本文選題：美洲大蠊精制物CⅡ-3　切入點：人工合成短肽HFDT1　出處：《大理大學》2017年碩士論文　論文類型：學位論文

【摘要】：目的腫瘤是影響人類健康的重大疾病,目前尋找高效低毒的治療藥物是科技工作者的主要任務之一。美洲大蠊精制物CⅡ-3是大理大學云南省昆蟲生物醫(yī)藥研發(fā)重點實驗室最新研制出的一種以肽類為主的物質(zhì),已經(jīng)發(fā)現(xiàn)對多種人類腫瘤細胞有抑制作用,但這種肽類物質(zhì)的體內(nèi)抗腫瘤作用及其機制并不清楚。本課題建立了小鼠胃癌細胞MFC荷瘤BALB/c小鼠模型,給予美洲大蠊精制物CⅡ-3及相關合成短肽HFDT1處理,研究其對荷瘤小鼠腫瘤抑制作用及其免疫功能的影響,了解美洲大蠊多肽抗腫瘤的免疫調(diào)節(jié)機制,為研發(fā)該藥提供理論基礎。方法選取6~8周齡體重在20g左右的SPF級BALB/c小鼠,將對數(shù)生長的MFC細胞接種于小鼠右側腋下。將荷瘤小鼠隨機分為模型組(生理鹽水20mL/kg灌胃,1次/d)、CTX組(45mg/kg,10m L/kg隔日腹腔注射1次)、CⅡ-3高劑量組(400mg/kg,20mL/kg灌胃,1次/d)、CⅡ-3低劑量組(200mg/kg,20m L/kg灌胃,1次/d)、短肽HFDT1組(7.8mg/kg,10m L/kg腹腔注射,1次/d),另設正常對照組(生理鹽水20m L/kg灌胃,1次/d)。小鼠腫瘤模型建立次日開始給藥,連續(xù)給藥10d。處理結束的次日,處死小鼠,分離腫瘤塊、脾臟和胸腺,計算抑瘤率、脾指數(shù)及胸腺指數(shù)。經(jīng)小鼠眼內(nèi)眥靜脈取血,進行外周血免疫細胞分析,收集血清,ELISA法測血清IgG、IgM、IgA水平。取小鼠腹腔細胞,純化巨噬細胞后加LPS培養(yǎng)24h,取培養(yǎng)上清測細胞因子TNF-α。用小鼠淋巴細胞分離液分離腫瘤塊淋巴細胞進行Th1/Th2反應測定。制備脾單個細胞懸液,熒光素標記的抗體染色后FACS Calibur檢測固有免疫細胞及淋巴細胞含量,進行淋巴細胞亞群及Th1/Th2反應分析。分離脾淋巴細胞,加入ConA培養(yǎng)48h后收集上清,ELISA檢測細胞因子IL-2、IL-4、IL-10、L-17、IFN-γ和TNF-α。CFSE標記脾淋巴細胞后分別加入LPS和ConA培養(yǎng)4d通過FACS Calibur進行B細胞和T細胞增殖功能測定。結果1.美洲大蠊精制物CⅡ-3高、低劑量組及HFDT1組在荷瘤小鼠體內(nèi)均表現(xiàn)出抑制腫瘤生長的作用,抑瘤率分別為33.11%、42.88%和46.20%,CⅡ-3低劑量組抑瘤率高于CⅡ-3高劑量組,HFDT1抑瘤率高于CⅡ-3低劑量組。隨著給藥時間的增加,CTX組小鼠體重下降明顯,而美洲大蠊精制物CⅡ-3高、低劑量組及短肽HFDT1組小鼠體重與正常組及模型組相比無明顯變化。2.與CTX組相比,美洲大蠊精制物CⅡ-3及人工合成短肽HFDT1增加了脾指數(shù)及胸腺指數(shù)(P0.05),且增加了外周血中的白細胞總數(shù)、單核細胞、淋巴細胞及粒細胞的數(shù)量(P0.05),免疫球蛋白IgA、IgM和Ig G的含量也呈升高趨勢(P0.05)。3.與CTX組相比,美洲大蠊精制物CⅡ-3及人工合成短肽HFDT1能夠上調(diào)脾臟中NK細胞、巨噬細胞及DC細胞(P0.05),下調(diào)Th17細胞。與正常組相比,CⅡ-3高、低劑量組及HFDT1組巨噬細胞分泌細胞因子TNF-α升高(P0.05),Th17細胞分泌的IL-17是降低(P0.05),進一步說明小鼠脾臟中巨噬細胞活性升高而Th17細胞降低,這些變化與流式細胞術檢測結果相符。此外,CⅡ-3高劑量組及HFDT1組提高了腹腔巨噬細胞分泌TNF-α的水平(P0.05)。4.與CTX比較,美洲大蠊精制物CⅡ-3高、低劑量、HFDT1能夠上調(diào)脾淋巴細胞(P0.05)。與模型組比較,美洲大蠊精制物CⅡ-3高、低劑量、HFDT1能增加脾T細胞比例(P0.05)。與CTX組比較,美洲大蠊精制物CⅡ-3高、低劑量、HFDT1能上調(diào)CTL(P0.05),下調(diào)Treg細胞(P0.05);CⅡ-3低劑量組及HFDT1組能下調(diào)初始T細胞(P0.05)。與CTX組比較,美洲大蠊精制物CⅡ-3高、低劑量、HFDT1能上調(diào)成熟B細胞(P0.05)。5.與模型組相比,美洲大蠊精制物CⅡ-3高、低劑量組及HFDT1組能刺激T細胞增殖,其中對CTL的刺激作用更為明顯(P0.05),而對B細胞的刺激增殖作用不明顯(P0.05)。CⅡ-3低劑量組的B細胞及T細胞增殖的刺激能力均高于CⅡ-3高劑量組。6.CⅡ-3及HFDT1對Th的刺激分化作用在不同來源的Th細胞有不同表現(xiàn)。FACS檢測結果發(fā)現(xiàn)低劑量CⅡ-3刺激脾Th細胞向Th1分化作用強于CⅡ-3高劑量組;高劑量CⅡ-3及HFDT1刺激腫瘤組織Th細胞向Th1分化作用強于低劑量CⅡ-3組。在脾臟中CⅡ-3低劑量組Th1細胞分泌的IFN-γ和IL-2高于CⅡ-3高劑量組,而在腫瘤組織中,CⅡ-3低劑量組Th1細胞分泌的IFN-γ略低于CⅡ-3高劑量組,該結果重復了FACS檢測結果。結論1.美洲大蠊精制物CⅡ-3及人工合成短肽HFDT1在小鼠體內(nèi)具有較好的抗腫瘤作用,且無明顯的毒副作用。2.美洲大蠊精制物CⅡ-3及人工合成短肽HFDT1的抗腫瘤作用可能是通過上調(diào)外周血免疫細胞的數(shù)量,上調(diào)免疫器官內(nèi)細胞的增殖,調(diào)節(jié)各亞群淋巴細胞的比例,促進CTL的增殖,上調(diào)脾臟中巨噬細胞、NK細胞、DC細胞、CTL細胞及Th1細胞反應,上調(diào)免疫球蛋白的產(chǎn)生,下調(diào)Treg細胞來實現(xiàn)的。3.美洲大蠊精制物CⅡ-3及人工合成短肽HFDT1有望成為一種高效低毒的抗腫瘤候選藥物。
[Abstract]:The purpose of tumor is a major disease affecting human health, the drugs to find efficient and low toxicity is one of the main tasks of science and technology workers. Periplaneta americana extracts C II -3 is a peptide based material of Dali University of insects in Yunnan Province Key Laboratory of biomedical research newly developed, has been found to have inhibitory effects on a variety of human tumor cells, but the peptide in vivo antitumor effect and its mechanism is not clear. This study established a mouse gastric cancer cell MFC BALB/c tumor mouse model, given the Periplaneta americana extracts C II -3 and synthetic peptide HFDT1, to study the effect of inhibition and immune function of tumor bearing mice. Understanding the immune Periplaneta americana antineoplastic polypeptide regulatory mechanism, providing a theoretical basis for the development of the drug. Methods SPF BALB/c mice at about 20g 6~8 weeks of weight. 鏁扮敓闀跨殑MFC緇嗚優(yōu)鎺ョ浜庡皬榧犲彸渚ц厠涓，

本文編號：1561216