本文選題：尼曼-匹克C1型類似蛋白 + 核因子kappa��； 參考：《第三軍醫(yī)大學》2016年博士論文

【摘要】：一、研究背景代謝異常是惡性腫瘤的重要特征。代謝改變不僅為腫瘤細胞輸送維持惡性生物學特性所需的營養(yǎng)物質(zhì)和能量,也向其源源不斷傳遞不受限制的生長信號。對于腫瘤代謝研究的關(guān)注始于二十世紀初Warburg效應(yīng)的發(fā)現(xiàn):正常細胞主要通過氧化磷酸化和三羧酸循環(huán)分解葡萄糖獲得能量,而腫瘤細胞即使在供氧充足的情況下也更傾向于利用糖酵解分解葡萄糖,伴隨產(chǎn)生大量的乳酸。經(jīng)過近一個世紀對腫瘤代謝的探索,以Warburg效應(yīng)為代表的代謝重編程研究早已經(jīng)突破了糖酵解和三羧酸循環(huán)的局限,許多代謝通路包括脂肪酸代謝,谷氨酰胺代謝,絲氨酸代謝和膽固醇代謝等,都被發(fā)現(xiàn)在腫瘤細胞中有代謝改變的現(xiàn)象。其中膽固醇代謝異常在腫瘤發(fā)生發(fā)展中的作用逐漸受到重視,但對其分子機制的研究還比較缺乏。膽固醇在人體中發(fā)揮非常重要的生理功能,它不直接提供能量,卻是合成膽汁、維生素D和甾體激素的必須原料,更重要的是它是構(gòu)成細胞膜的主要成分。細胞膜表面由豐富膽固醇和鞘磷脂組成的微結(jié)構(gòu)域脂筏作為功能平臺聚集各種信號分子,直接參與并調(diào)控了許多重要的信號轉(zhuǎn)導通路。正常生理狀態(tài)下的膽固醇代謝包括外源和血漿膽固醇的吸收攝取、內(nèi)源膽固醇合成以及膽固醇的流出三個方面,共同維持細胞及人體內(nèi)的膽固醇動態(tài)平衡。尼曼-匹克C1型類似蛋白(Niemann-Pick C1-like 1,NPC1L1)是外源膽固醇轉(zhuǎn)運的關(guān)鍵蛋白,是臨床上廣泛應(yīng)用的降脂藥物依折麥布的作用靶點。2008年,一項大型臨床研究報告顯示,服用含有依折麥布藥物的患者腫瘤發(fā)生率明顯高于安慰劑組(105vs.70,P=0.01)。盡管人們對于這一結(jié)論尚存在爭議,但很快動物實驗中也發(fā)現(xiàn)類似的現(xiàn)象:在致癌劑誘導的乳腺癌動物模型中依折麥布能夠促進腫瘤的惡性增殖,然而機制尚不清楚。基于多種腫瘤中發(fā)現(xiàn)的膽固醇代謝異�，F(xiàn)象,NPC1L1在膽固醇代謝中的重要作用以及NPC1L1靶點藥物依折麥布的致癌爭議,我們推測膽固醇轉(zhuǎn)運蛋白NPC1L1可能在腫瘤的發(fā)生發(fā)展中扮演重要角色。結(jié)直腸癌是消化道常見的惡性腫瘤,而脂質(zhì)代謝包括膽固醇代謝的異常與其發(fā)生發(fā)展密切相關(guān),我們對175例臨床結(jié)直腸癌患者標本的檢測發(fā)現(xiàn),NPC1L1在結(jié)直腸癌組織中的表達明顯低于對應(yīng)癌旁組織,其表達與臨床預(yù)后呈顯著負相關(guān)。因此我們進一步推測,NPC1L1的低表達對于結(jié)直腸癌的發(fā)生和發(fā)展可能具有重要調(diào)控作用。二、研究目的:1.研究NPC1L1在人結(jié)腸癌組織中的表達及臨床意義。2.研究NPC1L1對結(jié)直腸癌細胞惡性增殖能力的作用和分子機制。3.探討自噬抑制劑聯(lián)用TW-37對逆轉(zhuǎn)NPC1L1缺失引起的結(jié)直腸癌細胞增殖表型的作用和分子機制。三、研究材料與方法:1.結(jié)直腸癌組織芯片的免疫組織化學染色用于檢測NPC1L1在結(jié)直腸癌及癌旁組織的表達及臨床相關(guān)性。2.NPC1L1基因敲除的APCmin/+腫瘤小鼠模型用于研究NPC1L1表達缺失對腸道腫瘤發(fā)生發(fā)展的影響。3.CRISPR/Cas9技術(shù)構(gòu)建NPC1L1基因敲除的人結(jié)直腸癌細胞系用于體外增殖能力檢測及機制研究。4.基于慢病毒載體建立NPC1L1敲減及過表達的人結(jié)直腸癌細胞系用于體外增殖能力檢測及機制研究。四、研究結(jié)果:1.人結(jié)直腸組織中表達NPC1L1,與正常組織相比,人結(jié)直腸癌癌組織低表達。NPC1L1在癌組織中的低表達與臨床預(yù)后不良密切相關(guān)。2.NPC1L1敲除的APCmin/+腫瘤小鼠模型腸道腫瘤數(shù)量和腫瘤大小明顯增加,腫瘤負荷顯著加重。3.CRISPR/Cas9技術(shù)構(gòu)建NPC1L1基因敲除的人結(jié)直腸癌細胞系,基于慢病毒載體構(gòu)建NPC1L1敲減和過表達的人結(jié)直腸癌細胞系,使用克隆形成、CCK-8實驗和裸鼠移植瘤實驗證實NPC1L1表達具有調(diào)控腫瘤細胞惡性增殖的能力。4.NPC1L1敲除降低結(jié)直腸癌細胞細胞內(nèi)膽固醇水平,同時抑制LXRα信號通路和激活SREBP2信號通路。使用特異性藥物激活LXRα或抑制SREBP2對NPC1L1敲除引起的核因子kappa B(Nuclear Factor Kappa B,NF-κB)信號通路和增殖表型沒有明顯影響。使用環(huán)糊精和環(huán)糊精/膽固醇調(diào)控細胞內(nèi)膽固醇水平對NF-κB信號通路也沒有明顯影響。此外,回復(fù)表達野生型NPC1L1和L216A突變的NPC1L1對NF-κB信號通路和增殖表型具有相同的逆轉(zhuǎn)作用。5.NPC1L1缺失誘導的細胞自噬拮抗TW-37的促凋亡作用。自噬抑制劑聯(lián)用TW-37能夠顯著逆轉(zhuǎn)NPC1L1缺失引起的結(jié)直腸癌細胞增殖表型,自噬抑制增加結(jié)直腸癌細胞對TW-37誘導的細胞凋亡的敏感性。五、結(jié)論:1.NPC1L1在人結(jié)直腸癌組織中低表達,其表達缺失與臨床預(yù)后不良相關(guān)。2.NPC1L1調(diào)控人結(jié)直腸癌細胞的惡性增殖。3.NPC1L1通過調(diào)控NF-κB信號通路作用于腫瘤細胞增殖表型。4.NPC1L1通過非膽固醇依賴方式調(diào)控NF-κB信號通路和腫瘤細胞增殖。5.自噬抑制劑聯(lián)用TW-37顯著抑制NPC1L1缺失引起的結(jié)直腸癌細胞增殖表型。
[Abstract]:First, the study of metabolic abnormalities is an important feature of malignant tumors. Metabolic changes not only deliver nutrients and energy for cancer cells to maintain malignant biological properties, but also transmit unrestricted growth signals to them. The attention to tumor metabolism research began with the discovery of the Warburg effect in early twentieth Century: normal thin. Cells are mainly obtained by oxidative phosphorylation and three carboxylic acid cycle decomposition of glucose, and tumor cells are also more inclined to use glycolysis to decompose glucose even if the supply of oxygen is sufficient. It is associated with the production of large amounts of lactic acid. After nearly a century of exploration of tumor metabolism, the metabolic reprogramming study represented by the Warburg effect has long been studied Through the limitations of glycolysis and three carboxylic acid cycles, many metabolic pathways, including fatty acid metabolism, glutamine metabolism, serine metabolism and cholesterol metabolism, have been found to have metabolic changes in tumor cells. The research is still scarce. Cholesterol plays a very important physiological function in the human body. It does not provide energy directly. It is the essential ingredient of the synthetic bile, vitamin D and steroid hormones. More importantly, it is the main component of the cell membrane. The surface of the cell membrane is made up of the lipid rafts, a microstructural domain consisting of cholesterol and sphingomyelin, which is composed of cholesterol and sphingomyelin. The functional platform aggregates a variety of signal molecules and directly participates in and regulates many important signal transduction pathways. The cholesterol metabolism in normal physiological state includes three aspects of exogenous and plasma cholesterol absorption, endogenous cholesterol synthesis and cholesterol efflux, and the dynamic balance of cholesterol in human cells and in human body. Niemann - the PEAK C1 - like protein (Niemann-Pick C1-like 1, NPC1L1) is the key protein of exogenous cholesterol transport. It is a clinically widely used lipid lowering drug based on the target of C1. A large clinical study showed that the incidence of cancer in patients with eip-mb drugs was significantly higher than that of the placebo group (105vs.70, P=0.). 01. Despite the controversy over this conclusion, a similar phenomenon has been found in animal experiments: in the animal model of carcinogen induced breast cancer, the mechanism is not clear. However, the mechanism is not clear. Based on the abnormal cholesterol metabolism found in many kinds of tumors, NPC1L1 is in the metabolism of cholesterol. The important role of the drug and the carcinogenic controversy of the NPC1L1 target drug, according to the carcinogenic dispute of MB, we speculate that the cholesterol transporter NPC1L1 may play an important role in the development of the tumor. Colorectal cancer is a common malignant tumor in the digestive tract, and the lipid metabolism, including cholesterol metabolism, is closely related to its development and development. We have 175 cases of cancer. The detection of clinical colorectal cancer specimens showed that the expression of NPC1L1 in colorectal cancer tissues was significantly lower than that of the adjacent cancerous tissues, and the expression was negatively correlated with the clinical prognosis. Therefore, we further speculate that the low expression of NPC1L1 may have important regulatory role in the occurrence and development of colorectal cancer. Two, the purpose of this study is to study 1. NP Expression and clinical significance of C1L1 in human colon cancer tissue.2. study the role of NPC1L1 on the malignant proliferation of colorectal cancer cells and molecular mechanism.3. explore the role and molecular mechanism of the autophagy inhibitor combined with TW-37 to reverse the proliferation phenotype of colorectal cancer cells induced by NPC1L1 deletion. Three, research materials and methods: 1. colorectal carcinoma tissue core Immunohistochemical staining for detecting the expression of NPC1L1 in colorectal cancer and para cancer tissue and the clinical relevance of.2.NPC1L1 gene knockout in APCmin/+ tumor mice model to study the effect of NPC1L1 expression deletion on the development of intestinal cancer,.3.CRISPR/Cas9 technology to construct NPC1L1 gene knockout human colorectal cancer cell lines Detection and mechanism of proliferation ability in vitro.4. based on lentivirus vector to establish NPC1L1 knockout and overexpressed human colorectal cancer cell lines used in vitro proliferation ability detection and mechanism study. Four. Results: 1. human colorectal tissues express NPC1L1, compared with normal tissues, the low expression of.NPC1L1 in human colorectal cancer tissues is in the cancer tissue The number and size of the intestinal tumor in the.2.NPC1L1 knockout APCmin/+ mouse model with low expression and poor clinical prognosis is significantly increased. The tumor load significantly aggravates the.3.CRISPR/Cas9 technique for the construction of human colorectal cancer cell lines with NPC1L1 knockout, and the construction of NPC1L1 knockout and overexpressed human colorectal cancer based on the lentivirus vector Cell lines, using clone formation, CCK-8 experiment and nude mice transplanted tumor verified that NPC1L1 expression has the ability to regulate the malignant proliferation of tumor cells,.4.NPC1L1 knockout reduces the cholesterol level in the cells of colorectal cancer cells, inhibits the LXR alpha signaling pathway and activates the SREBP2 signaling pathway. Using specific drugs to activate LXR a or inhibit SREBP2 to N The nuclear factor kappa B (Nuclear Factor Kappa B, NF- kappa B) signaling pathway and the proliferation phenotype were not significantly affected by PC1L1 knockout. Cholesterol levels in cyclodextrin and cyclodextrin / cholesterol were not significantly affected by NF- kappa B signaling pathway. The pathways and proliferating phenotypes have the same reversal effect on the apoptosis inducing effect of autophagy induced by.5.NPC1L1 deletion of TW-37. Autophagy inhibitor combined with TW-37 can significantly reverse the proliferation phenotype of colorectal cancer cells induced by NPC1L1 deletion, and autophagy inhibits the sensitivity of colorectal cancer cells to TW-37 induced apoptosis. Five, conclusion: 1.N Low expression of PC1L1 in human colorectal cancer tissue, its lack of expression is associated with poor clinical prognosis..2.NPC1L1 regulates malignant proliferation of human colorectal cancer cells by regulating NF- kappa B signaling pathway in tumor cell proliferation phenotype,.4.NPC1L1 regulation of NF- kappa B signaling pathway and tumor cell proliferation by non cholesterol dependent manner. Phage inhibitor combined with TW-37 significantly inhibited the proliferation phenotype of colorectal cancer cells induced by NPC1L1 deletion.
【學位授予單位】：第三軍醫(yī)大學
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R735.34

【相似文獻】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 陸漢明,邵正才;青年人結(jié)直腸癌83例臨床分析[J];中國胃腸外科雜志;2000年04期

2 王漢濤 ,Kraemer M.;隨訪危險因素分析:復(fù)發(fā)和非復(fù)發(fā)結(jié)直腸癌的比較[J];中國實用外科雜志;2001年12期

3 蘇森;患結(jié)直腸癌婦女后代癌癥的危險性增加[J];中國腫瘤;2001年06期

4 汪一虹;在確定的法國人群中年齡<45歲結(jié)直腸癌病人與≥45歲結(jié)直腸癌病人的比較[J];國外醫(yī)學(消化系疾病分冊);2002年01期

5 李會晨;結(jié)直腸癌解剖位置的連續(xù)性右向遷移[J];國外醫(yī)學.外科學分冊;2003年03期

6 李志霞;結(jié)直腸癌復(fù)發(fā)及轉(zhuǎn)移的綜合治療[J];中華胃腸外科雜志;2003年06期

7 何建苗,蒲永東,曹志宇,劉衛(wèi)平;老年人結(jié)直腸癌186例的外科治療[J];中華胃腸外科雜志;2003年05期

8 保紅平,方登華,高瑞崗,李奎,張雪松,劉天錫;青年人結(jié)直腸癌臨床病理分析[J];中國普外基礎(chǔ)與臨床雜志;2004年01期

9 章江;;監(jiān)測結(jié)直腸癌非常必要[J];國外醫(yī)學情報;2004年04期

10 郜文秀,楊艷芳,梁小波,李耀平,李佩珍;細胞粘附分子變異體在結(jié)直腸癌中的表達及預(yù)后[J];中國公共衛(wèi)生;2005年07期

相關(guān)會議論文 前10條

1 鄭樹;;結(jié)直腸癌預(yù)后與轉(zhuǎn)移相關(guān)因素分析[A];2005年浙江省腫瘤學術(shù)會議全國大腸癌轉(zhuǎn)移與復(fù)發(fā)的診治研討會學術(shù)論文集[C];2005年

2 鄒一峰;吳小劍;蘭平;;結(jié)直腸癌免疫治療新進展[A];第十一次全國中西醫(yī)結(jié)合大腸肛門病學術(shù)會議論文匯編[C];2006年

3 郁寶銘;;結(jié)直腸癌治療的進展及其新理念[A];2006年浙江省肛腸外科學術(shù)年會論文匯編[C];2006年

4 王錫山;;結(jié)直腸癌治療的困惑之我見[A];第九屆全國腫瘤轉(zhuǎn)移學術(shù)大會暨2011年黑龍江省醫(yī)學會腫瘤學年會報告集[C];2011年

5 秦建平;;未病思想中的結(jié)直腸癌預(yù)防[A];貴州省中西醫(yī)結(jié)合學會肛腸學會第五屆學術(shù)交流會暨新技術(shù)新進展學習班論文匯編[C];2012年

6 高文慶;陳會林;童蕾;陸松春;;老年梗阻性結(jié)直腸癌診療體會(附42例報告)[A];首屆“之江中醫(yī)藥論壇”暨浙江省中醫(yī)藥學會2011年學術(shù)年會論文集[C];2011年

7 王啟遠;周長江;高云飛;徐巖;李坤;;血管內(nèi)皮生長因子與結(jié)直腸癌[A];《中華急診醫(yī)學雜志》第八屆組稿會暨急診醫(yī)學首屆青年論壇論文匯編[C];2009年

8 巴一;;結(jié)直腸癌靶向治療進展[A];第三屆中國腫瘤內(nèi)科大會教育集暨論文集[C];2009年

9 何超;朱洪波;;結(jié)直腸癌的生物治療[A];2009年浙江省腫瘤外科學術(shù)年會暨腫瘤外科規(guī)范化診治學習班論文匯編[C];2009年

10 萬德森;;進一步提高結(jié)直腸癌療效的思考[A];2009年浙江省腫瘤學術(shù)年會暨腫瘤診治新進展學習班論文匯編[C];2009年

相關(guān)重要報紙文章 前10條

1 中華醫(yī)學會腫瘤學分會主任委員 顧晉;分期不精確 致結(jié)直腸癌過度治療[N];健康報;2012年

2 本報記者 賈巖;跨線治療成結(jié)直腸癌最后防線[N];醫(yī)藥經(jīng)濟報;2012年

3 本報記者 賈巖;跨線治療構(gòu)筑結(jié)直腸癌最后防線[N];醫(yī)藥經(jīng)濟報;2012年

4 本報記者 林琳;結(jié)直腸癌：可以治愈的癌癥[N];醫(yī)藥經(jīng)濟報;2013年

5 記者 張妍　通訊員 熊靜帆 朱品磊;深圳結(jié)直腸癌發(fā)病高于全國[N];深圳商報;2013年

6 本報記者 孫剛;預(yù)防結(jié)直腸癌：請管住嘴[N];解放日報;2013年

7 上海市中醫(yī)醫(yī)院腫瘤科 侯鳳剛 副主任醫(yī)師;中醫(yī)藥在結(jié)直腸癌治療中的作用和特色[N];上海中醫(yī)藥報;2014年

8 李華虹 孫瑜淼 記者 李麗云 實習生 陰浩;專家呼吁：結(jié)直腸癌應(yīng)多學科規(guī)范化診療[N];科技日報;2014年

9 ;降低結(jié)直腸癌復(fù)發(fā)有新療法[N];人民日報;2003年

10 韓自力;新化療方案可高效治療結(jié)直腸癌[N];健康報;2007年

相關(guān)博士學位論文 前10條

1 雷舜;膽固醇轉(zhuǎn)運蛋白NPC1L1對結(jié)直腸癌細胞增殖的調(diào)控作用及分子機制研究[D];第三軍醫(yī)大學;2016年

2 陳濤;MicroRNA-31/FIH-1調(diào)控關(guān)系在結(jié)直腸癌發(fā)生發(fā)展中的作用及其機制研究[D];復(fù)旦大學;2014年

3 任翡;MYBL2基因在結(jié)直腸癌的表達及機制的初步探討[D];復(fù)旦大學;2014年

4 吳朋;結(jié)直腸癌中microRNA-615基因甲基化及其生物學特性探究[D];復(fù)旦大學;2014年

5 李澤武;MicroRNA-203靶向ZNF217基因調(diào)控結(jié)直腸癌生物學行為的研究[D];山東大學;2015年

6 徐興遠;低分子肝素對結(jié)直腸癌患者預(yù)后的影響及相關(guān)機制的研究[D];復(fù)旦大學;2014年

7 梁洪亮;miR-454在結(jié)直腸癌中的功能及其作用機制[D];山東大學;2015年

8 金鵬;MMR蛋白在雌激素致結(jié)腸癌細胞凋亡中的作用及SEPT9檢測結(jié)直腸癌的研究[D];第三軍醫(yī)大學;2015年

9 珠珠;云南省Lynch綜合征候選基因標志物研究[D];昆明醫(yī)科大學;2014年

10 周智航;SEMA3F通過下調(diào)ASCL2-CXCR4軸而抑制結(jié)直腸癌轉(zhuǎn)移的分子機制[D];第三軍醫(yī)大學;2015年

相關(guān)碩士學位論文 前10條

1 顏斐斐;術(shù)后結(jié)直腸癌患者癌因性疲乏與影響因素的研究[D];南方醫(yī)科大學;2009年

2 李斌;結(jié)直腸癌患者就診延遲分析[D];中南大學;2009年

3 葉建杰;慈溪市結(jié)直腸癌危險因素病例對照研究[D];浙江大學;2008年

4 趙波;結(jié)直腸癌危險因素及臨床流行病學特征的調(diào)查與分析[D];廣西醫(yī)科大學;2013年

5 宋艷敏;PAQR3基因甲基化水平與結(jié)直腸癌關(guān)系的研究[D];河北大學;2015年

6 黎江;Oct4B1在結(jié)直腸癌干細胞中的表達及其與Twist的相關(guān)性研究[D];遵義醫(yī)學院;2015年

7 楊文婷;PD-L1、SIRT1在結(jié)直腸癌組織中的表達及意義[D];福建醫(yī)科大學;2015年

8 羅佳;二代測序分析散發(fā)性結(jié)直腸癌和息肉的基因突變[D];福建醫(yī)科大學;2015年

9 崔慧鵬;精氨酸琥珀酸合成酶（ASS1）高表達與結(jié)直腸癌惡性進展的相關(guān)性研究[D];中國人民解放軍醫(yī)學院;2015年

10 崔娟娟;p53和nm23在結(jié)直腸癌中的表達及其臨床意義[D];河北聯(lián)合大學;2014年

，

本文編號：2110292