本文關(guān)鍵詞： 硫酸軟骨素 糖胺聚糖 黑色素瘤 免疫調(diào)節(jié) 抗腫瘤 lncRNA　出處：《魯東大學》2017年碩士論文　論文類型：學位論文

【摘要】：背景:硫酸軟骨素(chondroitin su Lfate,CS)是一類廣泛存在于人與動物結(jié)締(軟骨)組織中的糖胺聚糖,它主要是從動物喉骨、鼻中隔、氣管等軟骨組織分離純化而得的一類酸性黏多糖,CS的結(jié)構(gòu)是由D-葡糖醛酸與N-2酰-D氨基半乳糖酸硫酸酯組成。硫酸軟骨素多作為保健品或藥品用于人們的日常生活中,用于防治冠心病、心絞痛、心肌梗死、關(guān)節(jié)炎、角膜炎、耳聾耳鳴、神經(jīng)痛等疾病,長期服用毒副作用較低,隨著近幾年的深入研究,發(fā)現(xiàn)硫酸軟骨素還具有抗腫瘤的作用,具有多種重要生物活性。黑色素瘤是人類常見的一種疾病,它是發(fā)生率、死亡率增長速度最快的皮膚病癌癥,一直以來都受到人們的廣泛關(guān)注。化療法對人體的傷害程度非常大,最根本的方法還是找到相關(guān)的基因從而達到治療黑色素瘤的目的。已有研究證明海參中提取的糖胺聚糖具有抑制黑色素瘤增長的作用,它能夠有效控制腫瘤的生長,從而達到治療黑色素瘤的目的,硫酸軟骨素作為糖胺聚糖的一種,本課題擬研究硫酸軟骨素提高機體的免疫力作用機制以及控制黑色素瘤生長的作用機制。方法:1、體外培養(yǎng)小鼠脾臟細胞:通過硫酸軟骨素進行刺激,從脾臟細胞數(shù)目,伽馬干擾素水平來檢測其免疫水平的變化。2、建立小鼠黑色素瘤模型:通過靜脈注射硫酸軟骨素,來觀察小鼠脾臟細胞、肺浸潤性淋巴細胞數(shù)目的變化,通過流式細胞術(shù)來檢測小鼠脾臟細胞、肺浸潤性淋巴細胞數(shù)目的變化。3、通過提取RNA進行測序:從基因的水平上鑒定硫酸軟骨素對小鼠免疫力的影響以及對黑色素瘤模型小鼠的影響。結(jié)果:1、通過用硫酸軟骨素對正常小鼠個體進行刺激,發(fā)現(xiàn)脾臟大小明顯增大,在一定的濃度范圍內(nèi)脾臟細胞的數(shù)目隨著濃度的增高而增加,血液中淋巴細胞百分率升高,這說明了硫酸軟骨素具有一定的免疫增強作用。2、建立黑色素瘤模型小鼠,選取合適的硫酸軟骨素濃度對黑色素瘤模型小鼠進行刺激,發(fā)現(xiàn)血液中淋巴細胞百分率的變化腫瘤組降低,腫瘤加藥組升高且與空白對照組相近。通過細胞計數(shù)發(fā)現(xiàn)小鼠脾臟細胞、肺浸潤性淋巴細胞數(shù)目均增長,肺部腫瘤個數(shù)減少,流式細胞儀分析小鼠脾臟細胞、肺浸潤性淋巴細胞中CD8T細胞、CD4T細胞、NKT細胞均有不同程度的變化。3、通過高通量測序,對腫瘤組和腫瘤加藥組小鼠脾臟細胞RNA進行測序,分析腫瘤組和腫瘤加藥組處理組,發(fā)現(xiàn)二組中l(wèi)nc RNA、m RNA關(guān)于細胞周期調(diào)控、細胞增殖、免疫調(diào)控方面的基因表達量存在差異,并且差異顯著,這就為從根本上治愈黑色素瘤提供一定的理論依據(jù)。結(jié)論:硫酸軟骨素能提高機體的免疫力,并且對黑色素瘤的治療提供了理論依據(jù),能夠降低黑色素瘤的個數(shù),從而為黑色素瘤的治療、治愈提供可能。
[Abstract]:Background: chondroitin sulfate (chondroitin su) is a class of glycosaminoglycans (glycosaminoglycans) that are widely found in human and animal connective tissues (cartilage), mainly from the animal laryngeal bone and nasal septum. The structure of a class of acidic mucopolysaccharide CS, isolated from cartilage tissue such as trachea, is composed of D-glucuronic acid and N-2-acyl-D-galactosulfate. Chondroitin sulfate is used as a health product or medicine in people's daily life. For prevention and treatment of coronary heart disease, angina pectoris, myocardial infarction, arthritis, keratitis, deafness and tinnitus, neuralgia and other diseases, long-term use of toxic side effects are low, with the in-depth study in recent years, found that chondroitin sulfate also has anti-tumor effect. Melanoma is a common disease in humans. It is a skin disease with the fastest rate of morbidity and mortality. People have been paying close attention to it all the time. Chemotherapy is very harmful to the human body. The most fundamental method is to find the relevant genes to treat melanoma. Studies have shown that the glycosaminoglycan extracted from sea cucumber can inhibit the growth of melanoma, and it can effectively control the growth of melanoma. In order to treat melanoma, chondroitin sulfate is a kind of glycosaminoglycan. The aim of this study was to study the mechanism of chondroitin sulfate (chondroitin sulfate) enhancing immunity and controlling the growth of melanoma. Methods: the spleen cells of mice were cultured in vitro by chondroitin sulfate, and the number of spleen cells was determined by chondroitin sulfate. Gamma interferon level to detect its immune level changes. 2, to establish a mouse melanoma model: through intravenous injection of chondroitin sulfate to observe the number of spleen cells, lung infiltrating lymphocytes, Flow cytometry was used to detect mouse spleen cells. Changes in the number of infiltrating lymphocytes in the lung. 3. Sequencing by extracting RNA: the effects of chondroitin sulfate on the immunity of mice and on melanoma model mice were evaluated at the gene level. Results: 1, by using sulfuric acid. Chondroitin stimulated normal mice, It was found that the size of spleen increased obviously, and the number of spleen cells increased with the increase of concentration, and the percentage of lymphocytes in blood increased in a certain concentration range. This indicated that chondroitin sulfate had a certain immune enhancement effect. 2. The melanoma model mice were established and the appropriate concentration of chondroitin sulfate was selected to stimulate the melanoma model mice. It was found that the percentage of lymphocytes in the blood decreased in the tumor group, but increased in the tumor plus drug group and similar to that in the blank control group. The number of splenocytes and infiltrating lymphocytes in the lung increased and the number of tumor in the lung decreased in the tumor group by cell count. Flow cytometry was used to analyze the spleen cells of mice and the changes of CD4T cells in CD8T cells in infiltrating lymphocytes of lung. The RNA of spleen cells in tumor group and tumor plus drug group were sequenced by high-throughput sequencing. It was found that there were significant differences in the gene expression of lnc RNAm RNA in cell cycle regulation, cell proliferation and immune regulation between the two groups. Conclusion: chondroitin sulfate can improve the immunity of the body and provide a theoretical basis for the treatment of melanoma, which can reduce the number of melanoma. Thus provides the possibility for the treatment and cure of melanoma.
【學位授予單位】：魯東大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2017
【分類號】：R739.5

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本文編號：1553004