本文關(guān)鍵詞： 腎透明細(xì)胞癌 侵襲轉(zhuǎn)移 睪丸孤核受體4 miR-32-5p circ_000002　出處：《浙江大學(xué)》2016年博士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：研究背景和目的：腎透明細(xì)胞癌(Clear Cell Renal cell carcinoma, ccRCC)是起源于腎實(shí)質(zhì)泌尿小管上皮系統(tǒng)的惡性腫瘤,是常見的泌尿系統(tǒng)惡性腫瘤。腎透明細(xì)胞癌起病較隱匿,大多無典型的臨床表現(xiàn),早期診斷率不高,其中大約30%患者在診斷時(shí)已發(fā)生轉(zhuǎn)移,失去手術(shù)機(jī)會(huì)。轉(zhuǎn)移性腎透明細(xì)胞癌的治療目前主要依賴靶向治療,但其平均有效時(shí)間僅6-15個(gè)月。因此,深入研究腎透明細(xì)胞癌轉(zhuǎn)移的機(jī)制,尋求更好的治療轉(zhuǎn)移性腎透明細(xì)胞癌的方法顯得尤為重要。近兩年我們的研究發(fā)現(xiàn)TR4可以通過CCL2/CCR或者miR-373-3p促進(jìn)前列腺癌的遷移和侵襲,亦可影響前列腺癌干細(xì)胞的侵襲和遷移能力促進(jìn)前列腺癌轉(zhuǎn)移,并且我們也發(fā)現(xiàn)TR4可以促進(jìn)前列腺癌的化療抵抗和放療抵抗。TR4在前列腺癌轉(zhuǎn)移以及前列腺癌放化療抵抗中的作用已逐漸得到研究人員的認(rèn)可并引起重視,而關(guān)于TR4在腎癌中的作用尚未見報(bào)道。在本研究中,我們探索了TR4在ccRCC侵襲轉(zhuǎn)移中的作用,并通過運(yùn)用分子生物學(xué)方法闡述其具體機(jī)制。研究方法和結(jié)果：1.TR4在人類ccRCC組織標(biāo)本和細(xì)胞株中的表達(dá)、與患者預(yù)后相關(guān)性及其在ccRCC侵襲轉(zhuǎn)移中功能的研究我們通過對ccRCC患者組織標(biāo)本進(jìn)行免疫組織化學(xué)染色發(fā)現(xiàn)轉(zhuǎn)移性ccRCC患者腎癌組織中TR4表達(dá)明顯高于非轉(zhuǎn)移性ccRCC患者,并且通過TCGA數(shù)據(jù)庫發(fā)現(xiàn)TR4與ccRCC患者的預(yù)后呈負(fù)相關(guān),進(jìn)一步在細(xì)胞水平發(fā)現(xiàn)TR4在侵襲能力較強(qiáng)的ccRCC細(xì)胞株中表達(dá)相對較高,并且通過調(diào)控細(xì)胞株內(nèi)TR4表達(dá)水平在細(xì)胞進(jìn)一步驗(yàn)證TR4促進(jìn)ccRCC侵襲轉(zhuǎn)移的作用。2.TR4通過miR-32-5p/TR4/HGF/Met信號通路促進(jìn)ccRCC侵襲轉(zhuǎn)移的具體機(jī)制研究我們運(yùn)用Western blot, CbIP、雙熒光素酶報(bào)告基因?qū)嶒?yàn)、拯救實(shí)驗(yàn)等方法在細(xì)胞層面證明TR4可以通過轉(zhuǎn)錄調(diào)控上調(diào)HGF/Met/MMP2/MMP9通路的表達(dá)促進(jìn)ccRCC侵襲轉(zhuǎn)移,miR-32-5p可以抑制TR4及TR4下游通路HGF/Met/MMP2/MMP9的表達(dá)進(jìn)而抑制ccRCC侵襲轉(zhuǎn)移,并且miR-32-5p可以通過與TR43'UTR的結(jié)合抑制TR4的表達(dá)。最后通過動(dòng)物實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步驗(yàn)證細(xì)胞實(shí)驗(yàn)的結(jié)果。3.TR4通過上調(diào)circ_000002/miR-19s-3p/miR-29s-3p/IGF-1通路促進(jìn)ccRCC侵襲轉(zhuǎn)移的具體機(jī)制研究我們運(yùn)用qRT-PCR、Western blot、ChIP、雙熒光素酶報(bào)告基因?qū)嶒?yàn)、拯救實(shí)驗(yàn)、RNA-pulldown等方法證明TR4可以通過轉(zhuǎn)錄調(diào)控上調(diào)circ_000002的表達(dá),而circ_000002可以和miR-19s-3p、miR-29s-3p結(jié)合,影響其分布進(jìn)而促進(jìn)其下游IGF-1的表達(dá),最終促進(jìn)ccRCC侵襲轉(zhuǎn)移。研究結(jié)論：本研究在ccRCC組織標(biāo)本中發(fā)現(xiàn)TR4在轉(zhuǎn)移性ccRCC中高表達(dá),并在細(xì)胞層面、動(dòng)物層面驗(yàn)證TR4可以促進(jìn)ccRCC侵襲轉(zhuǎn)移,進(jìn)一步在細(xì)胞層面探索其具體機(jī)制發(fā)現(xiàn)TR4可以通過上調(diào)HGF/Met/MMP2/MMP9通路活性促進(jìn)ccRCC侵襲轉(zhuǎn)移,并且發(fā)現(xiàn)其上游分子miR-32-5p可以靶向TR4抑制TR4的表達(dá)及其下游HGF/Met/MMP2/MMP9通路。此外我們也發(fā)現(xiàn)TR4也可以通過上調(diào)circ_000002/miR-19s-3p/miR-29s-3p/IGF-1通路活性促進(jìn)ccRCC侵襲轉(zhuǎn)移。
[Abstract]:Background and objective: clear Cell Renal cell carcinoma (ccRCCs) is a malignant tumor originating from the renal parenchymal urothelial system and a common malignant tumor of the urinary system. The early diagnosis rate is not high, about 30% of them have metastasized at the time of diagnosis and have lost the opportunity of operation. The treatment of metastatic clear cell renal cell carcinoma is mainly dependent on targeted treatment, but its average effective time is only 6-15 months. It is particularly important to study the mechanism of metastasis of renal clear cell carcinoma and to find a better treatment for metastatic renal clear cell carcinoma. In the last two years, we have found that TR4 can promote the migration and invasion of prostate cancer through CCL2/CCR or miR-373-3p. It also affects the ability of prostate cancer stem cells to invade and migrate to promote the metastasis of prostate cancer, We also found that the role of TR4 in promoting chemotherapy resistance and radiotherapy resistance of prostate cancer. TR4 in prostate cancer metastasis and chemoradiotherapy resistance of prostate cancer has gradually been recognized and paid attention to by researchers. However, the role of TR4 in renal cell carcinoma has not been reported. In this study, we explored the role of TR4 in the invasion and metastasis of ccRCC. The expression of TR4 in human ccRCC tissues and cell lines was studied by molecular biology. Correlation with prognosis and its role in ccRCC invasion and Metastasis; the expression of TR4 in metastatic ccRCC patients was significantly higher than that in non-metastatic ccRCC patients by immunohistochemical staining. TCGA database showed that TR4 was negatively correlated with the prognosis of ccRCC patients, and the expression of TR4 was relatively high in ccRCC cell lines with strong invasiveness at the cellular level. The effect of TR4 on the invasion and metastasis of ccRCC was further verified by regulating the expression of TR4 in the cell line. 2. The specific mechanism of promoting the invasion and metastasis of ccRCC by miR-32-5p/TR4/HGF/Met signaling pathway was studied. We used Western blot, CbIPand double luciferase reporter gene experiment. At the cell level, it was demonstrated that TR4 could up-regulate the expression of HGF/Met/MMP2/MMP9 pathway through transcriptional regulation to promote the invasion and metastasis of ccRCC. MiR-32-5p could inhibit the expression of HGF/Met/MMP2/MMP9 in TR4 and TR4 downstream pathway and then inhibit ccRCC invasion and metastasis. And miR-32-5p can inhibit the expression of TR4 by binding with TR43'UTR. Finally, we further verify the results of cell experiment by animal experiments. 3. TR4 can promote the invasion and metastasis of ccRCC through up-regulation of circ_000002/miR-19s-3p/miR-29s-3p/IGF-1 pathway. Enzyme reporter gene experiment, Rescue RNA-pulldown method showed that TR4 could up-regulate the expression of circ_000002 through transcriptional regulation, while circ_000002 could bind to miR-19s-3pnmiR-29s-3p, which affected its distribution and promoted the expression of IGF-1 downstream. In this study, we found that high expression of TR4 in metastatic ccRCC was found in ccRCC tissues, and at the cell level, it was demonstrated that TR4 could promote invasion and metastasis of ccRCC. Further exploring its specific mechanism at the cellular level, we found that TR4 can promote the invasion and metastasis of ccRCC by up-regulating the activity of HGF/Met/MMP2/MMP9 pathway. It was also found that upstream miR-32-5p could target TR4 to inhibit the expression of TR4 and its downstream HGF/Met/MMP2/MMP9 pathway. In addition, we also found that TR4 could promote ccRCC invasion and metastasis by upregulating the activity of circ_000002/miR-19s-3p/miR-29s-3p/IGF-1 pathway.
【學(xué)位授予單位】：浙江大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R737.11

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本文編號：1545801