【摘要】：第一部分5,7-DMF抗肝癌細(xì)胞系HepG2活性及機(jī)制的研究目的:探討5,7-二甲氧基黃酮抗肝癌細(xì)胞系HepG2活性的可能機(jī)制方法:肝癌細(xì)胞系HepG2接種于6孔板上,接種細(xì)胞密度為每孔2×l05個(gè)細(xì)胞,分為介質(zhì)處理組(培養(yǎng)基中1%DMSO),5,7-二甲氧基黃酮處理組1OμM組,5,7-二甲氧基黃酮處理組25μM組,5,7-二甲氧基黃酮處理組50μM組,各組分為0h,24h,48h和72h四個(gè)時(shí)間點(diǎn)亞組。將肝癌細(xì)胞系HepG2接種在相應(yīng)濃度的5,7-二甲氧基黃酮的培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng),光鏡下觀察HepG2細(xì)胞形態(tài),MTT比色皿法測(cè)定不同濃度5,7-二甲氧基黃酮處理的HepG2在相應(yīng)時(shí)間的細(xì)胞活性水平;采用濃度分別為0、10、25和50μM的5,7-二甲氧基黃酮培養(yǎng)24h,利用流式細(xì)胞儀測(cè)定HepG2細(xì)胞周期的分布;采用濃度為25μM的5,7-二甲氧基黃酮培養(yǎng)肝癌細(xì)胞系HepG2,分別在0、6、12、24、48和72h使用DCFH-DA方法測(cè)定細(xì)胞內(nèi)ROS的水平及使用DiOC6方法測(cè)定細(xì)胞中Δψm的水平;采用濃度分別為0、10、25和50μM的5,7-二甲氧基黃酮培養(yǎng)48h,tunnel法檢測(cè)細(xì)胞凋亡情況并且在光鏡下觀察細(xì)胞集落形成情況。結(jié)果:5,7-二甲氧基黃酮處理HepG2細(xì)胞后,細(xì)胞數(shù)量減少,細(xì)胞形態(tài)出現(xiàn)明顯的改變;隨著5,7-二甲氧基黃酮處理時(shí)間的延長(zhǎng)及濃度的增加,HepG2的活力下降的更加明顯,IC50為25μM;G1期細(xì)胞群隨著5,7-二甲氧基黃酮的濃度增加而增加;細(xì)胞內(nèi)ROS的水平隨著時(shí)間的延長(zhǎng)逐漸升高,水平隨著時(shí)間的延長(zhǎng)而逐漸降低;細(xì)胞凋亡水平隨著5,7-二甲氧基黃酮的濃度升高而增加,細(xì)胞集落的水平隨著濃度的增加而相應(yīng)的減少。結(jié)論:5,7-二甲氧基黃酮可以降低肝細(xì)胞癌系HepG2的活力,半抑制濃度IC50為25μM。5,7-DMF抗HepG2活力的作用可能是通過阻滯細(xì)胞周期;增加了細(xì)胞內(nèi)ROS的水平,降低Δψm的水平;減少細(xì)胞集落的形成,最終導(dǎo)致細(xì)胞凋亡的增加。第二部分5,7-DMF對(duì)裸鼠體內(nèi)肝癌細(xì)胞系HepG2成瘤影響的研究目的:探討5,7-二甲氧基黃酮抑制HepG2在裸鼠體內(nèi)成瘤的作用研究。方法:BALB/c裸鼠36只,接種肝癌細(xì)胞系HepG2術(shù)后第1天開始給藥,按給藥方法及劑量分為6組,(1)生理鹽水組(NS):NS10μ1/只,腹腔注射;(2)5,7-DMF(10μM)組(D1):腹腔注射 5,7-DMF,10μ1/只;(3)5,7-DMF(25μM)組(D2):腹腔注射 5,7-DMF,10μ1/只;(4)5,7-DMF(50μM)組(D3):腹腔注射5,7-DMF,10μ1/只;(5)5-FU 組(FU):腹腔注射 5-FU20mg/kg/只;(6)5,7-DMF(50μM)+5-FU組(D3+FU):腹腔注射5-FU20mg/kg+5,7-DMF10μ1/只。以上各組均每3天1次連續(xù)5次分別于接種前、接種后第2、5、8、11、14、17天觀察各組BALB/c裸鼠腫瘤生長(zhǎng)情況及小鼠的一般狀況,電子天平測(cè)量小鼠的重量。皮下接種肝癌細(xì)胞系HepG2細(xì)胞后第5、8、11、14、17天觀察記錄腫瘤的生長(zhǎng)情況,測(cè)量長(zhǎng)短徑,用游標(biāo)卡尺測(cè)量皮下接種腫瘤的長(zhǎng)短徑,分析體積的變化,結(jié)果以均數(shù)加減標(biāo)準(zhǔn)差表示(x±s){腫瘤體積計(jì)算公式:V=(A×B2)/2,A為長(zhǎng)徑,B為短徑}。接種腫瘤細(xì)胞17天后,引頸法處死全部BALB/c裸鼠,將裸鼠皮下腫瘤完整剝離,拍照、進(jìn)行比較,行切片HE染色,顯微鏡下觀察細(xì)胞形態(tài)。結(jié)果:在體重方面,NS、D1、D2及D3組裸鼠的體重?zé)o明顯差異;D3+FU組同F(xiàn)U組裸鼠的體重?zé)o明顯差異。各組荷瘤裸鼠皮下腫瘤體積在實(shí)驗(yàn)結(jié)束較接種第5天比較均有增大,以NS組最明顯,D1組次之,D3+FU組增加最小。結(jié)論:本研究發(fā)現(xiàn),說(shuō)明5,7-DMF對(duì)裸鼠無(wú)明顯的不良反應(yīng),且5,7-DMF未增加5-FU的不良反應(yīng);5,7-DMF可抑制HepG2在裸鼠體內(nèi)成瘤的作用,且呈濃度相關(guān)性,濃度越高抑制成瘤的作用越明顯,5,7-DMF聯(lián)合5-FU可以增強(qiáng)抑制成瘤的能力。
【學(xué)位授予單位】：武漢大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：R735.7
【圖文】：

圖１肝癌細(xì)胞系ＨｅｐＧ２細(xì)胞形態(tài)（Ｘ１００倍）逡逑圖：對(duì)照組ＨｅｐＧ２細(xì)胞形態(tài)；Ｂ圖：１邋ＯｐＭ組的ＨｅｐＧ２組的ＨｅｐＧ２細(xì)胞形態(tài)；Ｄ圖：５０ｐＭ組的ＨｅｐＧ２細(xì)胞形態(tài)逡逑活力的變化逡逑

隨著５，７－ＤＭＦ的濃度的增加，細(xì)胞活力的抑制越明顯；在相同濃度逡逑的５，７－ＤＭＦ作用下，隨著干預(yù)處理時(shí)間的延長(zhǎng)，細(xì)胞活力的下降更加明顯，逡逑（見圖２）。逡逑１００逡逑ｇ邋７０逡逑＾邋６０邋■逡逑Ｉ邋５０－邋＿２４ｈ逡逑Ｉ邋４０－逡逑５邋２０邋：邋—７２邋ｈ逡逑１０邋－逡逑Ｏ邋邐邐邐邐邐邐邐邐邐邐邐邐邐邐邐邐逡逑０邐１０邐２５邐５０逡逑Ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ邋（ｕＭ）逡逑圖２肝癌細(xì)胞系ＨｅｐＧ２細(xì)胞活力逡逑注：采用濃度分別為Ｋ＾Ｍ、２５＾ｉＭ和５０｜ＪＶ４的５，７－ＤＭＦ分別培養(yǎng)２４ｈ、４８ｈ及７２ｈ，逡逑ＨｅｐＧ２細(xì)胞活性情況。逡逑３．３細(xì)胞周期化逡逑對(duì)比不同濃度的５，７－ＤＭＦ處理組細(xì)胞周期的情況，同ＯｐＭ的５，７－ＤＭＦ組逡逑９逡逑

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2729742