【摘要】：目的研究飽和脂肪酸和不飽和脂肪酸對(duì)肺癌細(xì)胞增殖與自噬的影響。方法用0、30、60、120、240μmol/L硬脂酸(飽和脂肪酸)和DHA(不飽和脂肪酸)分別處理肺癌細(xì)胞A549,繪制細(xì)胞生長(zhǎng)曲線并計(jì)算克隆形成率以檢測(cè)細(xì)胞增殖。采用硬脂酸和DHA分別處理A549細(xì)胞24h后,采用激光共聚焦顯微鏡從形態(tài)學(xué)方面觀察細(xì)胞自噬情況。采用硬脂酸和DHA分別處理A549細(xì)胞12、24、36h后,用Western blotting檢測(cè)細(xì)胞自噬相關(guān)蛋白的表達(dá)。結(jié)果30~240μmol/L硬脂酸和DHA均有抑制A549細(xì)胞增殖的作用(P0.05),硬脂酸、DHA處理A549細(xì)胞24h后均檢測(cè)到細(xì)胞出現(xiàn)明顯的自噬;Western blotting結(jié)果顯示,硬脂酸、DHA分別處理A549細(xì)胞12、24、36h后,LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值升高(P0.05),哺乳動(dòng)物雷帕霉素靶蛋白(ser2481)磷酸化水平降低(P0.05)。結(jié)論飽和脂肪酸和不飽和脂肪酸均有抑制肺癌細(xì)胞增殖、誘導(dǎo)肺癌細(xì)胞自噬的作用,其機(jī)制可能與p-m TOR(ser2481)信號(hào)通路有關(guān)。
【圖文】：

670解放軍醫(yī)學(xué)雜志2017年8月1日第42卷第8期2結(jié)果2.1硬脂酸和DHA對(duì)A549細(xì)胞增殖的影響克隆平板經(jīng)掃描后的圖片如圖1A(a)所示，可見(jiàn)隨硬脂酸或DHA濃度的增加，細(xì)胞克隆數(shù)逐漸減少；圖1A(b)為細(xì)胞克隆數(shù)的統(tǒng)計(jì)分析結(jié)果，可見(jiàn)30、60、120、240μmol/L硬脂酸處理組和60、120、240μmol/LDHA處理組與各自的空白對(duì)照組相比，細(xì)胞克隆數(shù)均明顯減少，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。第5天細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)圖1B，120、240μmol/L硬脂酸作用A549細(xì)胞的第1、2、3、4、5天細(xì)胞增殖與空白對(duì)照組相比明顯減少，60μmol/L硬脂酸作用A549細(xì)胞后第4、5天與空白對(duì)照組相比細(xì)胞增殖明顯減少，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，其他處理組與空白對(duì)照組相比細(xì)胞增殖差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。120、240μmol/LDHA作用于A549細(xì)胞第1、2、3、4、5天與空白對(duì)照組相比細(xì)胞增殖明顯減少，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，60μmol/LDHA作用A549細(xì)胞第4、5天與空白對(duì)照組相比細(xì)胞增殖明顯減少，該變化與硬脂酸處理組一致，30μmol/LDHA作用A549細(xì)胞第5天與空白對(duì)照組相比細(xì)胞增殖明顯減少，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。從總體水平上看，硬脂酸、DHA都有抑制A549細(xì)胞增殖的作用。2.2硬脂酸、DHA誘導(dǎo)A549自噬熒光由圖2可見(jiàn)，120μmol/L硬脂酸、DHA分別作用穩(wěn)定感染RFP-GFP-LC3慢病毒的A549細(xì)胞24h，用激光掃描共聚焦顯微鏡觀察可見(jiàn)紅色熒光和綠色熒光。在自噬發(fā)生初期，LC3Ⅰ會(huì)酶解一段多肽，轉(zhuǎn)變成LC3Ⅱ，并引導(dǎo)RFP-GFP-LC3慢病毒聚集到自噬體上，在共聚焦顯微鏡下即可觀察到綠色、紅色熒光聚集點(diǎn)。隨著自噬的發(fā)生發(fā)展，，在自噬后期，pH值降低，綠色熒光變暗甚至淬滅，紅色熒光保持穩(wěn)定不變。由圖2所見(jiàn)，用共聚焦顯微鏡放大1890倍后，與空白對(duì)照組相比，硬脂酸、DHA處理組綠色?

MedJChinPLA,Vol.42,No.8,August1,20176712.3硬脂酸、DHA誘導(dǎo)A549自噬相關(guān)蛋白的表達(dá)在細(xì)胞發(fā)生自噬時(shí)，LC3Ⅰ向LC3Ⅱ轉(zhuǎn)化，LC3Ⅱ/LC3Ⅰ的含量在一定程度上能反映細(xì)胞自噬的形成。120μmol/L硬脂酸、DHA分別誘導(dǎo)A549細(xì)胞12、24、36h后，Westernblotting檢測(cè)結(jié)果(圖3A)顯示，與空白對(duì)照組比較，硬脂酸處理組(圖3A)和DHA處理組(圖3B)在12、24、36h時(shí)點(diǎn)LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值均升高，p-mTOR(ser2448)蛋白表達(dá)無(wú)變化，mTOR(ser2481)磷酸化均受到抑制，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。在相同條件下，硬脂酸和DHA處理A549細(xì)胞后，細(xì)胞自噬相關(guān)蛋白表達(dá)變化趨勢(shì)一致。3討論目前已有大量文獻(xiàn)報(bào)道不飽和脂肪酸DHA有抗腫瘤的作用，攝入DHA能降低乳腺癌[5-7]、結(jié)腸癌[8]、前列腺癌和腎癌[9]的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)。但有關(guān)飽和脂肪酸及不飽和脂肪酸對(duì)肺癌細(xì)胞影響的差異報(bào)道較少，圖2硬脂酸和DHA作用于A549細(xì)胞產(chǎn)生的自噬熒光Fig.2TheautophagyfluorescenceimageofA549exposedtostearicacidandDHArespectivelyControlSolventcontrolStearicacidDHAGFPRFPOverlay圖3硬脂酸、DHA分別誘導(dǎo)A549自噬的相關(guān)蛋白變化Fig.3Changesintheexpressionofautophagy-relatedproteininA549cellsinducedbystearicacidandDHATheexpressionsofLC3Ⅰ,LC3Ⅱ,p-mTOR(ser2448)andp-mTOR(ser2481)inA549cellsexposedtostearicacid(A)orDHA(B)ataconcentrationof120μmol/Lfor12,24and36hours.(1)P<0.01comparedwiththecontrolgroup(n=3)LC3ⅠLC3Ⅱp-mTOR(ser2448)p-mTOR(ser2481)GAPDHL3CⅡL/3CⅠ1.51.00.50(1)(1)(1)p-mTRO(se2481)/GrADHP0.80.60.40.20(1)(1)(1)LC3ⅠLC3Ⅱp-mTOR(ser2448)p-mTOR(se
【作者單位】： 廣東醫(yī)科大學(xué)生物化學(xué)與分子生物學(xué)教研室;廣東醫(yī)科大學(xué)附屬醫(yī)院呼吸內(nèi)科;
【基金】：國(guó)家自然科學(xué)基金(81273549) 廣東省科技計(jì)劃項(xiàng)目(2014A020212292)~~
【分類號(hào)】：R734.2

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本文編號(hào)：2551374