發(fā)布時間：2020-05-21 15:36

【摘要】：[目的]1.研究左半結(jié)腸和右半結(jié)腸的癌組織和相應(yīng)正常組織中細菌生物膜陽性率的表達水平差異;2.研究生物膜陽性和生物膜陰性的癌組織標本中丁酸和LL-37的表達水平差異,并用統(tǒng)計學(xué)方法探究丁酸和LL-37表達是否具有相關(guān)性;3.研究生物膜陽性和生物膜陰性的正常組織標本丁酸和LL-37的表達水平差異,并用統(tǒng)計學(xué)方法探究丁酸和LL-37表達是否具有相關(guān)性:4.通過本課題實驗研究探討細菌生物膜介導(dǎo)的丁酸和LL-37下調(diào)在腸癌發(fā)病過程中所起的重要作用,提出細菌生物膜可能是通過下調(diào)腸道上皮細胞LL-37的表達水平逃逸機體對其的免疫殺滅作用,為了解腸道細菌生物膜的自身特性及其致癌機理提供新的研究思路。[方法]1.總共采集20例右半結(jié)腸(指盲腸、升結(jié)腸、結(jié)腸肝曲和橫結(jié)腸)和20例左半結(jié)腸(結(jié)腸脾區(qū)、降結(jié)腸、乙狀結(jié)腸和直腸)的腸癌手術(shù)標本,分別用FISH實驗對癌組織和對應(yīng)的遠端正常組織的生物膜進行檢測,其中生物膜陽性被定義為粘液層的細菌入侵量109個/ml,腸上皮表面的生物膜的厚度(指線性距離)≥200μm[27];2.采用免疫組化法檢測上述40例生物膜陽性和生物膜陰性的癌組織標本中LL-37的分布情況,并應(yīng)用qRT-PCR技術(shù)檢測所有癌標本中LL-37 mRNA的表達水平和用ELISA法檢測所有癌標本中丁酸和LL-37的表達水平,探討生物膜、丁酸和LL-37三者之間的相關(guān)性;3.同理,采用免疫組化法檢測上述40例生物膜陽性和生物膜陰性的正常組織標本中LL-37的分布情況,并應(yīng)用qRT-PCR技術(shù)檢測所有正常標本中LL-37 mRNA的表達水平和用ELISA法檢測所有正常標本中丁酸和LL-37的表達水平,進一步探討生物膜、丁酸和LL-37三者之間的相關(guān)性。[結(jié)果]1.右半結(jié)腸癌組織標本的生物膜陽性率明顯高于左半結(jié)腸的癌組織標本,而右半結(jié)腸正常組織標本的生物膜陽性率也明顯高于左半結(jié)腸的正常組織標本。而且結(jié)果顯示癌組織標本生物膜陽性水平與相應(yīng)的正常組織標本一致,即生物膜陽性的癌組織標本,其對應(yīng)的正常組織標本生物膜也為陽性;生物膜陰性的癌組織標本,其對應(yīng)的正常組織標本也為陰性。2.生物膜陽性的癌組織標本的LL-37 mRNA和蛋白質(zhì)的表達水平明顯低于生物膜陰性的癌組織標本,差異具有顯著性(P0.05);生物膜陽性的癌組織標本丁酸的表達水平也明顯低于生物膜陰性的癌組織標本,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。3.生物膜陽性的正常組織標本的LL-37 mRNA和蛋白質(zhì)的表達水平明顯低于生物膜陰性的正常組織標本,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05);生物膜陽性的正常組織標本丁酸的表達水平也明顯低于生物膜陰性的正常組織標本,差異具有顯著性(P0.05)。[結(jié)論]1.研究結(jié)果顯示右半結(jié)腸的癌組織生物膜陽性率極高,而左半結(jié)腸的癌組織生物膜陽性率很低。這提示左半結(jié)腸的腸道菌群可能以一種生物膜非依賴性的方式致癌,而右半結(jié)腸腫瘤的發(fā)生發(fā)展可能與生物膜形成密切相關(guān);2.生物膜陽性的癌組織標本LL-37和丁酸的表達水平都明顯高于生物膜陰性的癌組織標本。同浮游狀態(tài)相比,細菌形成生物膜后的產(chǎn)丁酸能力可能會明顯下降;而生物膜陽性標本中LL-37的表達下降可能是由丁酸水平降低引起;3.同理,生物膜陽性的正常組織標本LL-37和丁酸的表達水平都顯著高于生物膜陰性的正常組織標本;4.細菌生物膜可能通過抑制丁酸的產(chǎn)生進一步降低LL-37的表達。一方面,LL-37的表達水平降低有利于細菌生物膜的形成,使其逃逸機體的免疫防御;另一方面,低水平的丁酸和LL-37使其對腫瘤細胞的促凋亡作用減弱,最終導(dǎo)致腸癌的發(fā)生。
【圖文】：

１．邋３小結(jié)逡逑在本實驗研究中，我們選擇了邋２０例右半結(jié)腸和２０例左半結(jié)腸的腸癌手術(shù)標逡逑本，分別用ＰＡＳ實驗對癌組織和對應(yīng)的遠端正常組織標本的黏液層進行檢測。逡逑之后再用ＦＩＳＨ實驗對ＰＡＳ染色陽性的癌組織和正常組織的細菌生物膜進行檢逡逑測。結(jié)果如下：逡逑１．３．１同國外研宄所得出的結(jié)論一致，右半結(jié)腸癌組織標本的生物膜陽性率明逡逑顯高于左半結(jié)腸的癌組織標本，右半結(jié)腸正常組織標本的生物膜陽性率也顯著高逡逑于左半結(jié)腸的正常組織標本。逡逑１．３．２生物膜陽性的癌組織標本，，其對應(yīng)的正常組織標本生物膜也為陽性；生逡逑物膜陰性的癌組織標本，其對應(yīng)的正常組織標本也為陰性。這提示細菌生物膜具逡逑備顯著地空間特異性，而并不具備明顯地腫瘤特異性。即決定生物膜是否存在的逡逑關(guān)鍵因素很可能取決于腫瘤起源的部位，而非其組織學(xué)類型。逡逑

的表達量較少。生物膜陽性的腸癌上皮細胞表面的ＬＬ＿３７表達量顯著低于生物膜逡逑陰性的腸癌上皮細胞，如圖２．１Ａ；生物膜陽性的正常上皮細胞表面的ＬＬ－３７表逡逑達量顯著低于生物膜陰性的正常上皮細胞，如圖２．１Ｂ。這提示細菌生物膜可能逡逑通過某種機制下調(diào)了腸上皮細胞中抗菌肽ＬＬ－３７的表達。逡逑Ｖ：逡逑Ｌ邋；邋：，逡逑圖２．１Ａ生物膜陽性（左）和生物膜陰性（右）的腸癌上皮細胞中ＬＬ－３７的表達逡逑Ｆｉｇｕｒｅ邋２．１邋Ａ邋Ｔｈｅ邋ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ邋ｏｆ邋ＬＬ－３７邋ｉｎ邋ｔｈｅ邋ｃａｎｃｅｒｏｕｓ邋ｅｐｉｔｈｅｌｉａｌ邋ｃｅｌｌｓ邋ｐｏｓｉｔｉｖｅ逡逑ｂｉｏｆｉｌｍ邋（ｌｅｆｔ）邋ａｎｄ邋ｎｅｇａｔｉｖｅ邋ｂｉｏｆｉｌｍ邋（ｒｉｇｈｔ）逡逑ｍ邋ｍ逡逑２４逡逑
【學(xué)位授予單位】：昆明醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：R735.3

【參考文獻】

相關(guān)期刊論文 前2條

1 史鵬偉;高艷彬;盧志陽;楊磊;;抗菌肽LL-37對鮑曼不動桿菌生物膜的抑制作用[J];南方醫(yī)科大學(xué)學(xué)報;2014年03期

2 Edyta Golińska;Anna Tomusiak;Tomasz Gosiewski;Gra yna Wiecek;Agnieszka Machul;Diana Mikoajczyk;Magorzata Bulanda;Piotr B Heczko;Magdalena Strus;;Virulence factors of Enterococcus strains isolated from patients with inflammatory bowel disease[J];World Journal of Gastroenterology;2013年23期

本文編號：2674514