發(fā)布時(shí)間：2018-02-11 14:08

  本文關(guān)鍵詞： 胰腺星狀細(xì)胞 Hic-5 胰腺癌細(xì)胞 生物學(xué)行為　出處：《西南醫(yī)科大學(xué)》2017年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：目的:通過研究胰腺星狀細(xì)胞(pancreatic stellate cell,PSC)和胰腺癌細(xì)胞共培養(yǎng)體系中胰腺星狀細(xì)胞Hic-5基因表達(dá)下調(diào)對(duì)胰腺癌細(xì)胞的生長增殖、凋亡、侵襲遷移等生物學(xué)行為能力的影響,為Hic-5作為胰腺癌浸潤轉(zhuǎn)移的新興標(biāo)志物的研究及基因靶向治療奠定初步的理論和實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。方法:1.分別以0 pmol(A組)、6.25 pmol(B組)、12.5 pmol(C組)、25 pmol(D組)和50 pmol(E組)的siRNA沉默胰腺星狀細(xì)胞的Hic-5基因,轉(zhuǎn)染6小時(shí)后RT-PCR檢測(cè)各實(shí)驗(yàn)組中胰腺星狀細(xì)胞的Hic-5mRNA表達(dá),免疫熒光法檢測(cè)胰腺星狀細(xì)胞中Hic-5表達(dá);Western blot檢測(cè)各實(shí)驗(yàn)組胰腺星狀細(xì)胞中的Hic-5蛋白表達(dá);2.分別以A組、B組、C組、D組和E組胰腺星狀細(xì)胞與相同的胰腺癌細(xì)胞a組、b組、c組、d組、e組行共培養(yǎng)48h;3.共培養(yǎng)結(jié)束后,采用細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)和Transwell實(shí)驗(yàn)檢測(cè)各組胰腺癌細(xì)胞侵襲遷移能力變化;采用CCK-8(Cell Counting Kit-8)法檢測(cè)各組胰腺癌細(xì)胞增殖率變化;采用流式細(xì)胞法檢測(cè)各組胰腺癌細(xì)胞凋亡率變化;采用免疫熒光法和Western blot檢測(cè)各組胰腺星狀細(xì)胞中MMP-9(matrix metalloproteinases-9,MMP-9)表達(dá)變化。結(jié)果:1.Hic-5表達(dá)在胰腺星狀細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)中,胰腺星狀細(xì)胞Hic-5 mRNA和Hic-5蛋白表達(dá)量隨Hic-5 siRNA轉(zhuǎn)染濃度增大逐漸減少,與A組比較,C組、D組和E組減少明顯,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);各實(shí)驗(yàn)組中胰腺星狀細(xì)胞Hic-5免疫熒光強(qiáng)度隨Hic-5 siRNA轉(zhuǎn)染濃度增大逐漸減少,與A組比較,D組和E組減少明顯,其差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。2.隨著胰腺星狀細(xì)胞Hic-5 siRNA轉(zhuǎn)染濃度增大,與之對(duì)應(yīng)的各組胰腺癌細(xì)胞相對(duì)遷移距離逐漸減小,與a組比較,d組和e組胰腺癌細(xì)胞相對(duì)遷移距離減小明顯,其差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);各組胰腺癌細(xì)胞穿膜細(xì)胞數(shù)逐漸減少,與a組比較,c組、d組和e組胰腺癌細(xì)胞穿膜數(shù)量減少明顯,其差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);各組胰腺癌細(xì)胞凋亡率逐漸增大;各組胰腺癌細(xì)胞增殖率逐漸減小,與a組比較c組、d組和e組胰腺癌細(xì)胞增殖率有顯著減小,其差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);各組胰腺星狀細(xì)胞MMP-9蛋白表達(dá)量和熒光強(qiáng)度逐漸減少,與A組比較,C組、D組和E組細(xì)胞MMP-9蛋白表達(dá)量和免疫熒光強(qiáng)度減少明顯,其差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。結(jié)論:1.Hic-5 siRNA序列在胰腺星狀細(xì)胞中取得較好的轉(zhuǎn)染效率;2.成功建立Hic-5沉默后的胰腺星狀細(xì)胞與胰腺癌細(xì)胞共培養(yǎng)模型;3.Hic-5的siRNA可有效抑制胰腺星狀細(xì)胞中Hic-5的表達(dá),同時(shí)降低其MMP-9蛋白表達(dá);4.胰腺星狀細(xì)胞中Hic-5表達(dá)的下調(diào)可顯著降低胰腺癌細(xì)胞增殖能力,增加胰腺癌細(xì)胞凋亡能力,同時(shí)降低胰腺癌細(xì)胞的侵襲、遷移能力。
[Abstract]:The expression of Hic - 5 mRNA in pancreatic stellate cells was detected by Western blot . Results : 1 . The expression of Hic - 5 mRNA and Hic - 5 mRNA in pancreatic stellate cells were detected by Western blot . Results : 1 . The expression of Hic - 5 mRNA and Hic - 5 mRNA in pancreatic stellate cells was significantly decreased by Western blot . Results : 1 . The expression of MMP - 9 protein in pancreatic stellate cells was decreased and the expression of MMP - 9 protein in pancreatic stellate cells was decreased .

【學(xué)位授予單位】：西南醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：R735.9

【參考文獻(xiàn)】

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1 王楠;楊劍峰;賈振宇;何楊;許春芳;;Matriptase表達(dá)下調(diào)對(duì)胰腺癌細(xì)胞株SW1990侵襲的影響[J];中華胰腺病雜志;2015年04期

2 李波;雷小峰;;Hic-5/ARA55蛋白的研究進(jìn)展[J];國際檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志;2013年01期

3 鐘英強(qiáng);黃花榮;劉娟;林瑩;夏忠勝;昝慧;;siRNA沉默COX-2基因?qū)θ艘认侔〤apan-2細(xì)胞增殖、細(xì)胞周期、凋亡和成瘤能力的影響[J];中國病理生理雜志;2011年07期

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5 高振軍;吳愷;王興鵬;;胰腺星狀細(xì)胞對(duì)胰腺癌AsPC-1細(xì)胞侵襲轉(zhuǎn)移的影響[J];中華胰腺病雜志;2013年04期

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本文編號(hào)：1503240