發(fā)布時間：2020-04-11 04:45

【摘要】：目的:在全球范圍內,胃癌作為第五大常見惡性腫瘤,嚴重威脅到人類的健康。胃癌的發(fā)病率和死亡率均較高、預后差,這與它的深侵襲性、高轉移率、快速增殖、高復發(fā)率密切相關。以往的研究證實,Stathmin在胃癌的發(fā)生、發(fā)展和預后中起著重要作用。然而,Stathmin影響胃癌的發(fā)病及轉移機制尚不明確。在本研究中,我們運用同位素標記的相對和絕對定量技術(iTRAQ)尋找與Stathmin影響胃癌作用相關的蛋白,進而探究STMN在胃癌發(fā)生發(fā)展過程中的分子作用機制。方法:本研究先通過組織芯片進行免疫組化染色,在組織水平驗證STMN在胃癌組織和癌旁組織的差異表達。然后利用小干擾RNA技術特異性的下調AGS和MKN-28胃癌細胞中STMN蛋白的表達,再觀察胃癌細胞生物學功能的改變。再收集AGS、MKN-28兩種胃癌細胞STMN表達下調前后的分泌蛋白,運用了iTRAQ技術及質譜分析,對胃癌細胞蛋白進行定量蛋白質組學研究,篩選出AGS、MKN-28兩種胃癌細胞STMN表達下調前后差異表達的蛋白,再根據文獻檢索分析,從iTRAQ篩選出的蛋白中選擇幾個蛋白分子,運用免疫印跡、實時定量PCR驗證這些蛋白分子在蛋白水平、RNA水平的差異表達情況,以此探究STMN影響胃癌作用的可能分子機制。結果:我們的數(shù)據表明,Stathmin在胃腫瘤組織中過度表達,而且STMN在胃癌細胞的表達下調后,胃癌細胞的遷移、侵襲、增殖能力均明顯降低,且凋亡增多。經過iTRAQ技術及質譜分析,共篩選出96個差異表達的蛋白質,其中45個蛋白顯著上調,51個蛋白顯著下調。通過免疫印跡、實時定量PCR實驗,驗證了sCLU,CST3,CTSD,MMP1,MMP9,CDK1,HSP90,SOD1等蛋白的差異表達,其結果與iTRAQ結果一致。據質譜結果及文獻檢索分析,進一步驗證AKT和STATs等通路蛋白的活性,發(fā)現(xiàn)對STMN的表達抑制降低了AKT和STATs等通路蛋白的活性。結論:本研究中驗證了STMN在胃癌組織中高表達,且STMN在胃癌細胞的差異表達能顯著影響胃癌細胞的生物學功能。我們通過進一步的驗證發(fā)現(xiàn),對STMN的抑制降低了胃癌細胞中AKT和STATs等通路蛋白的活性,可能引起胃癌細胞Clusterin、Cystatin c和MMPs的表達水平降低,進而使胃癌細胞增殖、遷移侵襲能力減弱。
【圖文】：

22圖 1. 免疫組化分析 stathmin 在胃癌組織及癌旁組織的表達Figure 1.Immunohistochemistry (IHC) assay for STMN.(A)Representativeimmunohistochemistry images of STMN in GC tumor tissue and adjacent non-cancerousgastric tissue. (B) Corresponding IHC score values of STMN were significantly higher intumor tissues than in non-tumor adjacent tissues.*P<0.01.3.2 STMN 對胃癌細胞生物學功能的影響如免疫組化染色結果所示，，STMN 在胃癌組織中高表達�，F(xiàn)我們進一步探

25圖 3.STMN 對胃癌細胞的遷移、侵襲的影響Figure 3. STMN plays a critical role in GC cell migration and invasion. (A and B)Comparisonof the migration ability of GC cell lines with and without STMN knockdown by wound healingassays.(C)Differences in the invasive capability of AGS and MKN-28 cells between STMNknockdown and the controls, as assayed by transwell assays.*P<0.05.
【學位授予單位】：重慶醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2018
【分類號】：R735.2

【參考文獻】

相關期刊論文 前1條

1 Yu Lu;Chen Liu;Yong-Feng Xu;He Cheng;Si Shi;Chun-Tao Wu;Xian-Jun Yu;;Stathmin destabilizing microtubule dynamics promotes malignant potential in cancer cells by epithelial-mesenchymal transition[J];Hepatobiliary & Pancreatic Diseases International;2014年04期

本文編號：2623167