【摘要】：目的:探討miR-191啟動子甲基化狀態(tài),及miR-191啟動子甲基化狀態(tài)作為非小細胞肺癌(Non-small cell lung cancer,NSCLC)預后分析等檢測指標的可能性。方法:通過生物信息學網站對miR-191啟動子區(qū)甲基化狀態(tài)預測,并從TCGA(The Cancer Genome Atlas)數(shù)據(jù)庫下載484例LUAD(lung adenocarcinoma,肺腺癌)以及397例LUSC(Lung squamous cell carcinoma,肺鱗癌)患者的甲基化芯片數(shù)據(jù)(Illumina Human Methylation 450 lvl-3)和相應臨床信息,分析位于mi R-191啟動子區(qū)甲基化狀態(tài)是否有差異性,并比較低甲基化組與高甲基化組間年齡、性別、TNM分期、預后等的差異。收集128例NSCLC術后組織和對應癌旁組織,選擇最具有特異性的甲基化位點設計引物,用甲基化特異性PCR(Methylation-Specific PCR,MSP)檢測NSCLC和癌旁組織中mi R-191啟動子甲基化水平,并分析miR-191啟動子甲基化水平與性別、年齡、分化程度、TNM分期、組織類型、預后等之間的關系。結果:生物信息學結果顯示miR-191啟動子區(qū)存在CpG島。分析TCGA數(shù)據(jù)庫的芯片數(shù)據(jù)發(fā)現(xiàn),在LUAD及LUSC中,miR-191啟動子區(qū)cg17217654位點甲基化水平顯著低于正常肺組織(P0.001),并且miR-191啟動子甲基化水平與患者的TNM分期相關,分期較晚的患者甲基化水平更低(P=0.025),生存分析顯示在LUAD組及LUSC組中mi R-191啟動子低甲基化水平的患者總生存期(P=0.0116)更短。根據(jù)cg17217654位點所設計的引物可以擴增出特異性的條帶,擴大樣本至128例后發(fā)現(xiàn)128例NSCLC標本中有57例發(fā)生甲基化,甲基化率為44.5%,128例正常肺組織標本中有105例發(fā)生甲基化,甲基化率為82.0%。肺癌組織和正常肺組織間miR-191啟動子甲基化率進行統(tǒng)計學分析,組間差異有統(tǒng)計學意義(χ~2=38.733,P=0.000),其甲基化水平與組織分化程度、患者TNM分期相關(P0.05),而與性別、年齡、組織類型等無明顯相關性(P0.05),生存分析顯示mi R-191啟動子低甲基化水平的患者總生存期更短(P=0.0139)。結論:miR-191啟動子的甲基化在NSCLC發(fā)生發(fā)展中扮演著至關重要的角色,其中,肺癌組織中mi R-191啟動子區(qū)的甲基化水平顯著低于癌旁組織,且低甲基化水平的患者TNM分期更晚、總生存期更短。MSP結果顯示,肺癌組織的甲基化率顯著低于癌旁組織,非甲基化患者的組織分化程度更低、TNM分期更晚;相較于甲基化組患者,非甲基化組的患者總生存期更短。本次研究成功篩選出特異性的甲基化位點并驗證,且該位點的甲基化與患者的TNM分期以及預后相關。這些結果表明,miR-191啟動子的甲基化異�？赡軈⑴c了NSCLC的發(fā)生發(fā)展過程。
【圖文】：

其中包含了 27k 平臺的 90%位點，并且同時能保證單堿基的精度。40k 平臺采用了 Infinium I（InfI）和 Infinium II（InfII）兩種化學檢測法，者占 28.1%（n=135501 個），后者占 71.9%（n=350076 個）[23,24]。InfI 使了兩個探針來檢測單個甲基化位點：一個甲基化的（methylated）M 型磁和一個未甲基化的（unmethylated）U 型磁珠。DNA 在經過重亞硫酸鹽轉之后，發(fā)生了甲基化的胞嘧啶仍然是 C 堿基，而沒有發(fā)生甲基化的胞嘧則變成了 T 堿基。用來檢測甲基化位點的 M 型磁珠探針的 3’末端為 G 堿，而 U 型磁珠 3’末端為 A 堿基，用以檢測未甲基化位點。當 DNA 的胞啶發(fā)生甲基化時，可與 M 磁珠配對，熒光標記的核苷酸摻入后延伸，可檢測到熒光信號，此時 M 磁珠發(fā)光。如果 DNA 胞嘧啶沒有被甲基化，與 U 磁珠配對，延伸后 U 磁珠發(fā)光。

圖 1.1 miR-191 啟動子區(qū) CpG 島的預測及各 CpG 位點陰影部分為 CpG 島Fig 1.1 Prediction of CpG islands in miR-191 promoter region and CpG sitesThe shadow area is CpG Island2.2 miR-191 及各甲基化芯片探針位點miR-191 啟動子區(qū)共有 15 個甲基化芯片探針位點，去除 2 個數(shù)據(jù)有缺失的位點，，將各甲基化探針位點標注在下圖中（附錄 1）。
【學位授予單位】：廣西醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2018
【分類號】：R734.2

【參考文獻】

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1 Jae Yun Lim;Sun Och Yoon;So-Young Seol;Soon Won Hong;Jong Won Kim;Seung Ho Choi;Ju-Seog Lee;Jae Yong Cho;;Overexpression of miR-196b and HOXA10 characterize a poor-prognosis gastric cancer subtype[J];World Journal of Gastroenterology;2013年41期

本文編號：2668702