發(fā)布時間：2020-07-26 14:29

【摘要】：【背景】肝細胞肝癌是世界上第六大常見的腫瘤,其致死率高居所有腫瘤的第三位。盡管肝癌的診療技術(shù)在不斷的提高,但因肝癌發(fā)病因素復(fù)雜、易發(fā)生轉(zhuǎn)移、對化療不敏感和手術(shù)切除后易復(fù)發(fā)等原因,肝癌患者的整體生存率仍然不高。因此,深入肝癌發(fā)生發(fā)展的相關(guān)分子機制研究,尋找新型的潛在的肝癌治療靶點具有重要的現(xiàn)實意義。著絲粒是染色單體上的蛋白結(jié)構(gòu)體,在染色體分離的過程中起到重要的調(diào)控作用,其調(diào)節(jié)失調(diào)或功能紊亂會導(dǎo)致非整倍體的出現(xiàn)和促進腫瘤的發(fā)生。著絲粒至少由80種不同的著絲粒蛋白組成,包括著絲粒蛋白A、B、C、I、K和M等,在腫瘤發(fā)生發(fā)展中起到重要的作用。著絲粒蛋白K(Centromere protein K,CENPK)是著絲粒蛋白家族成員之一,在維持著絲粒的功能和有絲分裂過程中可以起到重要的作用。研究發(fā)現(xiàn),CENPK在多種腫瘤中表達上調(diào),并與腫瘤的惡性進展相關(guān),可能扮演著致癌基因的角色。然而,CENPK在肝癌中表達情況及臨床意義尚不明確,其具有的生物學(xué)功能和相關(guān)機制也有待進一步深入探索。因此,本研究的主要目的是探討CENPK在肝癌中的表達及其相關(guān)的功能和機制�！緦嶒�?zāi)康摹?.探討CENPK在肝癌中的表達情況及臨床意義;2.研究CENPK對肝癌細胞惡性生物學(xué)功能的影響;3.探討CENPK調(diào)控肝癌細胞惡性改變的相關(guān)機制�！緦嶒灧椒ā�1.首先在TCGA數(shù)據(jù)庫統(tǒng)計分析CENPK在肝癌中的表達情況及臨床意義,然后在臨床收集的肝癌標(biāo)本上利用熒光實時定量PCR和Western Blot方法檢測CENPK的表達,對TCGA的結(jié)果進行進一步驗證;2.構(gòu)建CENPK干擾病毒載體,感染肝癌細胞系,建立穩(wěn)定下調(diào)CENPK表達和對照組NC的肝癌細胞。通過Celigo細胞計數(shù)、CCK-8、平板克隆形成、劃痕以及Transwell實驗檢測CENPK對肝癌細胞增殖、侵襲和遷移能力的影響;通過裸鼠皮下成瘤實驗,在體內(nèi)檢測CENPK對肝癌細胞增殖能力的影響;3.利用基因芯片技術(shù)篩選穩(wěn)定下調(diào)CENPK表達組和對照組NC肝癌細胞BEL-7404之間差異的基因表達譜,通過IPA分析獲得CENPK調(diào)控的關(guān)鍵通路分子,然后通過熒光實時定量PCR、Western Blot和細胞免疫熒光方法進行驗證;利用YAP1干擾病毒下調(diào)肝癌細胞中YAP1的表達,觀察下調(diào)YAP1的表達后肝癌細胞增殖、侵襲和遷移能力的改變。在CENPK穩(wěn)定下調(diào)的肝癌細胞SMMC-7721中過表達YAP1后觀察肝癌細胞的功能恢復(fù)情況。進一步通過Western Blot方法檢測CENPK和YAP1對EMT標(biāo)志物表達的影響�！緦嶒灲Y(jié)果】1.TCGA數(shù)據(jù)庫中顯示,CENPK在肝癌組織中表達升高,與臨床分級、T分期、病理分期和患者預(yù)后相關(guān);在本科室收集的肝癌組織和相對應(yīng)的癌旁組織樣本中證實CENPK的mRNA水平在肝癌組織中表達增高(86.7%,26/30),蛋白水平也在肝癌組織中表達增高(75%,6/8)。2.成功構(gòu)建CENPK干擾慢病毒載體并感染肝癌細胞系BEL-7404和SMMC-7721,構(gòu)建穩(wěn)定下調(diào)CENPK的肝癌細胞;通過Celigo細胞計數(shù)、CCK-8、平板克隆形成和裸鼠皮下成瘤實驗證實下調(diào)CENPK的表達后能夠抑制肝癌細胞的增殖能力;通過劃痕以及Transwell實驗證實下調(diào)CENPK的表達后能夠抑制肝癌細胞的侵襲遷移能力;3.基因芯片數(shù)據(jù)分析結(jié)果顯示,CENPK主要與惡性實體瘤、腫瘤生長、腫瘤細胞增殖、干細胞增殖、腫瘤細胞侵襲、細胞侵襲和上皮組織的發(fā)育等疾病或功能相關(guān),YAP1可能在CENPK參與調(diào)控肝癌惡性進展中起到重要的作用;熒光實時定量PCR、Western Blot和細胞免疫熒光方法證實下調(diào)CENPK的表達后肝癌細胞中YAP1的mRNA和蛋白的表達均降低;4.利用YAP1干擾病毒能夠成功下調(diào)肝癌細胞中YAP1的表達,下調(diào)YAP1的表達能夠抑制肝癌細胞的增殖、侵襲和遷移能力,可以部分模擬下調(diào)CENPK對肝癌惡性進展的抑制作用,而過表達YAP1的表達后能夠部分恢復(fù)下調(diào)CENPK所起到的抑制效應(yīng);5.Western Blot實驗結(jié)果表明,下調(diào)CENPK和YAP1的表達后都能夠上調(diào)上皮標(biāo)志物E-cadherin的表達,而降低間質(zhì)標(biāo)志物N-cadherin的表達;在穩(wěn)定下調(diào)CENPK表達的肝癌細胞SMMC-7721中過表達YAP1后,可以部分逆轉(zhuǎn)下調(diào)CENPK所引起的EMT的抑制效應(yīng)�！窘Y(jié)論】1.CENPK在肝癌組織表達增高,與肝癌的惡性表型及預(yù)后相關(guān);2.下調(diào)CENPK的表達能夠在體內(nèi)外水平抑制肝癌細胞的增殖、侵襲和遷移能力;3.下調(diào)CENPK的表達能夠抑制肝癌細胞的EMT過程,過表達YAP1后能部分恢復(fù)抑制EMT的作用;4.CENPK可以通過調(diào)控YAP1的表達影響肝癌的惡性進展。靶向作用于CENPK/YAP1可以為肝癌的治療提供新的思路。
【學(xué)位授予單位】：中國人民解放軍空軍軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：R735.7
【圖文】：

空軍軍醫(yī)大學(xué)博士學(xué)位論文-16-圖1. 肝癌診斷路線圖理有據(jù)，避免不合適過度醫(yī)療。此外也要注意手術(shù)后的治療，延長轉(zhuǎn)移復(fù)發(fā)的時間，提高患者的生存質(zhì)量。局部消融治療為中晚期不耐受手術(shù)切除的肝癌患者提供了新的治療手段，使其可能獲得根治的機會。常見消融手段包括射頻消融（RFA）、微波消融（MWA）和無水乙醇注射治療（PEI）等。TACE治療目前在臨床上應(yīng)用廣泛，這就要求我們臨床工作者必須嚴(yán)格按照介入療法的基本原則進行操作，準(zhǔn)確把握其適應(yīng)癥和禁忌癥，對術(shù)后發(fā)生的不良反應(yīng)要積極對癥治療。放療多為姑息性治療，可能會使肝癌患者獲得手術(shù)切除的機會，也可以延緩肝癌的進展，相對提高患者的生存質(zhì)量。全身治療可以聯(lián)合以上治療手段或單獨使用來改善肝癌患者腫瘤相關(guān)癥狀，延長生存時間。主要包括抗腫瘤治療、抗病毒治療和對癥治療�？鼓[瘤治療包括分子靶向藥物（索拉非尼）、系統(tǒng)化療（阿霉素、順鉑等）、免疫治療（干擾素α、胸腺法新等）、中醫(yī)藥治療（槐耳顆粒、華蟾素等）等；抗病毒治療在整個肝癌治療的過程中都應(yīng)該積極使用

空軍軍醫(yī)大學(xué)博士學(xué)位論文-17-圖2. 肝癌臨床分期及治療線路圖4. 肝癌治療的新進展目前手術(shù)切除、肝移植和射頻消融術(shù)是認(rèn)可的具有明確效果的肝癌治愈性手段[50]。近年來隨著研究的深入，在化學(xué)治療、免疫治療和分子靶向治療等方面也取得了一些新的進展。在手術(shù)切除或者肝移植術(shù)后使用小分子靶向藥物進行系統(tǒng)性全身化療已被廣泛應(yīng)用，特別適用于經(jīng)導(dǎo)管肝動脈化療栓塞失敗的患者[51]。但是，肝癌化療依然存在著劑量限制性、多重耐藥性等弊端[52]。在應(yīng)用于全身治療肝癌的各種多激酶抑制劑中，索拉非尼是唯一被FDA批準(zhǔn)的用于治療晚期肝癌的藥物[53]。研究表明，單用索拉非尼藥物治療的肝癌患者可以延長總生存期3個月，延緩了進展成為晚期肝癌的時間[54]。索拉非尼可以通過靶向抑制多種基因（VEGF-1/2/3、PDGFR-β、Raf和RET等）進而起到抗腫瘤血管生成和抑制腫瘤增殖的作用，適用于手術(shù)切除和射頻消融術(shù)后患者的輔助治療。瑞格非尼是索拉非尼的氟衍生物

空軍軍醫(yī)大學(xué)博士學(xué)位論文-22-圖3. 腫瘤細胞YAP/TAZ功能示意圖Zanconato F, et al. YAP/TAZ at the Roots of Cancer. Cancer Cell. 20162. YAP/TAZ在常見腫瘤中的表達及特性2.1 肺癌肺癌包括幾種類型，通常將肺腺癌（LAC）、肺鱗狀細胞癌（LSCC）、大細胞肺癌定義為非小細胞肺癌（NSCLC）。免疫組織化學(xué)研究結(jié)果表明，YAP或TAZ在腫瘤組織中表達升高，并與腫瘤組織學(xué)分級、TNM分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及患者預(yù)后不良息息相關(guān)[105-108]。在轉(zhuǎn)基因小鼠模型中研究發(fā)現(xiàn)，在通過致癌基因KRas的激活和Tp53（或Lkb1）等位基因缺失共同誘導(dǎo)的轉(zhuǎn)移性肺腺癌模型中可以發(fā)現(xiàn)高水平的YAP/TAZ定位于細胞核中[109, 110]。Zhang等研究發(fā)現(xiàn)從基因水平上降低YAP的表達能夠明顯減少在KrasG12D、Lkb1L/L小鼠模型中所形成的腫瘤的數(shù)量，更有趣的是所形成的病灶大多數(shù)是良性的，而且不會發(fā)展成為肺腺癌或肺鱗狀細胞癌；YAP/TAZ的激活自身可能不足以促進NSCLC的形成：在小鼠氣道上皮中具有表達活性的YAP僅能引起組織增生，其本身不足以引發(fā)腫瘤的形成[110]。然而

【相似文獻】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 顏蔥;涂曉璇;吳偉;童舟;張航瑜;劉璐璐;鄭怡;趙鵬;蔣微琴;方維佳;;晚期肝癌綜合治療進展[J];中國腫瘤臨床;2018年21期

2 代智;楊怡;;肝癌診斷標(biāo)志物的新進展及應(yīng)用[J];中國普外基礎(chǔ)與臨床雜志;2018年04期

3 吳洋洋;王愛平;董嵐;孫亞臣;王瑤;王海莉;郝銳;;單獨與聯(lián)合介入治療肝癌的臨床對比分析[J];醫(yī)學(xué)研究雜志;2017年09期

4 關(guān)文龍;;直接抗丙型肝炎病毒治療可能惡化肝癌[J];抗癌之窗;2016年06期

5 王興生;錢麗瓊;;手術(shù)切除在肝癌多學(xué)科綜合治療中的地位[J];健康之路;2017年08期

6 李曉文;;盧國棟:“八桂大地”的肝癌科學(xué)工作者[J];科學(xué)中國人;2017年25期

7 薛開先;肝癌發(fā)生的分子遺傳學(xué)和表遺傳學(xué)研究[J];癌癥;2005年06期

8 程黎明,王思元,林菊生;PTEN和p53蛋白在肝癌組織中的表達及意義[J];癌癥;2003年01期

9 上田啟次;凋亡抑制與肝癌發(fā)生[J];日本醫(yī)學(xué)介紹;1997年07期

10 王富根;沈德美;劉亦法;朱偉萍;許良中;;肝癌高發(fā)家族中1例患者染色體的研究[J];中國腫瘤臨床;1987年04期

相關(guān)會議論文 前10條

1 袁文丹;王東;;VEGF與細胞周期啟動在肝癌發(fā)生發(fā)展過程中的作用[A];中國病理生理學(xué)會第九屆全國代表大會及學(xué)術(shù)會議論文摘要[C];2010年

2 曹驥;盧曉旭;胡艷玲;李瑗;朱伶群;楊春;唐艷萍;歐超;張春燕;;利用基因富集及元分析初步篩選影響肝癌發(fā)生發(fā)展的關(guān)鍵基因[A];全國腫瘤流行病學(xué)和腫瘤病因?qū)W學(xué)術(shù)會議論文集[C];2011年

3 劉耕陶;孫華北;方亞南;;肝癌發(fā)生的化學(xué)預(yù)防[A];第十次中國生物物理學(xué)術(shù)大會論文摘要集[C];2006年

4 易宏淦;臧夢雅;吳志遠;徐靈芝;曲春楓;;慢性腸道炎癥狀態(tài)可促進肝癌發(fā)生[A];第九屆全國免疫學(xué)學(xué)術(shù)大會論文集[C];2014年

5 謝靜媛;戴煒;涂愛民;趙文高;符花;胡應(yīng)龍;;深圳地區(qū)53例肝癌發(fā)生的相關(guān)因素探討[A];全國第2屆中西醫(yī)結(jié)合傳染病學(xué)術(shù)會議暨國家中醫(yī)藥管理局第1屆傳染病協(xié)作組會議論文匯編[C];2008年

6 何立雄;王靈巧;黃玉晶;譚瑤;王佳;舒為群;;Gankyrin:AFB1誘導(dǎo)肝癌發(fā)生的新靶點,基于AFB1暴露的致癌模型和肝癌患者的證據(jù)[A];2017環(huán)境與公共健康學(xué)術(shù)會議暨中國環(huán)境科學(xué)學(xué)會環(huán)境醫(yī)學(xué)與健康分會、中國毒理學(xué)會生化與分子毒理專業(yè)委員會2017年年會論文集[C];2017年

7 韓志鵬;井瑩瑩;蔡雄;吳孟超;衛(wèi)立辛;;干細胞與肝癌發(fā)生發(fā)展的研究與思考[A];發(fā)揮中西醫(yī)優(yōu)勢治療原發(fā)性肝癌——香山科學(xué)會議第461次學(xué)術(shù)討論會畫冊[C];2013年

8 董志珍;姚登福;宗蕾;邱歷偉;吳瑋;吳信華;;肝癌發(fā)生早期胰島素樣生長因子-Ⅱ異常表達與改變特征[A];第四屆中國腫瘤學(xué)術(shù)大會暨第五屆海峽兩岸腫瘤學(xué)術(shù)會議論文集[C];2006年

9 舒宏;康曉楠;秦雪;劉銀坤;;肝癌發(fā)生不同病理階段血清蛋白篩選及結(jié)合珠蛋白的診斷價值[A];第十二屆全國肝癌學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2009年

10 白陽秋;楊玉秀;;肝癌發(fā)生過程中的差異基因表達譜研究[A];中華醫(yī)學(xué)會第七次全國消化病學(xué)術(shù)會議論文匯編（下冊）[C];2007年

相關(guān)重要報紙文章 前10條

1 長沙市傳染病醫(yī)院感染科副主任醫(yī)師 李金強;感染乙肝、丙肝 不可聽之任之[N];大眾衛(wèi)生報;2017年

2 記者 佘崢 通訊員 薛志平 歐陽桂蓮;為什么會得肝癌？原因搞清楚了[N];廈門日報;2017年

3 北京協(xié)和醫(yī)院 王晶;肝癌療效評價或有新標(biāo)志物[N];健康報;2017年

4 記者 顏維琦 曹繼軍;我科學(xué)家揭示肝癌發(fā)生早期分子機制[N];光明日報;2012年

5 記者 胡德榮;肝癌發(fā)生早期階段分子機制被揭示[N];健康報;2012年

6 通訊員 韋夏 本報記者 鄧宏鷹 鐘少鴻;不良飲食習(xí)慣易誘發(fā)肝癌[N];中國食品報;2009年

7 ;癌癥早知道[N];人民政協(xié)報;2002年

8 張中橋;C2基因表達下調(diào)與肝癌相關(guān)[N];中國醫(yī)藥報;2003年

9 劉江峰 劉 涓;捕捉肝癌的“蛛絲馬跡”[N];中國中醫(yī)藥報;2005年

10 指導(dǎo)專家 重慶醫(yī)科大學(xué)附屬第二醫(yī)院感染病科教授 張大志 記者 蘇云麗;AFP升高肝癌發(fā)生“第一信號”[N];醫(yī)藥導(dǎo)報;2009年

相關(guān)博士學(xué)位論文 前10條

1 鄭智坤;長鏈非編碼RNA ncRAN-L與肝癌細胞生物學(xué)行為的相關(guān)性研究[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2017年

2 汪建林;CENPK在肝癌增殖、侵襲和遷移中的作用及相關(guān)機制研究[D];中國人民解放軍空軍軍醫(yī)大學(xué);2018年

3 丁凱;SOX9在肝癌發(fā)生中的作用及機制研究[D];中國人民解放軍海軍軍醫(yī)大學(xué);2018年

4 馬冬;BCA3在肝細胞癌中的表達、生物學(xué)功能及分子機制研究[D];鄭州大學(xué);2018年

5 郭智賢;MicroRNA-346通過靶向BRMS1調(diào)控肝癌增殖、遷移和侵襲的初步研究[D];鄭州大學(xué);2018年

6 孫繼紅;PDHA1通過ROS/PI3K/Akt通路誘導(dǎo)肝癌細胞周期阻滯和凋亡的機制研究[D];鄭州大學(xué);2018年

7 王慧玲;miR-33b調(diào)控Fli-1抑制肝癌發(fā)生發(fā)展的分子機制研究[D];南方醫(yī)科大學(xué);2018年

8 楊國華;TET2/E-cadherin/β-catenin調(diào)控環(huán)路在肝癌演進中的作用研究[D];南方醫(yī)科大學(xué);2018年

9 張冬艷;lncRNA MIR22HG作為抑癌基因在肝癌發(fā)展中的功能及機制研究[D];南方醫(yī)科大學(xué);2018年

10 劉銘宇;MCM6通過MEK/ERK通路促進肝癌的侵襲轉(zhuǎn)移并可作為預(yù)測早期復(fù)發(fā)的血液學(xué)指標(biāo)[D];南方醫(yī)科大學(xué);2018年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條

1 張振芳;敲低PLEC對肝癌細胞生物學(xué)行為的影響[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2018年

2 鐘澤蘭;電針對肝癌化療小鼠自發(fā)性活動節(jié)律及節(jié)律基因Per1、Per2的影響[D];成都中醫(yī)藥大學(xué);2017年

3 李軍飛;C臂CT-PBV技術(shù)在肝癌TACE治療中的臨床價值探究[D];中國醫(yī)科大學(xué);2018年

4 孫婷婷;慢性丙型肝炎患者合并糖尿病對肝癌發(fā)生率影響的Meta分析[D];新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院;2018年

5 張瑤;接受抗病毒治療的乙肝肝硬化患者進展為肝癌的危險因素分析[D];中國醫(yī)科大學(xué);2018年

6 張怡;miR-1228參與p53正反饋調(diào)控并促進肝癌細胞的轉(zhuǎn)移和增殖[D];天津醫(yī)科大學(xué);2013年

7 徐麗霞;轉(zhuǎn)錄組動態(tài)分析氨對肝癌細胞基因表達的影響[D];鄭州大學(xué);2018年

8 郭亞男;基因表達與甲基化關(guān)聯(lián)分析挖掘肝癌的表觀誘導(dǎo)的潛在腫瘤標(biāo)志物[D];鄭州大學(xué);2018年

9 荊娜;自然殺傷細胞治療晚期肝癌的臨床研究[D];軍事科學(xué)院;2018年

10 李駿;靶向腫瘤內(nèi)高乳酸環(huán)境肝動脈化療栓塞術(shù)治療不可切除肝癌的臨床研究[D];安徽醫(yī)科大學(xué);2018年

本文編號：2770883