發(fā)布時(shí)間：2018-05-27 14:28

  本文選題：髓系來源抑制細(xì)胞 + 酸敏感離子通道��； 參考：《中南民族大學(xué)》2015年碩士論文

【摘要】：髓系來源抑制細(xì)胞(Myeloid-derived suppressor cells,MDSCs)是分化異常的、具有免疫抑制活性的髓系衍生細(xì)胞群體,包括髓系祖細(xì)胞、形態(tài)幼稚的未成熟單核細(xì)胞、粒細(xì)胞和樹突狀細(xì)胞等。它是導(dǎo)致腫瘤免疫治療失敗的重要原因。因此,人們?cè)噲D通過清除MDSCs或抑制其功能來減輕或消除機(jī)體免疫抑制狀態(tài)。酸敏感離子通道(acid-sensing ion channels,ASICs)是由H+激活的門控陽離子通道,可以感知細(xì)胞內(nèi)外H+梯度變化。MDSCs是否表達(dá)ASICs?腫瘤微環(huán)境酸化是否激活A(yù)SICs?ASICs是否參與了MDSCs的免疫抑制功能?迄今尚不清楚。本課題以小鼠來源MDSCs為研究對(duì)象,觀察其ASICs功能亞單位的表達(dá),并在此基礎(chǔ)上,探討腫瘤微環(huán)境的酸化對(duì)MDSCs的功能影響以及ASICs在其中的作用及其機(jī)制。研究的內(nèi)容和結(jié)果如下:1、荷瘤宿主來源MDSCs中ASICs表達(dá)增強(qiáng)構(gòu)建荷瘤小鼠模型,分離正常小鼠和荷瘤小鼠MDSCs,反轉(zhuǎn)錄PCR和Western blot研究結(jié)果證實(shí):正常小鼠和荷瘤小鼠MDSCs均能表達(dá)ASIC1、ASIC2和ASIC3mRNA和蛋白質(zhì),且腫瘤MDSCs表達(dá)ASICs水平高于正常小鼠。免疫雙標(biāo)法檢測(cè)ASICs在MDSCs內(nèi)亞細(xì)胞定位結(jié)果顯示:ASIC1和ASIC3表達(dá)于MDSCs細(xì)胞質(zhì)內(nèi),ASIC2表達(dá)于MDSCs胞膜。2、腫瘤微環(huán)境酸化對(duì)MDSCs功能的影響(1)微環(huán)境酸化可促進(jìn)MDSCs分泌ROS,當(dāng)pH降低到5.5之后,其活性氧顯著增加,約為正常小鼠的2.6倍(p0.001)。而微環(huán)境酸化對(duì)MDSCs的NO表達(dá)則無影響。表明粒細(xì)胞樣MDSC亞群(PMN-MDSC)活化,增加ROS的產(chǎn)生,從而增強(qiáng)其免疫抑制活性,而單核細(xì)胞樣MDSC亞群(Mo-MDSCs)活化不明顯,因此產(chǎn)生NO較少。(2)微環(huán)境酸化可促進(jìn)MDSCs表達(dá)TGF-β1,當(dāng)pH降低至5.5時(shí),荷瘤小鼠表達(dá)TGF-β1明顯高于正常小鼠(3倍),用ASICs阻斷劑阿米洛利阻斷之后,TGF-b1顯著降低(p0.001)。而微環(huán)境酸化對(duì)MDSCs表達(dá)IL-10無顯著影響。提示荷瘤小鼠MDSCs可能通過分泌TGF-b1等抑制性細(xì)胞因子抑制機(jī)體的免疫功能。(3)微環(huán)境酸化可促進(jìn)MDSCs抑制T細(xì)胞增殖:利用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)T細(xì)胞增殖顯示,當(dāng)T細(xì)胞與pH5.5的MDSCs細(xì)胞共培養(yǎng)后,T細(xì)胞的增殖從32.6%降低到20.4%(p0.01)。表明微環(huán)境酸化促進(jìn)腫瘤小鼠MDSCs細(xì)胞對(duì)T細(xì)胞增殖抑制作用。3、腫瘤微環(huán)境酸化對(duì)MDSCs功能影響的細(xì)胞信號(hào)途徑借助Western Blotting檢測(cè)p38MAPK和NF-κB信號(hào)通路關(guān)鍵蛋白磷酸化結(jié)果顯示:腫瘤來源MDSCs中ASICs表達(dá)增強(qiáng),并通過誘導(dǎo)p38磷酸化,進(jìn)而促進(jìn)p65磷酸化水平提高,來促進(jìn)MDSCs的免疫抑制功能。而用ASICs抑制劑阿米洛利預(yù)先阻斷ASICs后,p38和p65的磷酸化水平明顯降低。提示:在酸化條件下MDSCs免疫抑制功能強(qiáng)化可能是通過促進(jìn)ASICs表達(dá),并由p38MAPK和NF-κB信號(hào)通路所介導(dǎo)的。結(jié)論:1.首次發(fā)現(xiàn)MDSCs表達(dá)ASIC1、ASIC2和ASIC3mRNA及其蛋白質(zhì),ASIC1和ASIC3定位于細(xì)胞質(zhì)內(nèi),ASIC2定位于細(xì)胞膜。荷瘤小鼠MDSCs的ASICs各亞基表達(dá)均顯著高于對(duì)照組正常小鼠。2.腫瘤酸化微環(huán)境促進(jìn)MDSCs分泌ROS和TGF-β1,抑制T細(xì)胞增殖。3.腫瘤MDSCs中ASICs表達(dá)增強(qiáng),推測(cè)腫瘤微環(huán)境酸化信號(hào)通過ASICs傳導(dǎo),激活p38磷酸化,進(jìn)而激活細(xì)胞核內(nèi)p65磷酸化,調(diào)控MDSCs相關(guān)基因的表達(dá),強(qiáng)化MDSCs免疫抑制功能。
[Abstract]:Proliferation of MDSCs ( MDSCs ) is an important reason for the failure of MDSCs . (3)寰幆澧冮吀鍖栧彲淇?jī)杩汳DSCs鎶戝埗T緇嗚優(yōu)澧炴畺:鍒╃敤嫻佸紡緇嗚優(yōu)鏈嫻婽緇嗚優(yōu)澧炴畺鏄劇ず,褰揟緇嗚優(yōu)涓巔H5.5鐨凪DSCs緇嗚優(yōu)鍏卞煿鍏誨悗,T緇嗚優(yōu)鐨勫孌栦粠32.6%闄嶄綆鍒，

本文編號(hào)：1942483