免疫激動劑誘發(fā)的多種炎性細胞因子水平抑制在正常范圍內(nèi)。這一發(fā)現(xiàn)為腫瘤免疫治療的藥物安全性提供了一種新的思路。本次實驗首次對舒尼替尼抑制炎性因子的能力進行了普遍性驗證,對舒尼替尼在動物個體上對細胞因子風暴的抑制和保護能力進行探索;最終根據(jù)藥物特性對舒尼替尼和天然免疫通路,對舒尼替尼抗免疫細胞因子機制進行了探索。結果:在我們的研究中發(fā)現(xiàn),無論在體內(nèi)還是體外,舒尼替尼均能對炎性細胞因子產(chǎn)生抑制。在體外實驗中,舒尼替尼在小鼠的脾淋巴細胞、小鼠的髓源單核細胞、以及人源T細胞水平上由免疫激動劑強化的炎性細胞因子均有抑制作用;另一方面,舒尼替尼對多種天然免疫激發(fā)的炎性細胞因子也同樣具有抑制作用,其中包括TLR4、TLR5、TLR7、TLR7/8、TLR9幾種類型的激動模擬的炎性細胞因子的引發(fā);在體內(nèi)實驗中,實驗發(fā)現(xiàn)舒尼替尼可以顯著提高細胞因子風暴模型小鼠的生存期,降低小鼠外周血中的炎性細胞因子,保護建模小鼠的組織器官;最后實驗結果顯示,舒尼替尼對炎性細胞因子的作用與TLR-Myd88、TLR-MAPK、PDGFR-MAPK通路有關,PDGFR通過對P-ERK以及P-AKT作用來影響TLR-Myd88的作用,從而影響炎性細胞因子分泌。結論:舒尼替尼能顯著的抑制炎性細胞因子的產(chǎn)生,延長細胞因子風暴小鼠的生存周期且減小組織損傷,這一過程與PDGFR通過對P-ERK以及P-AKT的調控影響TLR-Myd88的作用有關。
【學位授予單位】：深圳大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2018
【分類號】：R730.51
【圖文】：

3.1 多種 TKI 的免疫抑制作用對比以及舒尼替尼的給藥濃度選擇為了研究酪氨酸激酶抑制劑和免疫之間的關系，首先我們篩選了市面上已經(jīng)投入使用的 11 種 TKI 進行測試，結果如下圖 1A 所示，并根據(jù)抑制效果的程度不同，對不同 TKI 抑制效果進行標注，并且選擇其中抑制效果最好的舒尼替尼進行進一步實驗。選定舒尼替尼作為實驗藥物之后，要為后面的效果實驗進行準備工作，為了選定實驗用舒尼替尼的濃度，我們對舒尼替尼的安全劑量范圍以及抑制效果與濃度之間的關系進行實驗。由圖 1B 數(shù)據(jù)且經(jīng)計算可以得到，舒尼替尼細胞實驗的 IC50 值為 21.14。圖 1C 數(shù)據(jù)中，我們做了濃度和抑制效果之間的相互關系，由圖可知，當舒尼替尼濃度大于 2μM 時，將會有 75%的細胞因子被抑制產(chǎn)生，同時當舒尼替尼的濃度為 2μM 時，不會對細胞造成大量殺傷，故此我們根據(jù)上述結果，選擇使用 2μM 的舒尼替尼來進行后續(xù)實驗。

為不同

Sunitinib 抑制免疫細胞因子的研究濃度舒尼替尼對脾淋巴細胞被 TLR7 激動劑免疫后產(chǎn)生白介素 6 因子的抑制作用。圖 1C 為舒尼替尼濃度依賴的正常細胞的殺傷作用。3.2 舒尼替尼抑制炎性細胞因子的具體作用實驗驗證了舒尼替尼對免疫細胞的炎性細胞因子產(chǎn)生具有抑制效果，進而對舒尼替尼的這種效果做進一步探索和廣譜性分析。首先我們使用脾細胞進行實驗，向其中加入模擬細菌感染過程的 TLR4 激動劑 LPS 以及模擬病毒感染過程的 TLR7 激動劑兩種，而后加入合適濃度的舒尼替尼，經(jīng)過 24 小時刺激，我們吸取細胞培養(yǎng)上清進行 ELISA 測試其中細胞因子，結果如下圖 2 所示。

【參考文獻】

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本文編號：2771309