【摘要】：結(jié)直腸癌是世界范圍內(nèi)最常見(jiàn)的癌癥之一,是第四大致死性癌癥。每年大約有100萬(wàn)成人罹患結(jié)直腸癌,大約50萬(wàn)人死于結(jié)直腸癌。在世界范圍內(nèi)結(jié)直腸癌發(fā)生率變化很大,這主要取決于生活方式、環(huán)境和基因型等因素。流行病學(xué)研究發(fā)現(xiàn)了很多結(jié)直腸癌的致病因素,不可改變的致病因素包括年齡、家族史、炎癥性腸道疾病,而可以預(yù)防的致病因素包括過(guò)量飲食、大量飲酒、食肉過(guò)多、高脂飲食、吸煙、經(jīng)濟(jì)發(fā)展水平低和久坐等不良的生活方式。結(jié)直腸癌的預(yù)后情況主要依賴(lài)于初次診斷時(shí)所處的發(fā)展階段。早期診斷為結(jié)直腸癌的人群中,5年生存期可達(dá)90%,而發(fā)生轉(zhuǎn)移的人群中5年生存期只有12%。由于結(jié)直腸癌的典型癥狀不明顯,結(jié)直腸癌的診斷主要依賴(lài)于篩查。在過(guò)去的20年中,引入了內(nèi)窺鏡檢查、排泄物檢查、血液檢測(cè)、鋇劑灌腸檢查等篩查項(xiàng)目,使得結(jié)直腸癌的早期診斷率得以提高,使許多國(guó)家結(jié)直腸癌的發(fā)病率和致死率降低。然而不幸的是,即使是進(jìn)行有效的管理與統(tǒng)籌,也只有不到40%的結(jié)直腸癌患者能夠被早期診斷出來(lái)。腫瘤的一個(gè)重要特征是發(fā)生侵襲與轉(zhuǎn)移,而腫瘤侵襲與轉(zhuǎn)移的機(jī)制現(xiàn)在仍然未完全闡明。復(fù)雜的腫瘤遷移過(guò)程分為多個(gè)時(shí)期,包括周?chē)M織的侵襲、脈管系統(tǒng)的內(nèi)滲、循環(huán)系統(tǒng)的移位、侵入遠(yuǎn)端薄壁組織(肝臟、肺等)、微小轉(zhuǎn)移的建立、最終遠(yuǎn)隔臟器或組織形成肉眼可見(jiàn)的實(shí)體腫瘤。在因結(jié)直腸癌相關(guān)的死亡中,大約有90%的人是由于腫瘤的復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移；研究者對(duì)結(jié)直腸癌發(fā)生、發(fā)展、遷移過(guò)程中的信號(hào)通路的基因和不同的因子進(jìn)行了大量而深入的研究,取得了初步的結(jié)果。近期的研究表明,miRNA在結(jié)直腸癌的發(fā)生和發(fā)展過(guò)程中發(fā)揮了重要的作用。miRNA是一類(lèi)小的內(nèi)源性的調(diào)控RNA,它能夠在轉(zhuǎn)錄后水平上調(diào)控目的基因的表達(dá),50%以上的miRNA存在于染色體上的脆性位點(diǎn),在腫瘤的發(fā)生時(shí)這些脆性位點(diǎn)會(huì)發(fā)生改變。隨著miRNA在結(jié)直腸癌發(fā)生和發(fā)展過(guò)程中作用的深入研究,對(duì)揭示結(jié)直腸癌的預(yù)后及分子機(jī)制將會(huì)產(chǎn)生重要意義。為此我們?cè)O(shè)計(jì)了"miRNA-134在結(jié)直腸癌細(xì)胞中的表達(dá)及臨床意義研究”課題。本論文首先比較了結(jié)直腸癌組織與癌旁組織、正常人血清和結(jié)直腸癌患者血清、正常細(xì)胞系和結(jié)直腸癌細(xì)胞系miR-134(miRNA-134)表達(dá)水平的變化,并發(fā)現(xiàn)miR-134在結(jié)直腸癌組織、結(jié)直腸癌患者血清和結(jié)直腸癌細(xì)胞系中的表達(dá)均顯著降低。然后探索了miR-134對(duì)細(xì)胞增殖、凋亡的影響。通過(guò)實(shí)驗(yàn)了解miR-134的過(guò)表達(dá)和抑制內(nèi)源性miR-134表達(dá)兩方面對(duì)細(xì)胞增殖和凋亡的影響,驗(yàn)證miR-134 mimics和miR-134 inhibitor的表達(dá)效果。結(jié)果表明：miR-134 mimics能夠在細(xì)胞內(nèi)有效地表達(dá)miR-134,而miR-134 inhibitor能夠有效抑制內(nèi)源性miR-134的表達(dá)。通過(guò)轉(zhuǎn)染miR-134 mimics將miR-134過(guò)表達(dá),抑制了細(xì)胞的增殖,促進(jìn)了細(xì)胞的凋亡。而通過(guò)轉(zhuǎn)染miR-134 inhibitor的方法抑制內(nèi)源性miRNA的表達(dá)則能促進(jìn)細(xì)胞的增殖,抑制細(xì)胞的凋亡。因此說(shuō)明miR-134在結(jié)直腸癌發(fā)生和發(fā)展過(guò)程中發(fā)揮著腫瘤抑制因子的作用。在細(xì)胞凋亡過(guò)程中,caspase-7是一個(gè)重要的調(diào)控因子。本論文通過(guò)定量PCR和WesternBlot檢測(cè),發(fā)現(xiàn)miR-134過(guò)表達(dá)能夠促進(jìn)caspase-7mRNA及蛋白表達(dá)；而抑制內(nèi)源性miR-134的表達(dá)能夠使caspase-7mRNA及蛋白表達(dá)下降,表明miRNA-134可能是通過(guò)調(diào)控caspase-7最終控制細(xì)胞的增殖與凋亡。侵襲和遷移是腫瘤細(xì)胞兩個(gè)重要的特征。通過(guò)分析miR-134對(duì)腫瘤細(xì)胞侵襲和遷移的影響,發(fā)現(xiàn)miR-134能夠抑制細(xì)胞的侵襲和遷移。實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步證明了miR-134在體內(nèi)發(fā)揮抑癌基因的作用。為進(jìn)一步了解裸鼠和人的組織樣本中miR-134對(duì)腫瘤細(xì)胞的影響。課題通過(guò)將過(guò)表達(dá)miR-134的腫瘤細(xì)胞注射入裸鼠體內(nèi),在裸鼠的皮下形成腫瘤。30天后處死裸鼠,稱(chēng)重后分析兩組裸鼠腫瘤的重量,結(jié)果顯示miR-134過(guò)表達(dá)的細(xì)胞系中裸鼠的腫瘤顯著變小。隨之再分析了兩種腫瘤細(xì)胞中miR-134和細(xì)胞凋亡相關(guān)蛋白caspase-7的相對(duì)表達(dá)情況,結(jié)果表明miR-134能夠有效地在腫瘤細(xì)胞中過(guò)表達(dá),并使細(xì)胞凋亡相關(guān)蛋白caspase-7的表達(dá)水平顯著升高。從而提示miR-134可能是通過(guò)調(diào)控caspase-7的表達(dá)影響腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)。最后論文分析了miR-134表達(dá)與臨床病理特征之間的相關(guān)性：比較了高表達(dá)與低表達(dá)miR-134兩組患者與臨床病理因素之間關(guān)系,發(fā)現(xiàn)低表達(dá)miR-134與腫瘤大小、陽(yáng)性淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移等臨床病理因素相關(guān)�；趍iR-134表達(dá)的結(jié)直腸癌Kaplan-Meier生存曲線分析,表明低表達(dá)miR-134組患者的預(yù)后比高表達(dá)miR-134組患者的預(yù)后顯著較差(p0.01)。因此提示miR-134在結(jié)直腸癌的治療及預(yù)后中可能發(fā)揮重要的作用,為結(jié)直腸癌的診斷和治療提供了思路。通過(guò)本實(shí)驗(yàn)證實(shí)：miR-134在結(jié)直腸癌組織中的表達(dá)顯著降低,miR-134可能與結(jié)直腸癌具有相關(guān)性；進(jìn)一步分析miR-134對(duì)細(xì)胞的增殖、凋亡、分裂等的影響,發(fā)現(xiàn)miR-134能夠抑制細(xì)胞的增殖和分裂,促進(jìn)細(xì)胞的凋亡,發(fā)揮著抑癌基因的作用；而miR-134能夠促進(jìn)細(xì)胞凋亡相關(guān)蛋白caspase-7表達(dá)這一現(xiàn)象表明：miR-134可能通過(guò)促進(jìn)細(xì)胞凋亡相關(guān)蛋白caspase-7的表達(dá)進(jìn)而影響細(xì)胞的凋亡。這一結(jié)論在本組的裸鼠實(shí)驗(yàn)中得到證實(shí)。臨床miR-134表達(dá)與臨床病理因素之間的相關(guān)性分析表明：miR-134低表達(dá)組患者的預(yù)后比miR-134高表達(dá)組患者的預(yù)后顯著較差。以上研究表明miR-134是結(jié)直腸癌發(fā)生發(fā)展過(guò)程中的一個(gè)童要的miRNA,是結(jié)直腸癌中一個(gè)潛在的分子標(biāo)志物,在結(jié)直腸癌的治療及預(yù)后中可能發(fā)揮重要的調(diào)控作用。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：安徽醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類(lèi)號(hào)】：R735.34

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本文編號(hào)：2361232