本文關(guān)鍵詞：胃癌中KIF26A的異常表達及其機制研究　出處：《山東大學(xué)》2015年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

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【摘要】：背景：驅(qū)動蛋白(Kinesin)是一類馬達蛋白,利用ATP水解釋放的能量,使其自身及裝運的貨物沿微管運動,參與細胞內(nèi)物質(zhì)運輸。此外,驅(qū)動蛋白還參與細胞的分裂,與信號轉(zhuǎn)導(dǎo)有關(guān)。目前,越來愈多的研究表明,部分驅(qū)動蛋白在腫瘤中異常表達,影響腫瘤的發(fā)生發(fā)展。KIF26A是驅(qū)動蛋白超家族的非典型成員,缺乏ATP酶活性,參與腸神經(jīng)元系統(tǒng)的發(fā)育,但其與腫瘤的關(guān)系仍未有報道。胃癌是人類常見的惡性腫瘤,易發(fā)生浸潤轉(zhuǎn)移,術(shù)后生存時間較短,嚴重危害人類健康,而其發(fā)生發(fā)展的機制及診斷治療仍需進一步研究和探討。本研究檢測了KIF26A在人體胃癌組織標本中的表達,通過細胞學(xué)實驗驗證KIF26A的在腫瘤發(fā)生發(fā)展中的生物學(xué)功能,研究KIF26A在胃癌組織中低表達的機制,并初步探索KIF26A發(fā)揮功能的機制。方法：收集新鮮的胃癌及正常胃粘膜組織標本,整理相關(guān)臨床資料,根據(jù)癌與非癌、有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移將標本分為轉(zhuǎn)移組、非轉(zhuǎn)移組和正常組。提取RNA并逆轉(zhuǎn)錄,之后采用實時熒光定量PCR (RT-qPCR)檢測各組KIF26A mRNA的表達。免疫組織化學(xué)檢測胃癌石蠟標本中KIF26A蛋白的表達,分析KIF26A與胃癌患者臨床病理參數(shù)的關(guān)系。應(yīng)用KIF26A的小干擾RNA瞬時轉(zhuǎn)染胃癌細胞系SGC7901和BGC823,然后通過Transwell實驗檢測細胞遷移與浸潤能力的改變,MTS、 EDU實驗檢測兩株細胞增殖能力的改變。通過生物學(xué)軟件預(yù)測可與KIF26A 3'UTR結(jié)合的miRNA,并對其進行雙熒光素酶報告基因和Western-blot實驗驗證。干擾KIF26A的表達后,通過全基因組表達譜芯片技術(shù),檢測差異性表達的基因,并進行KIF26A下游信號通路分析。結(jié)果：(1)實時熒光定量檢測顯示：在胃癌組織中KIF26A的表達降低,在轉(zhuǎn)移胃癌組織中其表達進一步降低。(2)臨床病理參數(shù)分析顯示：KIF26A的表達與胃癌的分化程度、Lauren分型、臨床分期和預(yù)后相關(guān)。KIF26A低表達,胃癌分化差,臨床分期差,術(shù)后生存時間也較短。(3)細胞功能學(xué)實驗：轉(zhuǎn)染KIF26A干擾RNA后,其表達水平明顯降低。后續(xù)Transwell實驗證明,干擾KIF26A后,細胞的遷移、浸潤能力較對照組明顯升高。MTS及EDU實驗顯示,抑制KIF26A,細胞的增殖能力無明顯變化。以上結(jié)果提示我們,KIF26A可以抑制胃癌細胞的遷移與浸潤。(4)上游miRNA的預(yù)測與驗證：通過Pictar、TargetScan和Miranda軟件預(yù)測作用于KIF26A3'UTR區(qū)的miRNA,通過相關(guān)文獻分析,選定4個miRNA。經(jīng)過雙熒光素酶實驗和Western-blot實驗,證實miR-19a、miR-96與KIF26A 3'UTR區(qū)結(jié)合,并且下調(diào)KIF26A的表達。(5)信號通路分析表明：KIF26A可能通過Focal Adhesion通路發(fā)揮作用。結(jié)論：miR-19a、miR-96與KIF26A相互作用,使其在胃癌組織中表達水平降低。胃癌組織中KIF26A蛋白的表達與預(yù)后相關(guān),KIF26A高表達者生存率遠高于低表達者,KIF26A的低表達可以提示預(yù)后不良。細胞功能學(xué)實驗提示,KIF26A在胃癌的浸潤轉(zhuǎn)移中發(fā)揮抑制作用。KIF26A可能通過Focal Adhesion通路發(fā)揮作用。
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【學(xué)位授予單位】：山東大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R735.2

【參考文獻】

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1 Pei-Fei Li;Sheng-Can Chen;Tian Xia;Xiao-Ming Jiang;Yong-Fu Shao;Bing-Xiu Xiao;Jun-Ming Guo;;Non-coding RNAs and gastric cancer[J];World Journal of Gastroenterology;2014年18期

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本文編號：1352271