【摘要】：研究目的:食管癌(Esophageal Carcinoma)是全世界最常見(jiàn)的惡性腫瘤之一。食管癌高發(fā)區(qū)集中在亞洲、非洲和拉丁美洲等發(fā)展中國(guó)家。我國(guó)是食管鱗癌(Esophageal Squamous Cell Carcinoma,ESCC)高發(fā)地區(qū),國(guó)外以食管腺癌為主。近年來(lái),隨著食管癌多學(xué)科治療廣泛開(kāi)展及應(yīng)用,出現(xiàn)了基于食管鱗癌方面的免疫治療如PD-L1的隨機(jī)、平行、多中心3期臨床研究,食管癌診療水平逐步提高,但食管癌高復(fù)發(fā)及高轉(zhuǎn)移率,目前5年總生存率僅20%-30%。由于ESCC的腫瘤異質(zhì)性,淋巴結(jié)狀態(tài)、腫瘤分化、病理分期等傳統(tǒng)預(yù)后因素不能很好預(yù)測(cè)食管癌復(fù)發(fā)、轉(zhuǎn)移風(fēng)險(xiǎn),探索腫瘤預(yù)后有效預(yù)測(cè)標(biāo)志物亟待解決,以確定高復(fù)發(fā)和高轉(zhuǎn)移食管癌的不同亞組,指導(dǎo)個(gè)體化治療策略和優(yōu)化食管癌治療,以利提高食管癌患者的生存期。泛素特異性蛋白酶22(ubiquitin specific peptidase 22,USP22)在多種惡性腫瘤中高表達(dá),與腫瘤復(fù)發(fā)及轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。Ku80為DNA結(jié)合蛋白,與DNA末端及與DNA損傷雙鏈DNA斷裂(DSBs)相結(jié)合。Ku80與DSBs非同源末端結(jié)合(NHEJ)修復(fù)途徑密切相關(guān),參與維持染色體端粒穩(wěn)定、細(xì)胞增殖、凋亡及信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)機(jī)制。本研究通過(guò)分析食管癌細(xì)胞株及癌組織USP22和Ku80蛋白表達(dá)狀態(tài),探討USP22與Ku80表達(dá)相關(guān)性并分析二者間相互調(diào)控對(duì)食管鱗癌發(fā)生發(fā)展的作用,評(píng)價(jià)USP22-Ku80表達(dá)模型作為ESCC患者診斷、預(yù)后及治療分子表型意義,為ESCC診療提供新思路。研究方法:1.USP22和Ku80在食管鱗癌細(xì)胞株中表達(dá)免疫熒光檢測(cè)ECA109食管癌細(xì)胞和Ku80(病毒轉(zhuǎn)染后)過(guò)表達(dá)ECA109細(xì)胞中USP22和Ku80蛋白表達(dá)狀態(tài)。Western blotting檢測(cè)食管鱗癌細(xì)胞系ECA109細(xì)胞和Ku80過(guò)表達(dá)ECA109細(xì)胞中USP22和Ku80蛋白表達(dá)水平。2.USP22和Ku80在食管鱗癌患者腫瘤組織中的表達(dá)回顧性研究2010年1月到2010年12月山東大學(xué)附屬省立醫(yī)院胸外科食管癌切除術(shù)有完整隨訪資料80例食管鱗癌患者。男性58例,女性22例。ESCC病理標(biāo)本采用免疫組織化學(xué)染色方法(immunohistochemistry,IHC)檢測(cè)腫瘤組織USP22和Ku80蛋白表達(dá)。3.統(tǒng)計(jì)分析研究結(jié)果腫瘤患者蛋白表達(dá)水平與臨床病理學(xué)特征的關(guān)系用χ2檢驗(yàn)、Western blotting所測(cè)兩組蛋白表達(dá)定量比較應(yīng)用t檢驗(yàn),術(shù)后生存分析采用Kaplan-Meier和Log-rank檢驗(yàn)分析,連續(xù)型變量采用均值±標(biāo)準(zhǔn)差描述,二分類變量采用率和百分比描述,采用卡方檢驗(yàn)比較組間是否有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異,單因素及多因素的變量分析采用COX回歸分析。研究結(jié)果:1.USP22和Ku80在食管癌細(xì)胞株中表達(dá)USP22和Ku80免疫陽(yáng)性反應(yīng)均呈紅色熒光,且定位于細(xì)胞核,overlap發(fā)現(xiàn)ECA109 Ku80過(guò)表達(dá)細(xì)胞中USP22蛋白表達(dá)高于食管癌細(xì)胞系ECA109細(xì)胞系中表達(dá)水平。ECA109 Ku80過(guò)表達(dá)細(xì)胞株中,Western blotting蛋白定量其Ku80過(guò)表達(dá)同時(shí)USP22蛋白表達(dá)明顯高于ECA109細(xì)胞USP22表達(dá)水平(P0.05)。2.USP22和Ku80在食管鱗癌患者癌組織中表達(dá)USP22蛋白和Ku80蛋白陽(yáng)性表達(dá)產(chǎn)物表現(xiàn)為腫瘤細(xì)胞核內(nèi)棕黃色顆粒。80例ESCC患者分USP22陽(yáng)性51例和陰性29例,Ku80陽(yáng)性55例和陰性25例。Ku80與USP22均陽(yáng)性表達(dá)為44例,兩者表達(dá)呈正相關(guān)(r=0.501,P0.001)。USP22高表達(dá)狀態(tài)與腫瘤分化、T分期(P=0.008,P=0.005)顯著相關(guān),Ku80表達(dá)與腫瘤的分化、T分期顯著相關(guān)(P=0.010,P=0.008)。單因素分析ESCC患者預(yù)后因素,與腫瘤分化、T分期、N分期、臨床分期、USP22及Ku80陽(yáng)性表達(dá)水平顯著相關(guān)(P=0.001,P=0.023,P=0.005,P=0.009,P0.001,P0.001)。COX多因素回歸分析:腫瘤分化、USP22陽(yáng)性表達(dá)和Ku80陽(yáng)性表達(dá)為患者總生存期(OS)獨(dú)立危險(xiǎn)因素。ESCC 患者 1,3,5 年生存率為 88.75%,45.00%,20.65%;USP22 和 Ku80兩者同時(shí)表達(dá)1,3,5年生存率為72.71%,18.22%,0;Ku80陽(yáng)性組生存率低于陰性組(Log-rank χ2=21.50,P0.001);USP22陽(yáng)性組生存率低于陰性組(Log-rank χ2=18.65,P0.001);高分化組生存率高于中分化組和低分化組(Log-rank χ2=14.94,P0.001)。實(shí)驗(yàn)結(jié)論:1.USP22和Ku80免疫陽(yáng)性熒光反應(yīng)均定位于細(xì)胞核,呈紅色熒光,熒光overlap結(jié)果和Western blotting蛋白定量發(fā)現(xiàn)ECA109 Ku80過(guò)表達(dá)食管癌細(xì)胞株USP22蛋白表達(dá)高于食管癌ECA109細(xì)胞株中表達(dá)水平,USP22和Ku80蛋白表達(dá)水平顯著相關(guān)。2.USP22和Ku80在人ESCC中高表達(dá),且兩者表達(dá)水平均與腫瘤組織分化和T分期相關(guān),二者高表達(dá)呈現(xiàn)相關(guān)性,表達(dá)存在相互調(diào)控。3.腫瘤分化程度,USP22和Ku80的表達(dá)水平均為ESCC患者術(shù)總生存期獨(dú)立危險(xiǎn)因素,且兩者表達(dá)具有顯著相關(guān)性。4.USP22-Ku80表達(dá)模型有望成為ESCC診斷、預(yù)后的分子分型及新治療靶點(diǎn)。創(chuàng)新性及意義:1.ESCC細(xì)胞中首次USP22-Ku80表達(dá)的基礎(chǔ)研究,并發(fā)現(xiàn)其表達(dá)的相關(guān)性。2.ESCC患者檢測(cè)USP22-Ku80分子表達(dá)模型有重要臨床意義。
【圖文】：

圖１：邋Ａ：邋ＥＣＡ１０９細(xì)胞圖（１０Ｘ１０）邋Ｂ：病毒轉(zhuǎn)染的ＥＣＡ１０９邋Ｋｕ８０過(guò)表達(dá)細(xì)胞逡逑

圖３：邋Ｋｕ８０與ＵＳＰ２２在ＥＣＡ１０９與ＥＣＡ１０９邋Ｋｕ８０過(guò)表達(dá)食管癌細(xì)胞中的表達(dá)分析逡逑
【學(xué)位授予單位】：山東大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：R735.1

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2552019